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畜牧人

標(biāo)題: 高免血清及卵黃抗體的制備技術(shù) [打印本頁]

作者: gl83 時(shí)間: 2007-2-10 17:53
標(biāo)題: 高免血清及卵黃抗體的制備技術(shù)
免疫血清　　1.動(dòng)物的選擇 可作為免疫用的動(dòng)物多為哺乳類和禽類，主要有家兔、綿羊、馬、豬、驢、豚鼠和雞等，其中實(shí)驗(yàn)常用家兔、綿羊、雞和豚鼠。選擇動(dòng)物時(shí)要注意以下幾個(gè)方面：
　　a.抗原與動(dòng)物種系  動(dòng)物性抗原的免疫原性，隨動(dòng)物種系遠(yuǎn)近而有差別。近緣動(dòng)物的蛋白質(zhì)免疫原性弱，反之則強(qiáng)。因此選擇動(dòng)物時(shí)應(yīng)選用親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的動(dòng)物。
　　b.免疫血清的用量  所需要的免疫血清，如是經(jīng)常大量地使用，選擇免疫動(dòng)物時(shí)則應(yīng)選擇大動(dòng)物；如所需的免疫血清量不大，則以選擇小動(dòng)物為宜。
　　c.動(dòng)物的個(gè)體狀態(tài)  用于免疫的動(dòng)物必須是適齡、健壯、無感染的動(dòng)物。免疫過程中應(yīng)特別注意營養(yǎng)和衛(wèi)生管理。注射抗原1個(gè)月后，動(dòng)物仍無良好的抗體反應(yīng)，或在規(guī)定注射日程后抗體效價(jià)不高，可再注射l～2次，若仍不佳者立即棄去．　　2.抗原制備與接種 制造抗血清，根據(jù)產(chǎn)品不同,所用抗原、制法亦有所不同。病毒性抗血清，一般是用本動(dòng)物的含毒組織作抗原，首先把強(qiáng)毒接種本動(dòng)物，使其發(fā)病，采取其含毒性組織作為抗原，注射于免疫動(dòng)物。細(xì)菌性血清，是用抗原性好的強(qiáng)毒或弱毒菌種，接種于規(guī)定培養(yǎng)基內(nèi)，于37℃培養(yǎng)，細(xì)菌發(fā)育良好者，以純粹檢驗(yàn)后用作抗原。
抗原接種：動(dòng)物在免疫過程中分為基礎(chǔ)免疫及高度免疫?；A(chǔ)免疫一般是注射疫苗，然后連續(xù)多次注射強(qiáng)毒進(jìn)行高度免疫，每次注射劑量，要隨著注射次數(shù)的增加而增加。接種抗原的次數(shù)和劑量，應(yīng)根據(jù)制造抗血清的品種和動(dòng)物健康情況加以調(diào)整。為了獲得效價(jià)高的抗血清，動(dòng)物飼養(yǎng)條件必須保持良好?！　?strong>3.血清抗體的檢測免疫程序接近結(jié)束時(shí)，測定血清的抗體效價(jià)，如果效價(jià)已達(dá)規(guī)定的要求，即可視作免疫成功，開始采血。若經(jīng)試血，血清效價(jià)不合格，則可繼續(xù)增加注射抗原次數(shù)或劑量，如再試血仍不合格，應(yīng)將動(dòng)物淘汰。
測定免疫血清效價(jià)是及時(shí)掌握采血時(shí)機(jī)的重要步驟。常用的有環(huán)狀沉淀反應(yīng)(包括抗原稀釋法和抗體稀釋法)和雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。
用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)測定血清效價(jià)時(shí)，如果在抗原孔與抗體孔之間出現(xiàn)沉淀線者，即為陽性。最高稀釋倍數(shù)血清孔出現(xiàn)沉淀線，即為該血清的抗體效價(jià)。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的效價(jià)通常比環(huán)狀沉淀反應(yīng)稍低?！　?strong>4.血清采集與提取免疫后，經(jīng)試血，抗體滴度達(dá)到要求后可采血。動(dòng)物采血應(yīng)在上午空腹時(shí)進(jìn)行，禁食一夜，可避免血中出現(xiàn)乳糜而獲得澄清的血清。不論免疫動(dòng)物是大動(dòng)物或小動(dòng)物，采血方法均分一次放血和多次放血法兩種。
　　a.一次放血  綿羊或其他大動(dòng)物可用頸動(dòng)脈放血，家兔、豚鼠和雞則可通過心臟直接采血。
　　b.多次少量放血法  大動(dòng)物可通過靜脈采血，家兔、豚鼠和雞等小動(dòng)物可通過心臟采血。
免疫血清的分離應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行，并應(yīng)盡量防止溶血。采血用的器械、容器等用前要進(jìn)行滅菌，以無菌操作采血，注入斜放的大試管或三角瓶內(nèi)，待凝固后分離血清，將多份分離出的血清混合，待檢?！　?strong>5.免疫血清的檢驗(yàn) 免疫血清的檢驗(yàn)包括無菌檢驗(yàn)、安全檢驗(yàn)和效力檢驗(yàn)。無菌檢驗(yàn)按成品檢驗(yàn)的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行；安全檢驗(yàn)通常用體重18～22g的健康小白鼠5只，各皮下注射血清0.5ml，用體重250～450g的健康豚鼠2只，各皮下注射血清10ml，觀察10天，均應(yīng)健活，效力檢驗(yàn)則按各種抗血清規(guī)定方法進(jìn)行。
卵黃抗體
　　免疫血清和卵黃抗體是緊急預(yù)防和早期治療相應(yīng)傳染病的有效制劑。為了降低成本，增加產(chǎn)量，提高治療效果，對健康母雞進(jìn)行法氏囊病高度免疫，取其卵黃來防治法氏囊病,不但省去殺雞分離血清的麻煩，而且具有產(chǎn)量高、效果好、價(jià)格便宜等優(yōu)點(diǎn)?，F(xiàn)以法氏囊病為例，簡要闡明高免卵黃抗體的制備。
1.制造用雞的選擇 選擇健康的蛋雞，隔離飼養(yǎng)觀察l周后無特殊反應(yīng)者，方可免疫。
　　2.疫苗免疫 通常使用組織滅活苗，其制備過程如下：
　　a.制備雞的選擇　選40～50日齡SPF雞，用通過SPF雞傳代的野毒滴鼻、點(diǎn)眼，每只雞接種0.2～0.3ml，在48～72h左右死亡的雞，無菌采集其法氏囊，并作病變觀察，將病變典型的法氏囊低溫保存?zhèn)溆谩?br /> 　　b.制苗　取10g病料加100ml0.5％甲醛生理鹽水，勻漿、凍融、過濾，濾液加8％甘油，置37℃18～24h滅活，即為水劑滅活苗，也可加白油等佐劑，制成油乳劑滅活苗。
　　c.無菌檢驗(yàn)　取滅活苗0．5ml接種于普通瓊脂斜面及厭氧肉湯培養(yǎng)基各一支，于37℃培養(yǎng)48h，應(yīng)無菌生長。
　　d.安全試驗(yàn)及保護(hù)試驗(yàn)　經(jīng)無菌檢驗(yàn)合格的滅活苗，給40～50日齡SPF雞或未經(jīng)法氏囊疫苗免疫過的健康雞，肌肉注射、滴鼻、點(diǎn)眼、接種0.3～0.5ml，觀察半月，無法氏囊病發(fā)生者，可用1：10強(qiáng)毒0.5ml／只攻毒，觀察l0～14天，無發(fā)病者為安全有效。
　　免疫程序　第一次免疫，每只雞肌肉注射lml，經(jīng)7～10天后進(jìn)行第二次免疫，每只雞2ml，7天后用瓊脂擴(kuò)散方法測定卵黃抗體效價(jià)，如已達(dá)到1：64以上，即可收集高免蛋，如效價(jià)不高，可隔7～l0天進(jìn)行第三次加強(qiáng)免疫。　　3.高免卵黃抗體的制備
　　a.高免蛋的處理　高免蛋用0.1％新潔爾滅溶液浸泡5min，洗滌干凈，放入無菌室晾干備用。
　　b.分離卵黃　無菌操作，打破蛋殼，分離蛋黃。
　　c.卵黃勻漿　收集的蛋黃置無菌的組織勻漿器中，加等量滅菌生理鹽水，并按每毫升加入青霉素、鏈霉素各1000單位，硫柳汞1.0／萬，勻漿、過濾,分裝消毒瓶內(nèi)，4℃冷藏備用。　　4.高免卵黃抗體的檢驗(yàn)
　　a.無菌檢驗(yàn)　取0.5ml高免卵黃抗體，分別接種于普通瓊脂斜面和厭氧肉肝湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24～48小時(shí)，應(yīng)無細(xì)菌生長。
　　b.安全檢驗(yàn)　取30日齡健康雞10只，每只雞肌注卵黃抗體2ml，觀察5～7天，應(yīng)無任何不良反應(yīng)。
　　c.中和試驗(yàn)　取30日齡健康雞20只，隨機(jī)分成2組。試驗(yàn)組每只雞皮下或肌肉注射野毒和卵黃抗體（1：10)混合液1ml，觀察飼養(yǎng)10～15天，應(yīng)全部存活，對照組每只雞皮下或肌肉注射野毒1ml，觀察10～15天，應(yīng)部分或全部死亡，剖檢后出現(xiàn)典型病變。
　　d.卵黃抗體效價(jià)測定　用瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)測定，抗體效價(jià)應(yīng)在1：64以上。

作者: ⒉冄⑧號 時(shí)間: 2009-6-22 22:23
實(shí)用一些的有嗎而不是書本上的知識

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