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　　凱氏定氮法由于設備簡單，操作方便，因此在生物醫藥、農業、食品等領域的檢測中應用較廣，經常用此法來推算樣品中粗蛋白的含量。但凱氏定氮法對整個實驗過程的控制要求較高，不同的實驗人員往往會得到不同的檢測結果，誤差較大。消化時間不一樣，結果也會有較大差異，我們在這方面作了初步探討，現將結果報道如下。

　　硫酸與蛋白質類有機物共熱消化，在催化劑作用下，能使該有機物分解，其中C,H 以CO:和H2O的形式逸出，而N則轉化成(NH4)2SO4留在溶液中，再在強堿作用下加熱蒸餾，NH3被硼酸吸收為(NH4)2B407，然后用標準稀硫酸溶液滴定，根據滴定液的濃度及消耗量即可計算出樣品中的總氮含量。

2.1 樣品腦蛋白水解物注射液，廣東省藥物研究所制藥廠生產，批號為20021157, 2.2 試劑硫酸鉀，廣東汕頭市西隴化工廠，批號為0212151;硫酸銅，廣東汕頭市西隴化工廠，批號為

0106061;氫氧化鈉，杭州化學試劑有限公司.批號為20031024;硼酸，余杭市高晶精細化工有限公司，批號為20020410。以上試劑均為分析純。

2.3.1
消化準確量取0.25 ml，腦蛋白水解物注射液置于50m1,凱氏燒瓶中，然后加人硫酸鉀。0.3g及30%硫酸銅溶液5滴，再加入濃硫酸2ml.及玻璃珠1粒，在燒瓶口上放一小漏斗后以450角斜置于電爐上，緩緩加熱，同時做12個樣品。待泡沸停止后逐步加大火力，當溶液沸騰至澄明的綠色后開始計時，根據試驗要求，分別繼續加熱10min,20 min,40 min,80min，每個時間段各做3個樣，同樣分別做空白對照樣品1個。

2. 3. 2
蒸餾消化好的樣品放冷后，加水2mL，然后全部移人凱氏定氮儀中的蒸餾瓶內，加40% 氫氧化鈉溶液lOm I.，加熱蒸餾，在冷凝管處用lOm L2%硼酸溶液吸收。

2. 3. 3
滴定硼酸吸收液用0. 005mo1·L-1‘的硫酸滴定液進行滴定，根據滴定液的用量及濃度計算樣品中的總氮含量。

從結果可以看出，加熱20min與加熱10mi的總氮結果之間的差異不顯著，但40min與20min

之間及40min與80min之間的結果都有極顯著的差異，而且樣品加熱40min后檢測的總氮值為最高。

　　從試驗結果看，用凱氏定氮法測腦蛋白水解物注射液的總氮時，最佳消化時間應為溶液變澄明綠色后繼續加熱40min左右，這跟藥典中推薦的溶液變澄明綠色后繼續加熱l0min有差異。

　　用凱氏定氮法檢測其他樣品總氮時，同樣要控制好消化時間，時間過短，則樣品未完全消化，致使結果偏低;時間過長，結果也會偏低，這可能是因為小部分氮隨水蒸汽一起逸出引起的。

原帖由 dazhui 于 2007-10-24 09:01 發表
助您省心、省事、省時、省錢！測蛋白消化1小時

原帖由 粗蛋白 于 2008-1-17 20:06 發表
根據自己使用的催化劑摸索消化時間. 我用的是硫酸銅和硫酸鉀,有時特意做雙樣,一個多加催化劑一個少加, 消化時間一樣, 結果懸殊卻很小. :L:

畜牧人