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　　黃連解毒湯出自王燾《外臺秘要》，本方由黃連、黃柏、黃芩、梔子組成。具有清熱瀉火解毒之功效，主治一切實熱火毒、三焦熱盛之證。無論內服、外用具有良好的治療作用[3-5]。《中華人民共和國獸藥典》（2000年版）中的黃連解毒散即源于本方。據研究，本方具有一定的抗菌、解毒、耐缺氧、抗自由基等作用。在獸醫臨床上，本方廣泛應用于敗血癥、膿毒血癥、痢疾等各種急性炎癥[6]。

　　黃一帆等 [7]已對中藥方劑黃連解毒散進行普通粉碎和超微粉碎后的粉末形態學進行了比較觀察，利用掃描電鏡、生物顯微鏡、激光粒度測定儀對普通粉和超微細粉進行了表征，發現藥材經超微粉碎后，粉末顆粒細微均勻，顆粒的球性度提高，復方均質度明顯改善，絕大多數細胞破壁。黃芩苷是黃連解毒散黃芩中主要的有效成分，與黃芩的清熱解毒，燥濕等功效有十分密切的關系。藥理研究表明黃芩苷具有抗菌、抗病毒、降壓、保肝、解毒、免疫調節等藥理作用[8]，體外溶出度試驗[9]表明超微粉碎可提高黃連解毒湯中黃芩苷溶出量。對該方進行超微粉碎后有效成分黃芩苷在體內的藥代動力學研究，國內未見報道。本文在此基礎上，采用高效液相色譜法測定家兔體內黃芩苷的血藥濃度，比較黃連解毒散超微細粉、細粉中黃芩苷在家兔體內的藥代動力學參數，以期揭示黃連解毒散經超微粉碎后主要成分在體內的變化規律及其生物利用度，為黃連解毒散超微粉在臨床應用提供科學依據。

　　美國Agilent公司1100型高效液相色譜儀；HSC-24A型氮氣吹干儀（北京八方世紀科技有限公司）；BMF-6型倍力超微粉碎機（濟南倍力粉技術工程有限公司）；FZ-102型植物試樣粉粹機（河北黃驊市家務科學儀器廠）；Statorius BS210S型電子天平（北京塞多利斯天平有限公司）；AL104型電子天平（西德）；TGL-16G型離心機（上海安亭科學儀器廠）。

　　黃連解毒散由黃連、黃柏、黃芩和梔子(購于福州市藥材采購供應站)按規定比例混合而成。黃連解毒散細粉由植物試樣粉碎機粉碎，過65目篩。黃連解毒散超微細粉由濟南倍力粉技術工程有限公司采用超微粉碎技術制成。試驗前40℃減壓干燥至恒重，給藥前用蒸餾水配成懸浮液。

　　黃芩苷標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號10715-200212）；甲醇為色譜純（江蘇漢邦科技有限公司）；磷酸為分析純（廣東光華化學廠有限公司）；肝素鈉（上海惠興生化試劑有限公司）。

　　10只家兔試驗前根據性別、體重隨機分為2組，即黃連解毒散細粉組和黃連解毒散超微細粉組，按4g·kg-1劑量灌胃給藥，給藥前禁食12h，于給藥后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6、8、12、24h頸靜脈采血2.5mL, 肝素鈉抗凝。3000r/min，離心15min，分離血漿，分裝于eppendorf管中，-20℃保存待測。

　　精密吸取各時間點的含藥血漿0.2mL于離心管中，加1.4mL甲醇超聲振蕩15min，旋渦振蕩1min，12000r/min離心15min，取上清液到另一干凈的離心管，40℃水浴氮氣流揮干，殘渣加0.25mL流動相溶解，并旋渦振蕩2min，超聲5min，0.45μm濾膜過濾，最后取20μL進樣。

　　精密稱取黃芩苷標準品，加流動相配成10μg·mL-1的標準品溶液。精密吸取黃芩苷標準品溶液1mL置10mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，配制成1μg·mL-1標準品儲備溶液精密吸取6、12、24、36、50、100μL黃芩苷標準品溶液（1μg/mL）于離心管中，40℃水浴氮氣流揮干，分別加入空白血漿0.2 mL，得不同濃度的血漿標準液（濃度分別為0.03 μg/mL、0.06 μg/mL、0.12μg/mL、0.18μg/mL、0.25 μg/mL、0.5 μg/mL），按“樣品處理”項下方法處理并進樣。得到回歸方程為：y=39.849x+0.467（r=0.9994）；在0.03～0.5μg/mL之間線性關系良好。以信噪比 S/N 為3 計，該方法的檢測限為0.02μg·mL-1。

　　用空白血漿和黃芩苷標準品溶液配制0.03μg/mL、0.18 μg/mL、0.5μg/mL黃芩苷血漿樣品，每種濃度樣品數n=5，按“樣品處理”項下方法處理進樣分析，測得高、中、低 3 個濃度水平血漿中黃芩苷的回收率和 RSD分別為75.96％、78.07％、78.85％和4.29％、4.57％、4.38％。

　　用空白血漿和黃芩苷標準品溶液配制0.025μg/mL、0.15μg/mL、0.4μg/mL黃芩苷血漿樣品，每種濃度5份，按“樣品處理”項下方法處理，測得高、中、低 3 個濃度水平血漿中黃芩苷的日內 RSD 分別為4.66 %、3.16%、 4.22% ，日間 RSD 分別為 4.71% 、3.90% 、4.68%。

　　1．5．5色譜條件? 色譜柱為Hanbon 1C18254F（4.6mm×250mm）；流動相為甲醇-水-0.2%磷酸(55：45：0.2)；流速1m1／min；檢測波長280nm。黃芩苷的保留時間為8.4～8.7 min。黃芩苷標準品、空白血漿、空白血漿加黃芩苷標準品、家兔灌藥血漿樣品的色譜圖如圖1-5。

采血時間(h) Time/h	黃連解毒散細粉 Common powder	黃連解毒散超微細粉? Ultra micro-powder???????????????????
0.25	0.06250±0.00872	0.0936±0.01530
0.5	0.07326±0.00888	0.113335±0.01310
0.75	0.094397±0.01040	0.133667±0.01340
1	0.107155±0.00688	0.157588±0.00708
1.5	0.152605±0.01050	0.274003±0.00611
2	0.201642±0.01600	0.321246±0.01560
2.5	0.218985±0.01750	0.319054±0.01630
3	0.217789±0.01750	0.315465±0.02250
4	0.211809±0.01790	0.274202±0.01870
6	0.179914±0.02100	0.254069±0.01600
8	0.167156±0.02360	0.175379±0.01600
12	0.073865±0.00551	0.078849±0.00610
24	0.038383±0.00552	0.035791±0.00998

參數 Parameter	單位 Unit	黃連解毒散細粉 Common powder	黃連解毒散超微細粉 Ultra micro-powder
A	μg /mL	0.414	0.990
α	1/h	0.252	0.271
B	μg /mL	0.323	0.171
β	1/h	0.119	0.0819
Ka	1/h	0.419	0.497
t1/2α	h	2.74	2.556
t1/2β	h	5.83	8.46
Vd	L·kg-1	12.890	6.752
AUC	（μg /ml).h	2.611	3.401
K10	1/h	0.152	0.174
K21	1/h	0.197	0.128
K12	1/h	0.0222	0.0514
Tpeak	h	3.645	3.005
Cmax	μg /mL	0.215	0.311

畜牧人