飛機(jī)草的急性毒性試驗(yàn)* 陳進(jìn)軍1聶芳紅2林紅英1李淑紅1 （1湛江海洋大學(xué)農(nóng)學(xué)院；2湛江海洋大學(xué)食品科技學(xué)院，廣東湛江524088） 中圖分類號(hào)：S852.6 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
摘要：利用體重26～32g的一級(jí)昆明種雌性小白鼠，口腔灌服飛機(jī)草水煎劑，采用改良寇氏法，測(cè)定了飛機(jī)草全草的急性半數(shù)致死量LD50，并觀察了供試小白鼠的臨床表現(xiàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飛機(jī)草全草對(duì)一級(jí)昆明種雌性小白鼠的LD50為227091.04mg/kg，95%可信限為227090.99～227091.09 mg/kg，說明飛機(jī)草水煎劑對(duì)昆明種雌性小白鼠實(shí)際無毒。急性死亡小鼠（劑量達(dá)到162562.3mg/kg以上）在死前表現(xiàn)腹瀉，呼吸困難，眼球突出，身體抽搐；未死亡的小鼠個(gè)別表現(xiàn)呼吸加深加長(zhǎng)，心跳加快，瞳孔散大，出汗，有拒食現(xiàn)象，后又恢復(fù)，身體消瘦后又正常，糞便不成形。 關(guān)鍵詞：飛機(jī)草煎劑急性毒性小白鼠 飛機(jī)草( Eupatorium odoratum Linn) 為菊科澤蘭屬多年生草本植物，又名香澤蘭[1]。原產(chǎn)于中美洲，在南美洲、亞洲、非洲熱帶地區(qū)廣泛分布，生于山坡、曠野、路旁。中國(guó)臺(tái)灣、廣東、香港、澳門、海南、廣西、云南、貴州等地大量生長(zhǎng)。能產(chǎn)生化感物質(zhì)，抑制鄰近植物的生長(zhǎng)，使昆蟲拒食，具有殺滅棉鈴蟲和某些真菌的作用[2-4]。它與南美蟛蜞菊（Wedelia trilobata）、微甘菊（Mikania micrantha）、五爪金龍（Ipomoea cairica）和豚草（Ambrosia artemisiifolia）共同被列為廣東重點(diǎn)滅除的5種外來入侵植物[5]。本品全草入藥，多外用，具有止血?dú)⑾x的作用。全草含揮發(fā)油、香豆素、谷甾醇及黃酮類化合物[1,6]。對(duì)于飛機(jī)草的中草藥藥理學(xué)和毒理學(xué)的研究尚未見報(bào)到。本研究制備飛機(jī)草水煎劑，進(jìn)行飛機(jī)草的急性毒性試驗(yàn)，為使飛機(jī)草變害為寶，將其作為中草藥加以利用，減滅飛機(jī)草的生態(tài)危害積累資料。 1材料與方法 1．1 飛機(jī)草于夏季采自廣東省湛江市湖光巖東。經(jīng)湛江海洋大學(xué)農(nóng)學(xué)院植物分類學(xué)副教授吳鈿鑒定（圖1）。陰干粉碎，貯存于干燥陰涼處備用。 1．2 小白鼠一級(jí)昆明種雌性，體重26—32g，購(gòu)于中國(guó)人民海軍四二二醫(yī)院（廣東湛江）。 1. 3 預(yù)備試驗(yàn) 1.3.1飛機(jī)草水煎劑的制備 稱取飛機(jī)草粉末100g，置于砂鍋中，加水淹沒2cm，浸泡30min，直火加熱煮沸30min，其間不斷攪拌。待溫后過濾，得藥液。藥渣依上法重煎一次。合并兩次濾液，加入活性炭過濾。濾液在60℃恒溫水浴中濃縮至20mL，即得每毫升相當(dāng)5g飛機(jī)草的水煎劑。冷藏于4℃?zhèn)溆谩?br /> 1.3.2動(dòng)物分組與飼養(yǎng)管理 將12只供試小白鼠隨機(jī)等分為4組，記為飛機(jī)草水煎劑預(yù)試1、2和3組及蒸餾水對(duì)照組。以組為單位分籠飼養(yǎng)，標(biāo)記并登記，喂給清潔級(jí)專用鼠料（廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）和溫開水。自然光照。 1.3.2給藥方法和劑量 采用灌胃法。用9號(hào)注射針頭（針尖打磨鈍圓、光滑），從口腔插入食道口給藥。灌胃前禁食10h，自由飲水，動(dòng)物灌胃后3h以后再?gòu)?fù)食。對(duì)照組同法灌給蒸餾水。以300mg/kg為最低劑量，用10倍稀釋的飛機(jī)草水煎劑系列藥液，依次序貫取三個(gè)濃度用3組（每組3只，另設(shè)蒸餾水對(duì)照組）雌性小鼠灌服給藥。找出引起動(dòng)物100% 死亡的劑量(Dm)[7,8]。 1．4正式試驗(yàn)—改良寇氏法 按改良寇氏法設(shè)計(jì)，各劑量組隨機(jī)分配小鼠10只，一共5組，以Dm為最高劑量，組間劑量比值確定為1︰0.85[8,9]。按“低比稀釋法”配藥，分別按方案（表1）灌服供試藥物一次。試驗(yàn)完畢后，統(tǒng)計(jì)各組死亡率，按（1）式計(jì)算LD50。 LD50=lg-1[Xm—i(ΣP―0.5)] ………………………………………………(1) 其中，Xm：最大劑量組劑量的對(duì)數(shù)。 i：相鄰兩組高劑量與低劑量之比的對(duì)數(shù)。 P：各組動(dòng)物的死亡率，用小數(shù)表示。 ΣP：各組動(dòng)物死亡率的總和。 再按（2）式和（3）式求出 LD50的平均可信限。 Sx50=i×[(ΣP—ΣP2)/(n—1)]1/2……………………………………………(2) 其中，Sx50：lgLD50的標(biāo)準(zhǔn)誤。 X50：lgLD50。 n：每組動(dòng)物數(shù)。 ΣP2：各組動(dòng)物死亡率平方之和。 LD50 95%可信限FL=lg-1 (X50±1.96Sx50)………………………...………(3) LD50 95%平均可信限=LD50±（LD50高限—LD50低限）/2….....………(4) 上述(4) 式即為L(zhǎng)D50的最后表示。 1．5臨床觀察 試驗(yàn)開始后，觀察120h，記錄小白鼠灌藥后的表現(xiàn)及死亡數(shù)。死亡小白鼠及時(shí)剖檢，試驗(yàn)結(jié)束后剖檢全部供試小白鼠。 2結(jié)果 2．1 供試小白鼠的主要表現(xiàn) 在灌服飛機(jī)草水煎劑后第一天，各組供試小白鼠普遍表現(xiàn)毛發(fā)不潔、松散、無光澤，步態(tài)不穩(wěn)，感覺過敏，爾后反應(yīng)遲鈍甚至消失。在整個(gè)試驗(yàn)過程中，個(gè)別小白鼠出現(xiàn)呼吸加深加長(zhǎng)，心跳加快，瞳孔散大，出汗。有拒食現(xiàn)象，后又恢復(fù)，身體消瘦后又正常。糞便不成形。小鼠臨死前腹瀉，呼吸困難，眼球突出，身體抽搐。剖檢發(fā)現(xiàn)，供試小鼠皮下血管充血，腸系膜充血，有的盲腸壞死，胃黏膜充血，肝、腎均局部有白色小斑，有壞死灶，心腔充滿凝血。 2．2 飛機(jī)草對(duì)供試小白鼠灌胃的LD50 預(yù)備試驗(yàn)測(cè)得Dm為300000mg/kg。飛機(jī)草對(duì)供試小白鼠灌胃的LD50測(cè)定原始結(jié)果如表1所示。 表1飛機(jī)草對(duì)昆明種小白鼠灌胃的LD50測(cè)定結(jié)果 Table 1. Results for measuring LD50 of Eupatorium odoratum Linn. administered orally in female Kunming mice
據(jù)表1，可計(jì)算出LD50= lg-1[Xm—i(ΣP—0.5)] =lg-1[5.4771—0.0706×(2.17—0.5)] =lg-15.3592=227091.04 據(jù)（3）式可計(jì)算出LD50 的95%可信限FL=lg-1(5.3592±1.96×0.026) =lg-1(5.3592±0.051) =5.3082 ~5.4102 LD50 的95%平均可信限=LD50±（LD50高限—LD50低限）/2 =227091.04±0.051=227090.99～227091.09 亦即飛機(jī)草對(duì)供試小白鼠灌胃的LD50為227091.04mg/kg，95%可信限為227090.99 ~227091.09 mg/kg。 3 討論與結(jié)論 能使全群動(dòng)物半數(shù)死亡的劑量稱為半數(shù)致死量，即LD50，它是標(biāo)志藥物、毒物和感染物毒力強(qiáng)度的一種重要常數(shù)。化學(xué)物依據(jù)LD50大小可以分為極毒、劇毒、中等毒、低毒和實(shí)際無毒5級(jí)[9]。飛機(jī)草對(duì)供試小白鼠灌胃的LD50為227091.04mg/kg，因而可以認(rèn)為飛機(jī)草對(duì)供試小白鼠口服實(shí)際無毒。 作為一種生物入侵植物，飛機(jī)草在我國(guó)的蔓延已經(jīng)成為農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)的頭疼問題。飛機(jī)草在某些地區(qū)如海南的分布分布，占98.3%。只要飛機(jī)草侵占了草場(chǎng)，爭(zhēng)陽光，爭(zhēng)水分，爭(zhēng)肥料草場(chǎng)兩三年就失去利用價(jià)值。侵入農(nóng)耕地，造成糧食減產(chǎn)3%～11%，桑葉、花椒減產(chǎn)4%～8%，香蕉植株少2至3片葉，矮1m左右，幼樹難以成林，經(jīng)濟(jì)林木推遲投產(chǎn)。飛機(jī)草含有一種次生代謝物質(zhì)，坡鹿如果采食太多，會(huì)引起消化不良等癥狀，開花時(shí)可引起馬的支氣管炎，用來墊圈或下田沃肥會(huì)引起牲畜的蹄叉，還能引起人的過敏性疾病和手腳皮膚炎[2,3,5,10]。 飛機(jī)草的防除已取得一些進(jìn)展，其中以香澤蘭燈蛾、香澤蘭嬰實(shí)蠅最具潛力。香澤蘭燈蛾的幼蟲會(huì)啃食大量的飛機(jī)草葉片；香澤蘭嬰實(shí)蠅的成蟲會(huì)在飛機(jī)草的莖中產(chǎn)卵，形成蟲嬰，每個(gè)蟲嬰可以孵化許多只幼蟲，幼蟲取食飛機(jī)草的莖時(shí)，會(huì)破壞其輸導(dǎo)系統(tǒng)，使飛機(jī)草整株枯萎死亡[5,10]。飛機(jī)草的抽提物對(duì)小菜蛾雌蟲的產(chǎn)卵有驅(qū)避作用。植物揮發(fā)油對(duì)黃曲條跳甲成蟲都具有很強(qiáng)的驅(qū)避作用。飛機(jī)草的乙醇提取物對(duì)荔枝蒂蛀蟲成蟲產(chǎn)卵的驅(qū)避作用效果在80%～90%之間[2,4,10]。可見對(duì)飛機(jī)草進(jìn)行生物防除和作為研制無公害農(nóng)藥資源而加以利用，已經(jīng)進(jìn)行了多方面的嘗試并取得了一些可喜的成果。 從中草藥的角度來看，可以借助飛機(jī)草繁殖力極強(qiáng)、產(chǎn)量極高和來源廣的特點(diǎn)，通過中藥炮制、有效部位提取、不同制劑研制、不同使用方法篩選研究等措施，改變飛機(jī)草作為中草藥的藥物性能，擴(kuò)大應(yīng)用范圍，增加有效成分的含量。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飛機(jī)草的毒性為實(shí)際無毒。可能是因?yàn)樵陲w機(jī)草水煎劑的制備過程中，飛機(jī)草中的一些毒性較大但揮發(fā)性強(qiáng)的化學(xué)成分被去除了，使有毒成分減少或改變了。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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