附紅細胞體病羊血清NO、紅細胞免疫功能的變化 姜代勛*1，甄士偉2，黃會嶺1 （1.河北農業大學動物科技學院，保定：071001；2.河北廊坊市畜牧局，廊坊：065001） | |||||||||||||||
摘要：選用附紅細胞體病羊和健康羊，分成患病組和健康對照組，每組10只，分別自頸靜脈采血，用硝酸還原酶法測定血清一氧化氮（NO）含量，用郭峰法檢測紅細胞免疫功能（包括紅細胞C3b受體花環率（C3bRR）和免疫復合物花環率（ICR））。結果表明：附紅細胞體病羊血清NO含量異常升高（P＜0.01），而紅細胞免疫功能明顯下降（P＜0.01）。 關鍵詞：附紅細胞體病；NO；紅細胞免疫功能；羊 附紅細胞體病（Eperythrozoonosis）是由附紅細胞體（Eperythrozoon）引起的一種人畜共患傳染病。該病主要呈隱性感染，平均隱性感染率可達86.53%[1]，能造成家畜體質衰弱，繁殖能力下降，乳、肉產量減少，易繼發其它傳染病等。在某些應激因素下，呈急性暴發，病畜表現高熱、黃疸、貧血等癥狀，嚴重的可引起大批死亡，已給我國乃至世界的動物養殖業造成了巨大的經濟損失。近年來，隨著家畜附紅細胞體病的頻繁暴發，有關該病的研究，已引起了國內外學者和臨床獸醫工作者的高度重視。 當前，對動物附紅細胞體病治療的報道較多，而研究其發病機制的較少，且血清NO、紅細胞免疫功能與附紅細胞體病的關系尚未見報道。檢測血清NO、紅細胞免疫功能的變化可作為研究患病動物免疫功能及發病機制的一個有意義的指標。 1 材料與方法 1.1 實驗動物 小尾寒羊，成年，雌性，1～2歲，分為患病組和對照組，每組10只羊。其中患病組臨床上具有貧血、黃疸、發熱等癥狀，耳靜脈采血，經瑞氏染色，在顯微鏡下觀察到附紅細胞體。對照組臨床觀察健康，采血鏡檢未見附紅細胞體。 1.2 血樣采集與處理 患病組和對照組分別自頸靜脈采血，共2管：一管肝素（30Iu/mL全血）抗凝，測定紅細胞C3bRR、ICR；另一管分離血清，檢測NO含量。 1.3 NO含量測定 采用硝酸還原酶法。試劑盒購自南京建成生物工程研究所，具體操作按說明書進行。 1.4 紅細胞免疫功能測定采用郭峰法[2]：包括紅細胞C3bRR，ICR（所用紅免試劑購自上海長海醫院）。 1.5 數據處理 采用Microsoft Excel軟件單因素方差分析，用t-檢驗法檢測兩組之間的統計學差異，所有數據以平均數±標準差表示。 2 結果 2.1 血清NO含量變化 由表1可知，患病組血清NO含量顯著高于對照組，差異極顯著（P＜0.01）。 表1對照組與患病組血清NO檢測結果
注：同一行比較，大寫字母不同者差異極顯著（P＜0.01＝，下同。 2.2 紅細胞免疫功能變化根據表2，患病組與對照組比較，紅細胞C3bRR、ICR均顯著降低，差異極顯著（P＜0.01）。 表2對照組與患病組紅細胞免疫功能檢測結果
內源性NO是在細胞內生成的一種小分子自由基，目前已知多種細胞如內皮細胞、巨噬細胞、嗜中性粒細胞和血小板等均能以L-精氨酸為底物，在一氧化氮合酶（NOS）的作用下，生成NO。NOS有兩種，即原生型NOS（cNOS）和誘導型NOS（iNOS）。iNOS一般情況下在體內不表達，只有在受到細胞因子（如TNF、IFN-r、IL-1B等）或細菌內毒素的刺激下才表達，并催化生成大量的NO[3]。而在非病理情況下，動物體內iNOS不表達，血清中NO僅起生理調節作用。 在免疫反應中，NO能增強非特異性免疫功能，主要表現為殺滅微生物及瘤細胞作用[4]。已發現NO對多種病原體如蠕蟲、錐蟲、真菌、原蟲、細菌及病毒有直接或間接的使細胞生長停滯或殺傷作用。而且動物在感染寄生蟲病后，血清NO含量均出現升高現象[5-8]。 附紅細胞體既有原蟲的特點，又有立克次氏體目的特性[9]，動物患病后血清NO含量有何變化尚未見報道。由實驗結果可知，患附紅細胞體病羊存在血清NO升高的異常變化。患羊血液內存在著大量的附紅細胞體，可能激活羊機體的免疫系統，導致大量的炎性因子釋放，誘導了宿主多種類型細胞(如巨噬細胞、中性粒細胞等)內的iNOS活性及表達，從而催化生成大量NO。iNOS催化生成的NO量大，持續時間長，且主要在病理情況下抑制或殺死入侵病原體[10,11]。因此，患羊血清NO含量的升高可能是機體的一種積極的防御性反應。 但機體內源性NO生成過多也會對組織細胞產生細胞毒作用[12]。NO作為肝臟中巨噬細胞釋放的主要炎性介質之一，通過介導枯否氏細胞的毒性，造成肝細胞的損傷[13]。從檢測結果來看，患病組病羊存在血清NO含量顯著升高的異常變化，這可能是出現黃疸癥狀的原因之一。此外，一方面大量的附紅細胞體消耗機體營養（葡萄糖），另一方面高濃度的NO能夠抑制消化系統[14]，使病羊食欲降低甚至廢食，故患附紅細胞體病羊表現消瘦、厭食等癥狀。 紅細胞C3bRR和ICR可作為紅細胞天然免疫粘附功能的指標，如兩項指標都低下，判為原發性紅細胞免疫功能低下，為紅細胞膜C3b受體遭到破壞或遺傳因素缺陷及其它原因所致[2]。從實驗結果來看，患病組羊紅細胞C3bRR、ICR與對照組比較，其花環率均顯著降低，因而患病羊為原發性的紅細胞免疫功能低下。此時紅細胞已不能粘附過量的循環免疫復合物，是紅細胞免疫功能低下失代償期，表明C3b直接受損，粘附活性喪失。 羊患附紅細胞體病時，大量附紅細胞體附著于紅細胞表面，必然屏蔽紅細胞膜上的C3b受體；同時寄生附紅細胞體的紅細胞表面出現皺褶、突起，而衰老的附紅細胞體可裂解為碎片釋放入血漿，在原來寄生的部位出現凹陷、空洞，引起紅細胞膜的損傷[15]。紅細胞膜含有豐富的磷酸多不飽和脂肪酸，且所處的環境經常與自由基相接觸，極易受到自由基（如NO）的損傷[16]。以上各種破壞紅細胞膜的因素必然導致紅細胞膜上C3b受體數目減少，活性降低，因而造成紅細胞免疫功能低下。此外，附紅細胞體的空間位阻也可能影響到紅細胞與免疫復合物粘附形成花環。 機體內的免疫復合物可通過激活補體與紅細胞膜上的C3b受體相連，然后運送到肝臟，在肝臟受到血漿調節蛋白Ｉ因子的作用使C3b轉變為C3dg。這樣，C3b受體引導免疫復合物到預定的器官進行處理，從而防止免疫復合物在腎臟及小血管內沉積，引起疾病[17]。羊患附紅細胞體病后，紅細胞免疫功能低下，攜帶免疫復合物的能力降低，血液中免疫復合物濃度升高，從而易引起一些免疫復合物性疾病。 綜上所述，羊患附紅細胞體病后可能通過誘導iNOS生成高濃度的NO，而附紅細胞體的寄生和高濃度的NO對紅細胞膜的損傷引起紅細胞免疫功能降低，其具體機制尚需進一步研究。 |
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