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摘要：本試驗旨在研究飼料中添加植物精油對凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)生長性能、體成分、血清生化指標及腸道絨毛的影響。試驗共配制5種試驗飼料,試驗飼料中植物精油的添加量分別為0、0、0.02%、0、0.02%,對應的魚粉含量依次為25%(對照組)、22%、22%、19%、19%。選取初重為(0.33±0.01) g的凡納濱對蝦750尾,隨機分為5組(每組5個重復,每個重復30尾),分別飼喂1種試驗飼料,試驗期為8周。結果表明:降低飼料魚粉含量的同時添加植物精油可顯著升高凡納濱對蝦的增重率(WGR)、特定生長率(SGR)、蛋白質效率(PER)(P < 0.05),但對存活率(SR)、肝體比(HSI)無顯著影響(P > 0.05)。添加植物精油的2個組的飼料效率(FE)與對照組無顯著差異(P > 0.05),未添加植物精油的2個組的FE均顯著低于對照組(P < 0.05)。此外,添加植物精油的2個組的WGR、SGR、PER仍顯著低于對照組(P < 0.05)。各組凡納濱對蝦的全蝦和肌肉營養成分及血清生化指標均無顯著差異(P > 0.05)。透射電鏡觀察中腸超微結構發現,與未添加植物精油相比,飼料中添加植物精油能顯著改善凡納濱對蝦腸道絨毛脫落狀況。由此得出,在降低魚粉含量的情況下,飼料中添加0.02%的植物精油能夠改善凡納濱對蝦的生長性能及腸道健康。

凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)原產于南太平洋沿岸的暖水水域，分類學上隸屬節肢動物門(Arthropoda)，甲殼綱(Crustacea)，對蝦屬(Penaeus)，具有生長迅速、廣鹽性、廣溫性、肉質鮮美、營養需求低等特點[1]。凡納濱對蝦自1988年引進中國大陸，并于20世紀90年代成功實現了凡納濱對蝦的人工繁育[2]，現已經得到大面積推廣，并成為我國三大對蝦的首選養殖品種，也是目前世界上養殖產量最高的對蝦品種[3, 4]。魚粉因其具有均衡的氨基酸、礦物質、維生素及較好的適口性成為水產動物配合飼料的重要組成部分，并且凡納濱對蝦的生長高度依賴于魚粉[5]，在世界范圍內的水產養殖種類中，對蝦養殖消耗的魚粉量最大，占水產飼料消耗魚粉量的24%~27%[6]，但是魚粉是一種有限資源，從1985年開始魚粉的產量一直穩定在700萬t左右[7]，因而成為制約水產養殖業可持續發展的重要瓶頸。為了解決魚粉資源短缺問題，許多研究者尋找合適的原料，如肉骨粉、蠅蛆粉、藻粉、豆粕等，來替代凡納濱對蝦配合飼料中的魚粉，但當替代魚粉達到一定水平后，凡納濱對蝦的生長性能及飼料利用就會受到影響[8, 9, 10]，因此尋找一種新的途徑來節省魚粉的使用具有重要意義。

植物精油是由植物中提取的植物次生產物，能夠被完全降解，不會給環境和食品安全帶來危害[11]，因其具有抗菌、防腐、殺蟲、抗氧化的作用而被廣泛應用于食品、制藥、衛生、化妝等行業[12, 13]。隨著水產養殖的規模化和集約化，水環境日益惡化，水產動物免疫力下降、疾病頻發，越來越多的研究人員開始關注植物性產品的功能，在對鯽魚(Carassius auratus)、軍曹魚(Rachycentron canadum)、鯉魚(Cyprinus carpio)、凡納濱對蝦、大菱鲆(Tarphops oligolepis)、虹鱒(Oncorhynchus mykiss)、建鯉(Cyprinus carpio var. Jian)及大黃魚(Pseudosciaena crocea)的研究中均表明植物精油產品不僅能夠增強水產動物的免疫力，而且對水產動物的腸道菌落結構、肌肉品質有一定影響[14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23]，但缺乏其對魚粉節省效應的研究。因此，本試驗擬以25%的魚粉含量為對照，同時設22%和19% 2個低魚粉含量，研究降低魚粉含量的同時添加植物精油對凡納濱對蝦生長性能、體成分、血清生化指標及腸道超微結構的影響，以期通過添加植物精油來節約凡納濱對蝦養殖中魚粉的用量。

以魚粉、豆粕(溶劑浸出法制備)和花生粕為主要蛋白質源，魚油、豆油和大豆卵磷脂為主要脂肪源，配制出粗蛋白質含量為40%、粗脂肪含量為9%的5種試驗飼料(D1～D5，D1為對照)，試驗飼料中植物精油的添加量分別為0、0、0.02%、0、0.02%，對應的魚粉含量依次為25%、22%、22%、19%、19%。植物精油為由百奧明添加劑有限公司提供的PEP-MGE，主要為柑橘油、牛至油等的混合油。試驗飼料組成及營養水平見表1，按照配方將各種固態原料混合后過80目篩，維生素和礦物質等微量組分采用逐級擴大法混合，再加入魚油、豆油和大豆卵磷脂以及水混合均勻，用雙螺桿擠條機壓制成粒徑為1.0和1.5 mm的顆粒飼料，90 ℃烘箱中熟化30 min，自然風干，飼料密封后放入-20 ℃冰箱中保存，測得各試驗飼料的必需氨基酸組成見表2。

養殖試驗于廣東恒興飼料集團東海島試驗基地進行，蝦苗來源于恒興蝦苗場孵化的進口１代苗。正式試驗前先將所需蝦苗暫養于室外水泥池（２ｍ×２ｍ×１ｍ）中，待蝦苗長至接近試驗規格時，將其轉入正式試驗的室內養殖系統（３００Ｌ水體的圓桶形玻璃鋼桶）中繼續暫養２周。暫養期間幼蝦根據蝦苗規格先后投喂豐年蟲、蝦片、恒興牌凡納濱對蝦開口料及０號料；試驗分組前２４ｈ蝦苗停止喂食，挑選體質健壯、規格基本一致、初重為（０．３３±０．０１）ｇ的凡納濱對蝦７５０尾，隨機分為５組（每組５個重復，每個重復３０尾），分別飼喂１種試驗飼料，試驗期為８周。試驗期間每天于０７：００、１１：００、１７：００和２１：００各投喂１次，投喂１ｈ后觀察對蝦攝食情況，并根據攝食情況適當調整投喂量。試驗用水為經砂濾、沉淀后的海水，連續充氣，每天記錄水溫，每周測定鹽度、溶解氧濃度及ｐＨ。試驗期間水溫為（２６．７ ±１．３） ℃ ，水體ｐＨ為７．７ ± ０．１，鹽度為（１９．４ ± １．７）‰，溶解氧濃度＞６．０ｍｇ／Ｌ，氨氮濃度≤０．０５ｍｇ／Ｌ。

試驗結束后饑餓２４ｈ，稱重并記錄存活尾數，計算生長性能指標。每桶隨機取６尾對蝦，保存于－２０ ℃ 冰箱，用于體成分分析；每桶另隨機取１０尾對蝦，單獨稱體重后，于第５步足基部血竇取血，盛于１．５ｍＬ離心管中，混合后于４ ℃ 冰箱放置過夜后，５０００ｒ／ｍｉｎ離心１０ｍｉｎ，取上清液置于－８０ ℃ 冰箱備用。取每桶取血后的３尾對蝦剝離肝胰腺并稱重、記錄數據，然后取其平均值，作為該桶對蝦的肝體比；剩余部分取肌肉，保存于－２０ ℃ 冰箱；另取一部分對蝦的腸道進行掃描電鏡觀察。

由表３可知，同一魚粉含量下，添加植物精油的組的ＷＧＲ、ＳＧＲ和ＰＥＲ均顯著高于未添加植物精油的組（Ｐ＜０．０５），但上述４組均顯著低于對照組（Ｐ＜０．０５）；同一魚粉含量下，添加植物精油的組的ＦＥ均高于未添加植物精油的組（Ｐ＞０．０５），且與對照組無顯著差異（Ｐ＞０．０５），未添加植物精油的組均顯著低于對照組（Ｐ＜０．０５）；各組凡納濱對蝦的ＳＲ和ＨＳＩ無顯著差異（Ｐ＞０．０５），且ＳＲ均在９６％以上。

近年來，科學家發現精油對動物的消化系統具有促進作用［２７－２８］，但沒有試驗證明植物精油能夠提高凡納濱對蝦的生長性能。本研究發現，降低飼料中魚粉含量后，未添加植物精油的組凡納濱對蝦的生長性能變差，添加植物精油的組凡納濱對蝦的生長性能得到提高，其ＦＥ甚至達到對照組水平。本研究中，隨著飼料中魚粉含量的降低，豆粕和花生粕的含量均上升，劉立鶴等［２９］研究發現飼料中花生粕的含量在２０％以下時對凡納濱對蝦的

生長性能沒有顯著影響，而另有研究表明豆粕中較高的抗營養因子不僅會降低水產動物的增重率和飼料利用率［３０－３３］，還會引起腸道菌落結構的改變［３４－３５］。本試驗中每種飼料中花生粕的含量均低于２０％，這可能暗示著飼料中過多的豆粕會引起腸炎，從而導致腸道結構病理性變化。Ｂｒｕｎｅｔ等［３６］認為甲殼動物的消化道根據重要性可以分為前腸、中腸、后腸３個部分，其中前腸和尾腸的內表層被殼丁質覆蓋，在消化過程中不起重要作用，并且腸道微絨毛與腸道結構之間關系復雜，對營養吸收也具有重要作用［３７］。本研究中發現，隨著飼料中添加植物精油，凡納濱對蝦腸道絨毛脫落狀況得到改善，且同一魚粉含量下，添加植物精油的組凡納濱對蝦的生長性能要優于未添加植物精油的組。植物精油之所以能夠改善腸道絨毛脫落狀況，可能是因為其能夠有效抑制凡納濱對蝦腸道有害細菌生長，調節菌落的平衡，提高營養吸收效率。研究表明，植物精油對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌等均具有一定殺菌活性［３８－４１］。Ｙｅｈ等［２２］發現，牛樟提取物能夠有效抑制病原菌，并增強凡納濱對蝦自身免疫力和抗病力。Ｇｉａｎｎｅｎａｓ等［２１］發現，與對照組相比，飼料中添加香芹酚或麝香草酚能夠提高虹鱒的飼料利用效率，并減少其腸道內的厭氧細菌的數量。目前植物精油的抗菌機制仍未確定，主要有３種解釋：一是作為典型的親脂性物質，能夠穿過細菌細胞壁及細胞膜并損壞其結構，進而引起細菌內部大分子的泄露，致使細菌溶解；二是影響脂質層穩定，溶解胞體中的脂肪體；三是影響能量代謝及還原酶系。

動物處于正常生理狀態下，機體能夠維持各項生理指標的動態穩定，而血液組成的變化在一定程度上能夠反映出動物此時的健康狀態［４７］，其中膽固醇和甘油三酯是血脂的重要組成部分，且都主要在肝臟中合成，因此血清膽固醇和甘油三酯含量的變化在一定程度上能夠反映肝臟的某些生理功能是否正常。血糖是動物重要的能量來源，并且可以作為物理脅迫因子的指標［４８］。本研究發現，各組凡納濱對蝦的血清膽固醇、甘油三酯、葡萄糖和總蛋白含量均無顯著差異，表明飼料中添加植物精油不會破壞凡納濱對蝦的正常生理狀態。谷草轉氨酶（ＡＳＴ）和谷丙轉氨酶（ＡＬＴ）活性是反映肝臟損傷程度的指標，是機體代謝必不可少的酶類，在平衡機體氨基酸“池”以及蛋白質、脂肪與糖之間物質轉化中發揮非常重要的作用［４９］，血清中ＡＬＴ和ＡＳＴ活性的高低在一定程度上可以反映肝細胞損傷的程度［５０］；堿性磷酸酶（ＡＫＰ）是一種膜結合蛋白，與甲殼動物海水中磷質與鈣質的吸取、磷酸鈣的生成、甲殼素的形成和分泌直接相關，并且能夠與其他水解酶類構成解毒體系，在甲殼動物非特異免疫中發揮著重要作用［５１］，并且還可以通過測定血淋巴中的ＡＫＰ活性的高低來判斷對蝦非特異免疫機能的強弱［５２］；乳酸脫氫酶（ＬＤＨ）廣泛存在于動物機體組織中，當組織細胞壞死時，該酶在血清中增加，是水生動物重要的同工酶之一［５３］。本研究發現，各組凡納濱對蝦的血清ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＫＰ和ＬＤＨ活性均無顯著差異，表明飼料中添加植物精油不會對凡納濱對蝦的非特異性免疫及正常生理狀態造成不良影響。

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