麻豆av一区二区_爽好多水快深点欧美视频_2021久久国产精品不只是精品_一区二区国产精品_中文字幕欧美区_亚洲欧洲精品成人久久奇米网_欧美精品在线一区二区_中文字幕亚洲字幕_国产精品久久久久久婷婷天堂_国产伦精品一区二区三区免

畜牧人

標(biāo)題: 精子分離性別控制技術(shù)的研究 [打印本頁(yè)]

作者: 牧童 時(shí)間: 2007-9-1 19:49
標(biāo)題: 精子分離性別控制技術(shù)的研究
如何能很迅速地一次分離足夠正常人工授精的精子數(shù)目，而且不損及其精子活力和型態(tài)，更不影響其授精後的生育能力，此為往後分離精子必須改進(jìn)努力的目標(biāo)。

一、前言

各種動(dòng)物因性別之不同而其生理解剖上亦有所差異，因此在飼養(yǎng)上和市場(chǎng)的價(jià)格上的經(jīng)濟(jì)收益差異也很大。在理論上動(dòng)物公母之性比例約在 1：1，所以在自然狀況下之性比例也只有公母各半的機(jī)率。

近二十年來(lái)有關(guān)動(dòng)物性別的控制技術(shù)已有相當(dāng)程度的進(jìn)展，其中如利用體外授精，核移置和細(xì)胞融合技術(shù)之發(fā)展已可獲得正常懷孕和分娩仔豬的報(bào)告，因體外授精、核移置和細(xì)胞融合技術(shù)之發(fā)展則大量增加了胚胎的來(lái)源，則胚胎之性別控制上可應(yīng)用細(xì)胞學(xué)的方法或胚胎顯微分切來(lái)檢定性染色體，在胚胎分裂發(fā)育至適合於移置時(shí)給予性別鑒定始再行移置，但是，因使用染色體以檢定性別的檢出率低，檢定的時(shí)間長(zhǎng)，往往也因胚胎難免受損而使移置後其受胎率降低。

其他性別鑒定的方法如 H Y 抗原已證實(shí)可應(yīng)用在牛、綿羊和豬等家畜，使用此項(xiàng)技術(shù)在胚胎性別鑒定的準(zhǔn)確率分別為 77 88% 和 82 89%，正確性相當(dāng)高。此項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用在牛胚胎或單胎動(dòng)物胚胎上有其實(shí)質(zhì)上的經(jīng)濟(jì)效果，但如應(yīng)用在豬胚胎，因其性別準(zhǔn)確率不如單胎動(dòng)物，所以其經(jīng)濟(jì)效益上無(wú)法與單胎動(dòng)物相抗衡。

在性別控制技術(shù)上另一種方法是精子中具有 X 和 Y 染色體的分離。在人類和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物方面已有相當(dāng)程度的成功率，但是利用這些技術(shù)應(yīng)用在家畜的精子分離，則因參與的動(dòng)物頭數(shù)不多或未能重復(fù)試驗(yàn)致使缺乏說(shuō)服力。近幾年來(lái)使用精子來(lái)控制性別比較有理論根據(jù)的學(xué)者有美國(guó)農(nóng)業(yè)部的 Dr. Johnson 等人，( 1989；1991 )。他們以測(cè)定脫氧核甘酸 ( DNA ) 含量多寡的方法來(lái)判定其性別。其過(guò)程為將精子置入流動(dòng)測(cè)定儀 ( Folw Cytometer ) 分離含有 X 染色體和 Y 染色體的精子。并已將分離的兔和豬精子經(jīng)由輸卵管授精法獲得生產(chǎn)特定性別之動(dòng)物，此方法也是迄今為止分離精子性別比較精準(zhǔn)的方法。

二、胚胎性別鑒定方法

(1)細(xì)胞學(xué)鑒定方法

此方法為抽取胚胎內(nèi)的細(xì)胞經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)後在辨別 X 或 Y 染色體。因此方法抽取胚胎內(nèi)的細(xì)胞時(shí)有損及胚胎之存活，致使經(jīng)移置後其成功率很低。

(2)性核染質(zhì) ( Sex chromatin ) 性別鑒定方法

從 5.75 天囊胚期胚胎抽取 200 ~ 300 個(gè)滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞 ( Strophectodermal cells )，將細(xì)胞固定和染色後鑒定 Barr body 的存在與否來(lái)判定其性別。用此方法鑒定性別有很高的精準(zhǔn)率，但是胚胎的存活率卻很低 ( 16.5% )。

(3)後期胚胎組織切片性別鑒定

將 12 ~ 14 天之孵化囊胚期胚胎抽取 0.5 mm2 之滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞，組織切片細(xì)胞給予適當(dāng)培養(yǎng)後，使用核型鑒定方法來(lái)判定其性別，經(jīng)移置其受胎率很低 ( 38% )。

(4)早期胚胎組織切片性別鑒定方法

將 6 ~ 8 天孵化前之胚胎抽取少許滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞組織切片，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)後，再用核型鑒定方法來(lái)判定其性染色體。因此方法鑒定性別有 59% 的胚可以判定性別，但其分娩後仔畜性別之正確率僅 33%。

(5)半切胚的方法鑒定性別

將 6 ~ 7 天的胚胎分切成兩半，經(jīng)體外適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)後，使用核型鑒定方法來(lái)判定性染色體。以此方法鑒定性別有 60% 之半切胚可被鑒定性別。

(6) X Linked 酵素的偵測(cè)方法

以雌胚比雄胚生產(chǎn)較多之 X Linked 酵素的特性來(lái)判別 X 或 Y 胚之方法。用此方法有 64% 之準(zhǔn)確率。

(7)使用免疫之方法選擇胚之性別 ( H Y antigen )

H Y 抗原為雄胚特有之蛋白質(zhì)，經(jīng)螢光染色後可以進(jìn)行性別鑒定。由於方法不需要抽離細(xì)胞，而且在螢光照射下的時(shí)間也很短 ( 無(wú)傷害 )，經(jīng)移置後其受胎率不受影響。此方法鑒定性別可達(dá) 80% 的準(zhǔn)確率。

(8) Y 染色體特別基因探針

利用雄性特有之 Y 染色體基因探針可檢測(cè)出 57% 之細(xì)胞組織，其性別檢測(cè)的準(zhǔn)確率可高達(dá) 95%。因此方法必須抽取細(xì)胞檢測(cè)，胚受損率高，致使影響移置後的受胎率很大。近年來(lái)國(guó)外正嘗試?yán)?Polymeric Chain Reaction ( PRC ) 技術(shù)企圖盡量減低對(duì)胚胎的傷害程度以便提高移置的受胎率。但此方法必須與儀器配合，故想見(jiàn)其花費(fèi)的費(fèi)用極為昂貴。

三、精子性別鑒定方法

(1)牛血清白蛋白 ( BSA ) 液相分層分離法

因人類 X 和 Y 精子的大小和比重上有差異，所以經(jīng)此方法可以分離試驗(yàn)動(dòng)物和人類 X 和 Y 精子。1982 年 Beernnink and Ericsson 曾經(jīng)使用此技術(shù)成功地分離人 X 和 Y 精子。但是利用此技術(shù)分離牛的 X 和 Y 精子，并將分離之精子給予授精、分娩，出生之仔畜性別則無(wú)明顯的差異。

(2)免疫方法

利用雄性動(dòng)物細(xì)胞表面持有特別之蛋白質(zhì) ( H Y 抗原 )。并以免疫之方法生產(chǎn) H Y 抗體血清，在配合螢光染色技術(shù)可以辨別 X 和 Y 精子。利用此技術(shù)分離鼠和兔子 X 和 Y 精子則可獲得相當(dāng)程度的性別改變 ( 母鼠 54.6%；母兔 63% )。

(3) Flow Cytometric 儀分離方法

利用 Flow Cytometric 儀測(cè)定哺乳動(dòng)物精子 DNA 含量已有報(bào)告 ( Garner et al., 1983 ; Johnson et al., 1985 ; Johnson et al., 1987 )。而且 Pinkel et al., 1982 年亦曾發(fā)現(xiàn) X 精子 DNA 含量多過(guò) Y 精子 4%。

在早期使用 Flow Cytometric 儀分離 X 和 Y 精子前必須將精子的尾巴細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜棄掉，所以分離出來(lái)的 X 和 Y 精子是死的，以致無(wú)法作為授精之用。但是近兩年來(lái)美國(guó)農(nóng)業(yè)部生理專家強(qiáng)生博士等研究人員已可將已經(jīng)分離而且有活力的活精子使用輸卵管授精法給予授精母兔和母豬，并成功生產(chǎn)活的仔畜 ( 表 1、2 )。

表 1 兔子預(yù)選 X 和 Y 精子以及經(jīng)由輸卵管授精仔兔之性比例
精子處理別	頭數(shù)		出生仔兔頭數(shù) 和百分率
	授精數(shù)	分娩數(shù)	預(yù) 選		生產(chǎn)
			公 (%)	母 (%)	公 (%)	母 (%)
Y 精子 X 精子混合 X 和 Y 精子<--mstheme-->	16 14 17	5 3 5	81 14 50	19 86 50	17 (81) 1 (6) 6 (43)	4 (19) 15 (94) 8 (57)
合計(jì)	47	13	---	---	24 (47)	27 (53)
資料來(lái)源：Johnson et al., 1989. Biology of Reproduction 41：199-203 * ：每邊輸卵管注入 3×105 之精子

表 2 預(yù)選豬 X 和 Y 精子以及經(jīng)由輸卵管授精後仔豬之性比例
精子處理別	授精頭數(shù)／分娩頭數(shù)	仔豬生產(chǎn) 頭數(shù)	平均每窩產(chǎn)仔頭數(shù)
				預(yù) 選		生產(chǎn)
				公 (%)	母 (%)	公 (%)	母 (%)

Y 精子 X 精子不分離染色不分離不染色	8／4 10／5 11／5 7／5	37 34 40 46	9.3 6.8 8.0 9.2	77 20 50 50	23 80 50 50	68 26 43 52	32 74 57 48
資料來(lái)源：Johnson et al., 1989. Biology of Reproduction 41：199 - 203 *：每邊輸卵管注入 3×105 之精子

四、結(jié) 語(yǔ)

動(dòng)物子代性別的控制，迄今仍為生殖生理學(xué)家和動(dòng)物研究人員欲努力的目標(biāo)。雖然有眾多報(bào)告宣稱已獲得了某種程度的成功。甚至於申請(qǐng)過(guò)專利 ( 人 )。但據(jù)了解迄今在動(dòng)物方面仍然沒(méi)有一種可隨心所欲或一致的方法先預(yù)知出生前的性別。

因出生前能預(yù)先知道動(dòng)物性別有下列的好處：(1)可以加速遺傳改進(jìn)。(2)提高生產(chǎn)效益和增加經(jīng)濟(jì)效益。(3)畜群飼養(yǎng)管理簡(jiǎn)易。在前述的胚胎性別鑒定方法中，雖然有數(shù)種方法可預(yù)先測(cè)定胚胎之性別，而且其精確度也很高，但是，因其胚胎經(jīng)抽取細(xì)胞或分切，使胚胎的存活率降低，經(jīng)移置後也影響其受胎率，花費(fèi)的成本極高。所以此技術(shù)也只限於非外科取胚選胚的單胎動(dòng)物。

近幾年來(lái)發(fā)展分離 X 和 Y 精子技術(shù)已近成熟階段尤其利用 Flow Cytometric 儀分離經(jīng)去尾和細(xì)胞膜的 X 和 Y 精子成功以後。迄 1989；1991 年美國(guó)農(nóng)業(yè)部動(dòng)物生理學(xué)家強(qiáng)生博士更利用 Flow Cytometric 儀分離仍有活力的精子，而且將分離仍有活力的 X 和 Y 精子經(jīng)由母體輸卵管授精成功地產(chǎn)下 94% 母仔兔和 81% 公仔兔以及 74% 母仔豬和 68% 公仔豬。

雖然利用 Flow Cytometric 儀可分離 X 和 Y 精子，因在分離之過(guò)程中損傷精子程度極高，分離的速度也嫌太慢，尤其對(duì)多胎動(dòng)物需眾多數(shù)目的精子來(lái)授精仍嫌不足。所以如何能很迅速地一次分離足夠正常人工授精的精子數(shù)目，而且不損及其精子活力和型態(tài)，更不影響其授精後的生育能力，此為往後分離精子必須改進(jìn)努力的目標(biāo)。

文章來(lái)源：福建種豬信息網(wǎng)

作者: bnduandm 時(shí)間: 2007-9-13 11:48
標(biāo)題: 奶牛MOET技術(shù)
EB+P4+陰道栓對(duì)荷斯坦青年牛超數(shù)排卵效果的影響

摘要：采用苯甲酸鈉雌二醇(estradiol benzoate, EB)+孕激素(progesterone, P4)+陰道栓方法對(duì)荷斯坦青年牛進(jìn)行人為誘導(dǎo)卵泡波處理，比較不同劑量的P4和不同陰道栓誘導(dǎo)新的卵泡波的發(fā)生，以及對(duì)同期發(fā)情效果和超排效果的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，海棉栓組PGF2α處理后到奶牛發(fā)情的時(shí)間間隔為48.3h，孕酮緩釋陰道栓組為39h，兩組差異極顯著（P<0.05）；海棉栓組的頭均獲胚數(shù)顯著高于孕酮緩釋陰道栓組（13.2：8.7枚，P<0.05），頭均可用胚數(shù)顯著高于孕酮緩釋陰道栓組(5.7：3.3枚，P<0.05)；外源注射50和100 mgP4都能夠成功地誘導(dǎo)新的卵泡波的發(fā)生，在同期發(fā)情效果和超排效果上沒(méi)有顯著差異( P>0.05 )。
關(guān)鍵詞：EB；P4；陰道栓；超數(shù)排卵
引言：
利用奶牛卵泡波的原理，采用物理或化學(xué)方法對(duì)供體奶牛的卵泡波進(jìn)行同期化處理，可以提高奶牛的同期發(fā)情和超數(shù)排卵效果。Lammoglia et al（1998）報(bào)道，使用雌激素+孕激素+陰道栓有效地促進(jìn)新的卵泡波的發(fā)生，提高排卵前的LH峰值，從而提高同期發(fā)情效果和超排效果。Martinez et al.（2000）使用EB+P4+CIDR（新西蘭）取得較好的同期發(fā)情效果和較高的妊娠率；Martinez et al.（2001）使用EB+P4誘導(dǎo)新的卵泡波的發(fā)生，取得較好的同期發(fā)情效果。Gabriel et al (2006) 報(bào)道了使用DIB(阿根廷生產(chǎn)的陰道栓)陰道栓+2.5mgEB+50mgP4進(jìn)行同期發(fā)情處理,使用Folltropin-V 進(jìn)行超排處理，取得較好的超排效果。
目前，國(guó)內(nèi)奶牛的同期發(fā)情和超排處理主要使用海棉陰道栓，由于該陰道栓埋置后容易與陰道發(fā)生黏連，陰道壁的刺激性比國(guó)外生產(chǎn)的CIDR、DIB強(qiáng)一些，容易阻塞陰道分泌物的排出，造成陰道內(nèi)較多的炎性分泌物，引起奶牛超排過(guò)程中的損傷，影響超排效果。因此，本研究比較不同的陰道栓和不同的孕激素劑量對(duì)奶牛同期發(fā)情和超數(shù)排卵效果的影響，從而進(jìn)一步提高奶牛的超排效果。

1.材料和方法
1.1實(shí)驗(yàn)材料
1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
供體牛選用北京奶牛中心良種場(chǎng)飼養(yǎng)的體質(zhì)健康、性周期正常、無(wú)生殖疾患，具有優(yōu)良高產(chǎn)基因的71頭13～15月齡荷斯坦青年母牛用于實(shí)驗(yàn)。
1.1.2器械和主要藥品
開(kāi)膣器，輸精槍，外套膜，外套管，三通管，沖卵管(日本鈴木式)、集卵杯(日本)、體視顯微鏡等沖胚、檢胚器材。
促卵泡素（FSH），加拿大產(chǎn)Folltropin-V，規(guī)格：20mg/mL，生產(chǎn)批號(hào)：DIN 00867357；前列腺素（PGF2α），上海計(jì)劃生育研究所生產(chǎn)的氯前列烯醇，規(guī)格：0.2mg/支，生產(chǎn)批號(hào)：040428；雌激素，南京動(dòng)物激素廠生產(chǎn)的苯甲酸鈉雌二醇（EB），4mg/支，生產(chǎn)批號(hào)：030102；孕激素（P4），南京動(dòng)物激素廠生產(chǎn)的黃體酮， 50mg/支，生產(chǎn)批號(hào)：040621；陰道海綿栓由浙江臺(tái)州東牧動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：031225；孕酮緩釋陰道栓由上海計(jì)劃生育研究所生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：20050905；沖卵液、胚胎保存液及冷凍液由本實(shí)驗(yàn)室配制。
1.2方法
1.2.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
實(shí)驗(yàn)于2005年11月份在北京奶牛中心良種場(chǎng)進(jìn)行，分為兩種不同的陰道栓埋植組（海綿栓/ 孕酮緩釋陰道栓）和兩種不同濃度的孕激素處理組（50 mg/100 mg）,采用陰道栓埋植方法進(jìn)行人為誘導(dǎo)新的卵泡波超排處理。
1.2.2超排處理
在青年奶牛發(fā)情周期的任意一天（發(fā)情當(dāng)天除外），進(jìn)行陰道栓埋植（海綿栓組和孕酮緩釋陰道栓組）處理，并肌肉注射EB（2mg），P4（100 mg/50 mg）。放栓當(dāng)天為0 d，第4 d開(kāi)始超排處理，采用加拿大進(jìn)口Folltropin-V，遞減法連續(xù)4d肌肉注射FSH 320 mg；超排處理的第3 d上午肌肉注射氯前列烯醇2支(0.4 mg),下午撤出陰道栓。
1.2.3發(fā)情觀察、輸精和采卵
在注射PGF2α 后36 h開(kāi)始觀察發(fā)情，每4 h觀察一次發(fā)情，每次觀察30 min。以供體母牛接受爬跨并站立不動(dòng)為發(fā)情判定標(biāo)準(zhǔn)，另外伴隨母牛全身出汗等特征，做好發(fā)情開(kāi)始和發(fā)情持續(xù)期的記錄。于供體牛發(fā)情后8~12 h進(jìn)行第一次輸精，間隔12 h第2次輸精。7 d后應(yīng)用非手術(shù)法回收胚胎。對(duì)回收的胚胎進(jìn)行鏡檢，質(zhì)量鑒定并分級(jí)，合格的A、B級(jí)胚胎冷凍保存。統(tǒng)計(jì)回收胚胎的總數(shù)、可用胚胎數(shù)、變性胚胎數(shù)和未受精卵數(shù)。
1.3統(tǒng)計(jì)分析
試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel生物統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，PGF2α處理后的發(fā)情時(shí)間間隔對(duì)比，頭均獲胚數(shù)，頭均可用胚數(shù)等顯著性檢驗(yàn)均采用t-檢驗(yàn)。

2.結(jié)果和分析
2.1不同陰道栓和P4對(duì)同期發(fā)情效果的影響
由表1看出，試驗(yàn)組中的71頭荷斯坦青年奶牛在PGF2α處理后全部表現(xiàn)發(fā)情，發(fā)情率達(dá)到100%，這說(shuō)明應(yīng)用陰道栓+PGF2α方法誘導(dǎo)奶牛同期發(fā)情可以使超排牛同期發(fā)情率達(dá)到100%。不同的試驗(yàn)組奶牛的發(fā)情開(kāi)始時(shí)間和持續(xù)時(shí)間存在顯著差異（P<0.05）：海綿栓組在PGF2α處理后48.3 h左右開(kāi)始表現(xiàn)發(fā)情，且發(fā)情集中程度較高；孕酮緩釋陰道栓組在PGF2α處理后39 h左右表現(xiàn)發(fā)情，發(fā)情相對(duì)集中(圖1)。但是，每個(gè)試驗(yàn)組中不同濃度的P4處理對(duì)發(fā)情開(kāi)始時(shí)間和持續(xù)時(shí)間并沒(méi)有顯著影響（P>0.05）。

表1 兩種陰道栓的同期發(fā)情效果
table 1 the effect of estrus synchronization between two vaginal-bolt
項(xiàng) 目 the item 組別 group 孕激素劑量 doses of progesterone(P4,mg) 平均值 average
50 100
奶牛頭數(shù) cattle number BI 20 16 —
PRD 19 19 —
發(fā)情率 estrus rate (%) BI 100 100 100
PRD 100 100 100
發(fā)情時(shí)間c  estrus time (h) BI 47.9a 48.9a 48.3
PRD 38.2b 39.8b 39.0
注：a ,b 不同表示不同組間差異顯著，P<0.05;c表示PGF2α處理后到奶牛發(fā)情的時(shí)間間隔，BI表示海棉栓組，PRD表示緩釋陰道拴組。note: different letters(a and b) within a row mean a significant difference for animals(P<0.05)；c means intervals from PGF2α  treatment to estrus(h) ,BI stands for the group of  sponge blot(BI), PRD stands for the group of progestin release device (PRD)

圖1 PG處理后的發(fā)情時(shí)間和發(fā)情率
fig.1 the time and rate of oestrus after PGF2α treatment
注：A，50 mgP4海綿栓組；B，100 mgP4海綿栓組；C，50 mgP4孕酮緩釋陰道栓組；D，100 mgP4孕酮緩釋陰道栓組, a ,b 不同表示不同組間差異顯著，P<0.05。note: A, the sponge blot group of 50 mgP4; B, the sponge blot group of 100 mgP4;
C, the progestin release device group of 50 mgP4; D, the progestin release device group of 100 mgP4

發(fā)情同期性與陰道栓孕酮釋放穩(wěn)定性有關(guān)，穩(wěn)定性越好，發(fā)情同期性越高。對(duì)比兩種不同陰道栓的發(fā)情效果，說(shuō)明兩種陰道栓的孕酮釋放相對(duì)穩(wěn)定，發(fā)情同期性高。但是，孕酮緩釋陰道栓組比海綿栓組提前發(fā)情10h左右，這可能是由于孕酮緩釋陰道栓釋放孕酮含量低，造成撤拴后孕激素濃度提前降低到基準(zhǔn)水平，卵泡迅速生長(zhǎng)，并比海棉栓組提前達(dá)到排卵卵泡，雌激素濃度迅速上升，從而提前發(fā)情。
Taft et al (1996) 報(bào)道，孕激素在行使功能時(shí)候，通過(guò)直接途徑（作用于卵巢，芳香化酶作用）和間接途徑（作用于LH）來(lái)實(shí)現(xiàn)。超排期間，應(yīng)用陰道栓來(lái)人為提高奶牛血漿中孕激素水平，從而抑制優(yōu)勢(shì)卵泡的發(fā)育，解除優(yōu)勢(shì)卵泡對(duì)從屬卵泡的抑制作用，使更多卵泡發(fā)育為優(yōu)勢(shì)卵泡。但是，處理時(shí)不同的孕激素濃度會(huì)導(dǎo)致不同的同期發(fā)情效果，Richardson et al (2002) 用三種不同的方法進(jìn)行同期發(fā)情（P4+PGF2α組，GnRH+PGF2α組，GnRH+P4+PGF2α組），結(jié)果GnRH+PGF2α組最先發(fā)情，提前12h左右。該試驗(yàn)通過(guò)比較發(fā)情前期不同孕激素水平得出，孕激素處理組在撤拴當(dāng)天血漿中的孕激素濃度要高于對(duì)照組，而雌激素濃度要低于對(duì)照組。較小卵泡的奶牛從撤拴到發(fā)情開(kāi)始的間隔時(shí)間要長(zhǎng)于有較大卵泡的奶牛。卵泡生長(zhǎng)速率與LH峰頻率有關(guān)，當(dāng)孕激素濃度處于低水平時(shí)，LH峰頻率加強(qiáng)，卵泡就有較高的生長(zhǎng)速率。Utt et al (2003) 報(bào)道，第一個(gè)卵泡波卵泡的生長(zhǎng)速率快于第二個(gè)優(yōu)勢(shì)卵泡波，主要是因?yàn)榈谝粋€(gè)卵泡波的孕激素濃度低的原因，第一個(gè)卵泡波處于早期黃體期間，而第二個(gè)卵泡波處于中期黃體期間。本試驗(yàn)中，由于國(guó)產(chǎn)孕酮緩釋裝置釋放孕酮含量低，造成撤拴后孕激素濃度提前降低到基準(zhǔn)水平，卵泡迅速生長(zhǎng)，并比對(duì)照組提前達(dá)到排卵卵泡，雌激素濃度迅速上升，從而提前發(fā)情。
2.2不同陰道栓和不同的P4劑量對(duì)超排效果的影響

表2 兩種陰道栓的超排結(jié)果
table 2 the superovulatory results of the two vaginal-bolt
項(xiàng) 目the item 組別 group 孕激素劑量 doses of progesterone(P4,mg) 平均值 average
50 100
奶牛頭數(shù) cattle number BI 20 15 —
PRD 19 17 —
獲胚數(shù) embryo number BI 272 189 —
PRD 167 146 —
胚/ 頭 average embryo number BI 13.6a 12.6a 13.2a
PRD 8.8b 8.6b 8.7b
受精卵 / 頭average fertilized embryo BI 11.4a 10.1a 10.8a
PRD 4.5b 4.9b 4.7b
可用胚 / 頭average useable embryos BI 5.6a 5.9a 5.7a
PRD 3.4b 3.1b 3.3b
注：a ,b 不同表示不同組間差異顯著，P<0.05;BI表示海棉栓組，PRD表示緩釋陰道拴組。note: different letters(a and b) within a row mean a significant difference for animals；BI stands for the group of  sponge blot(BI), PRD stands for the group of progestin release device (PRD)

由表2可看出，海綿栓組（50mgP4/100mgP4）和孕酮緩釋陰道栓組（50mgP4/100mgP4）頭均獲胚數(shù)分別為13.6、12.6、8.8和8.6枚，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組中不同孕激素水平的頭均獲胚數(shù)沒(méi)有顯著差別（P>0.05），兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間的差異極顯著（13.2：8.7枚，P<0.05）。海綿栓組（50mgP4/100mgP4）和孕酮緩釋陰道栓組（50mgP4/100mgP4）頭均受精卵數(shù)分別為11.4、10.1、4.5和4.9枚，每個(gè)試驗(yàn)組中不同孕激素水平的頭均受精卵數(shù)沒(méi)有顯著差別（P>0.05），兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間的差異極顯著（10.8：4.7枚，P<0.05）。同樣，海綿栓組（50mgP4/100mgP4）和孕酮緩釋陰道栓組（50mgP4/100mgP4）的頭均可用胚數(shù)分別為5.6、5.9、3.4和3.1枚，每個(gè)試驗(yàn)組中不同孕激素水平的頭均可用胚數(shù)沒(méi)有顯著差別（P>0.05），兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間的差異極顯著（5.7：3.3枚，P<0.05）。
應(yīng)用國(guó)產(chǎn)海綿栓組的超排效果明顯高于國(guó)產(chǎn)孕酮緩釋陰道栓組，孕酮緩釋陰道栓組的超排結(jié)果在獲胚數(shù)，頭均受精卵數(shù)和頭均可用胚數(shù)上要顯著低于國(guó)產(chǎn)海綿栓組（P<0.05），這主要與國(guó)產(chǎn)孕酮陰道栓的孕激素釋放量有關(guān)。由于孕酮緩釋陰道栓的孕激素釋放量較小，使得供體奶牛的體內(nèi)孕激素水平較低，不能抑制優(yōu)勢(shì)卵泡的生長(zhǎng)，優(yōu)勢(shì)卵泡的生長(zhǎng)產(chǎn)生大量雌激素，導(dǎo)致奶牛提前發(fā)情；并且，優(yōu)勢(shì)卵泡的生長(zhǎng)抑制了其它從屬卵泡的生長(zhǎng)，使得從屬卵泡不能充分發(fā)育，在發(fā)情后不能排卵，從而減少了頭均獲胚數(shù)和頭均可用胚數(shù)。
Savio et al.(1993)報(bào)道，持久卵泡的出現(xiàn)會(huì)降低受精率，持久卵泡會(huì)導(dǎo)致早期胚胎發(fā)育畸形率提高和無(wú)精卵的出現(xiàn)。持久卵泡的出現(xiàn)可以改變卵泡中雌激素水平，使其濃度升高，這樣就改變了卵子的成熟和輸卵管功能，從而降低超排效果。Austin et al (1999) 研究發(fā)現(xiàn)，在撤拴時(shí)雌激素水平高的提前發(fā)情。優(yōu)勢(shì)卵泡持續(xù)期越長(zhǎng)，雌激素水平越高，越容易提前發(fā)情。但是，當(dāng)優(yōu)勢(shì)卵泡持續(xù)期2-4天時(shí)，發(fā)情不同步，不能達(dá)到一個(gè)很好的發(fā)情效果。高水平的外源孕激素可以減少持久卵泡的發(fā)生和降低雌激素的分泌水平。Wehrman et al (1993) 研究表明，持久卵泡的出現(xiàn)可以使青年牛提前發(fā)情10h左右。本試驗(yàn)中，由于國(guó)產(chǎn)孕酮緩釋裝置釋放孕酮含量較低，不能充分抑制優(yōu)勢(shì)卵泡的生長(zhǎng)，產(chǎn)生持久卵泡，使得優(yōu)勢(shì)卵泡分泌大量的雌激素，抑制其它從屬卵泡的生長(zhǎng)，同時(shí)提前發(fā)情，導(dǎo)致其它從屬卵泡的生長(zhǎng)時(shí)間較短，不能達(dá)到排卵卵泡，降低了超排的頭均獲胚數(shù)，頭均受精卵數(shù)和頭均可用胚數(shù)，影響了超排效果。
苯甲酸鈉雌二醇（EB）和孕激素（P4）的聯(lián)合使用可以誘導(dǎo)奶牛新的卵泡波的出現(xiàn)，這在大量研究中都有報(bào)道。Caccia and B6 (1998) 報(bào)道，使用2.5mgEB+50mgP4+CIDR可以在3-4天內(nèi)成功誘導(dǎo)新的卵泡波的發(fā)生， B6 et al (2002) 使用2.5mgEB+50mgP4成功地對(duì)奶牛進(jìn)行超排，超排效果與傳統(tǒng)的8-12天自然發(fā)情后進(jìn)行超排的效果沒(méi)有顯著差異。Mapletoft et al. (1999) 使用5mgE-17β+100mgP4對(duì)奶牛進(jìn)行超排并取得理想的超排效果。本試驗(yàn)采用兩種不同孕激素水平（50mg，100mg）來(lái)誘導(dǎo)新的卵泡波。本實(shí)驗(yàn)中，兩種孕激素水平對(duì)超排牛的同期發(fā)情效果和超排效果都沒(méi)有顯著差異（P<0.05），這說(shuō)明50mg的孕酮肌肉注射和苯甲酸鈉雌二醇（EB）聯(lián)合使用就可以成功誘導(dǎo)新的卵泡波的發(fā)生，達(dá)到較好的超排效果。

參考文獻(xiàn)：
Austin E. J., Mihm M., Ryan M. P., Williams D. H., and Roche J. F. Effect of Duration of Dominance of the Ovulatory Follicle on Onset of Estrus and Fertility in Heifers. Journal of Animal Science, 1999, 77:2219~2226
Bo’G. A., Baruselli P. S., Moreno D., L. Cutaia, M. Caccia, R., and Mapletoft R. J. The control of follicular wave development for self-appointed embryo transfer programs in cattle. Theriogenology, 2002, 57:53~72.
Caccia, M, and G.A.Bo’. Follicle wave emergence following treatment of CIDR-B-implanted beef heifers with estradiol ben-zoate and progesterone. Theriogenology 1998, 49:341.
Gabriel A., Pietro S., Baruselli, Pablo M. Chesta, Claudiney M. Martins .The timing of ovulation and insemination schedules in superstimulated cattle. Theriogenology, 2006 (65) 89~101.
Lammoglia, M. A., R. E. Short, R. E. Bellows, S. E. Bellows, M. D. MacNeill, and H.D.Hafs. Induced and synchronized estrus in cattle: Dose titration of estradiol benzoate in prepubertal heifers and postpartum cows after treatment with and intravaginal progesterone-releasing insert and prostaglandinF2α.Journal of Animal Science, 1998, 76:1662~1670.
Mapletoft, R. J., Adams, Kastelic J. P., and Burnley C.A. The effect of estradiol preparation on follicular wave emergence and superovulatory response in norgestomet-implanted cattle. Theriogenology,1999,51:411
Martinez, M. F., J. P. Kastelic, G. P. Adams, E. Janzen, D. H. McCart-ney, and R. J. Mapletoft. Estrus synchronization and pregnancy rates in beef cattle given CIDR-B, prostaglandin and estradiol or GnRH. Canadian Veterinary Journal. 2000b, 41:786~790.
Martinez, M. F., J. P. Kastelic, G. P Adams, and R. J. Mapletoft. The use of GnRH or estradiol to facilitate timed insemination in an MGA-based synchronization regimen in beef cattle. Animal Reproduction Science, 2001, 67:221~229.
Richardson A. M., Hensley B. A., Marple T. J., Johnson S. K., and Stevenson J. S. Characteristics of estrus before and after first insemination and fertility of heifers after synchronized estrus using GnRH, PGF2α, and progesterone1. Journal of Animal Science, 2002, 80:2792~2800
Savio, J. D., W. W. Thatcher, L. Badinga, R. L. De la Sota, and D.Wolfenson. Regulation of dominant follicle turnover during the estrous cycle in cows. Journal of Reproduction and Fertility, 1993, 97:197.
Taft Rob, Ahmad Nasim, and E. K. Exogenous Pulses of Luteinizing Hormone Cause Persistence of the Largest Bovine Ovarian Follicle. Journal of Animal Science, 1996, 74:2985~2991
Utt M. D., Jousan F. D., Beal1and W. E. The effects of varying the interval from follicular wave emergence to progestin withdrawal on follicular dynamics and the synchrony of estrus in beef cattle. Journal of Animal Science, 2003,81:1562~1567
Wehrman, M. E., M. S. Roberson, A. S. Cupp, F. N. Kojima, T. T.Stumpf, L. A. Werth, M. W. Wolfe, R. J. Kittok, and J. E.Kinder. Increasing exogenous progesterone during syn- chronization of estrus decreases endogenous 17b-estradiol and increases conception in cows. Biology of Reproduction, 1993, 49:214~220.

Effect of EB+P4+Vaginal-bolt on Superovulation of Holstein Heifers
Duan Bao-ning1,2 , Xue Jian-hua3, Zhang Xin-hui3,Wu Sheng-quan3, Sun Feng-jun3, Sang Run-zi1,2
1. Animal Science and Technology College of the Agriculture University of Hebei.2.The Research Centre of Cattle and Sheep Embryonic Technique of Hebei, Baoding of Hebei,071001.3.The embryo department of Beijing Dairy Cattle Center.
Abstract: The Follicular wave of Holstein heifers was induced by estradiol benzoate (EB), progesterone (P4) and vaginal-bolt in order to study the effect of P4 with different doses and different types of vaginal-bolt on inducing of new follicular wave, estrus synchronization and superovulatory results. The results showed that the interval of the sponge blot (BI) group from PGF2α treatment to estrus was 48.3h, and that of the progestin release device (PRD) group was 39h, there were significant differences between the two groups (P>0.05). The average number of obtained embryo for BI group (13.2) was significantly higher than that (8.7) of PRD group (P < 0.05), and the average number of useable embryo of BI group (5.7) was also significantly higher than that (3.3) of PRD group (P < 0.05). The P4 injection dosage of 50 and 100 mg could induce new follicular wave efficiently, and there was no significant difference on estrus synchronization and superovulatory results between the BI and PRD groups (P > 0.05).
Key word: EB; P4; vaginal-bolt; Superovulation

作者: sdlthg 時(shí)間: 2008-8-17 16:48
樓主好，有機(jī)會(huì)向你學(xué)習(xí)。
我的聯(lián)系方式yang521s@163.com
望朋友有機(jī)會(huì)加入我們的新群1089662交流畜牧人的辛酸之路。

歡迎光臨畜牧人 (http://www.cqnsfzw.com/)