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畜牧人

標(biāo)題: 魚類消化道微生物的分布及調(diào)控 [打印本頁]

作者: sunyunzhang    時(shí)間: 2008-8-8 15:12
標(biāo)題: 魚類消化道微生物的分布及調(diào)控
魚類生活的環(huán)境和魚類消化道中存在著大量的微生物,在魚類生長發(fā)育過程中,魚類消化道逐漸形成了一個(gè)由好氧菌、兼性厭氧菌和絕對(duì)厭氧菌組成的動(dòng)態(tài)正常菌群。正常情況下,魚類消化道的各種微生物生長良好,占主導(dǎo)優(yōu)勢(shì)的有益微生物菌群能使消化道處于健康環(huán)境中,從而保證魚類消化道的正常消化和吸收。同時(shí),有益微生物菌群定植于腸內(nèi)壁黏膜,形成非特異性的生物保護(hù)屏障,抑制病原菌對(duì)腸壁的定植,維持腸道正常的微生態(tài)平衡。但當(dāng)出現(xiàn)餌料或環(huán)境變更等應(yīng)激狀態(tài)時(shí),這種理想的微生物區(qū)系平衡會(huì)受到?jīng)_擊,宿主的正常防御系統(tǒng)被破壞,某些條件致病菌會(huì)轉(zhuǎn)移、定植并侵襲魚體的其它組織器官,導(dǎo)致細(xì)菌性疾病的暴發(fā)[1]。因此,如何利用益生素、化學(xué)益生素等調(diào)控魚類消化道微生物的組成,保持魚類消化道微生物區(qū)系平衡,維持動(dòng)物健康正成為國際上的研究熱點(diǎn)。
1魚類消化道微生物的組成和分布
魚卵孵化前表面附著有大量的細(xì)菌,但剛孵化魚的胃腸道通常是無菌的。孵化后的仔魚在卵黃囊消耗以前就會(huì)開始飲水,水中的細(xì)菌得以進(jìn)入仔魚的消化道。稍大一點(diǎn)的仔魚還會(huì)攝食附著有大量細(xì)菌的懸浮顆粒和卵黃碎片。因此,養(yǎng)殖水體、懸浮顆粒和卵黃碎片的細(xì)菌成為仔魚消化道微生物區(qū)系的最初來源。但是,魚類胃腸道環(huán)境不同于水體環(huán)境,僅那些能適應(yīng)魚類胃腸道環(huán)境和宿主的免疫系統(tǒng)的微生物能夠定植于胃腸道。研究表明,仔魚期形成了最初的不穩(wěn)定的微生物區(qū)系,隨后此微生物區(qū)系逐漸成熟,幼魚期形成比較穩(wěn)定的微生物區(qū)系。例如,羅非魚(Tilapia mossambica)在孵化后20~60 d內(nèi)建立起比較成熟的微生物區(qū)系[2]。仔稚魚免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完成,它們更多的是依賴非特異性防御機(jī)制,其中,胃腸道粘膜上附著的正常菌群可能是仔稚魚對(duì)抗致病菌入侵的第一道屏障。然而,由于傳統(tǒng)方法的嚴(yán)重制約,特別是消化道微生物區(qū)系復(fù)雜多樣且需厭氧環(huán)境,目前有關(guān)仔稚魚消化道微生物的研究較少,仔稚魚胃腸道粘膜上附著的菌群種類、功能和變化尚不清楚。令人欣喜的是,隨著分子生物學(xué)技術(shù)的日益發(fā)展,DGGE、TGGEDNA指紋技術(shù)有望用于魚類消化道微生物區(qū)系的研究,從而加深人們對(duì)魚類消化道微生物菌群分布和功能的了解[3]
有關(guān)幼魚和成魚消化道微生物區(qū)系組成研究較多,報(bào)道結(jié)果也不盡相同。但通常情況下,淡水魚消化道中常見的微生物主要有氣單胞菌(Aeromonas)、假單胞菌(Pseudomonas)、鄰單胞菌(Plesiomonas)、腸桿菌(Enterobacter)等,而海水魚消化道中最常見的是弧菌(Vibrio)、假單胞菌、不動(dòng)桿菌(Acinetobacter) 等[3]。成魚的消化系統(tǒng)已經(jīng)發(fā)育完成,消化道微生物區(qū)系變得相對(duì)穩(wěn)定。但是,當(dāng)出現(xiàn)病原菌侵襲、餌料或環(huán)境變更等應(yīng)激狀態(tài)時(shí),這種理想的微生物區(qū)系平衡會(huì)受到?jīng)_擊,宿主的正常防御系統(tǒng)被破壞。Lodemel[4]報(bào)道,正常情況下北極嘉魚(Salvelinus alpinus L.)腸道微絨毛上附著有大量的細(xì)菌,而人工感染殺鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida ssp. Salmonicida)后,附著于腸道的細(xì)菌數(shù)量下降了100倍,提示感染致病菌后北極嘉魚腸道正常菌群數(shù)量急劇下降。隨后,Ringo等[5]研究了殺鮭氣單胞菌攻毒對(duì)北極嘉魚腸道微生物的影響。結(jié)果表明,攻毒后北極嘉魚腸道微生物區(qū)系發(fā)生了一些變化,而肉桿菌(Carnobacterium) 則持續(xù)存在于后腸,且能阻止致病菌在腸道的定植,作者由此推斷肉桿菌是北極嘉魚腸道的固有菌群,是北極嘉魚對(duì)抗致病菌定植的天然菌群屏障的重要組成部分。此外,Olsen等[6]研究了急性應(yīng)激(養(yǎng)殖水面下降到5-10cm,用長桿追逐魚15min)和饑餓應(yīng)激對(duì)虹鱒(Oncorhynchus mykiss)消化道微生物區(qū)系的影響。電鏡結(jié)果表明,附著于后腸的微生物種類和數(shù)量均顯著下降,而糞中的微生物數(shù)量則上升,提示急性應(yīng)激可能會(huì)導(dǎo)致腸道粘膜的大量脫落。但是,也有研究表明,急性應(yīng)激和饑餓應(yīng)激11天對(duì)大西洋鮭(Salmo salar L.)腸道細(xì)菌總數(shù)和棲魚肉桿菌(Carnobacterium piscicola)沒有影響[7]。
隨著人們對(duì)魚類消化道微生物結(jié)構(gòu)和功能認(rèn)識(shí)的深入,一些學(xué)者還對(duì)魚類各段消化道微生物的分布進(jìn)行了研究,但報(bào)道的結(jié)果不一。多數(shù)研究表明,從前到后魚類各段消化道附著的微生物數(shù)量呈逐漸上升趨勢(shì),這個(gè)結(jié)果相繼在大西洋鮭(Salmo salar)、鯡(Seriola quinqueradiata)、都花舌鰨(Solea solea和北極嘉魚(Salvelinus alpinus
L.)消化道微生物的研究中得到證實(shí)[1,8]。與之相反,Austin[9]報(bào)道,虹鱒各段消化道細(xì)菌數(shù)量呈逐漸下降的趨勢(shì)。而Ringo[10]的研究發(fā)現(xiàn)北極嘉魚附著于小腸和大腸的細(xì)菌數(shù)量非常恒定。但是,目前有關(guān)有益菌(如某些乳酸菌)和致病菌(如某些弧菌)在魚類各段消化道分布的報(bào)道很少。這也制約了乳酸菌等有益菌作為益生素在魚類養(yǎng)殖過程中的應(yīng)用,因?yàn)槿绻靡嫔隰~類消化道的定植位點(diǎn)與致病菌的定植位點(diǎn)不一致,則難以發(fā)揮其益生效果[3]。因此,魚類消化道重有益菌和致病菌的分布尚須今后深入研究。

2 魚類消化道微生物的調(diào)控
魚類消化道正常菌群的建立對(duì)于消化系統(tǒng)的正常發(fā)育具有重要的作用,而且正常菌群的建立能夠作為生物屏障阻止致病菌的入侵,同時(shí)提高魚類的免疫力。因此,加強(qiáng)魚消化道微生物菌群分布和功能的研究,在此基礎(chǔ)上開發(fā)出綠色高效的益生素和化學(xué)益生素等調(diào)控魚消化道微生物菌群,保持消化道微生物區(qū)的穩(wěn)定,有望提高魚類的抗病力和生產(chǎn)性能。
2.1益生素
益生素(Probiotics)“是一類通過促進(jìn)腸道微生物平衡對(duì)宿主動(dòng)物產(chǎn)生有益影響的活的微生物飼料添加劑”[11],最早應(yīng)用于陸生動(dòng)物。此后的研究表明益生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中亦具有一定的應(yīng)用效果。但是,水生生物由于與水環(huán)境密切相關(guān),許多情況下有益微生物,如光合細(xì)菌可直接添加于養(yǎng)殖水體,通過拮抗病原菌、降解多余有機(jī)質(zhì)等對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物產(chǎn)生有益的影響。因此Gram等 [12]將益生素的含義擴(kuò)展為“一類通過改善微生物平衡來促進(jìn)寄主健康的活的微生物飼料添加劑”。研究表明,芽孢桿菌(Bacillus)、乳酸菌(lactic acid bacteria)、假單胞菌(Pseudomonas)和弧菌(Vibrio)均可作為水產(chǎn)動(dòng)物益生素調(diào)控消化道微生物的組成,而目前研究得最多的是芽孢桿菌和乳酸菌[3]。
芽孢桿菌(Bacillus)是一類革蘭氏陽性菌,在腸道或貯藏過程中都以內(nèi)生孢子的形式存在,因此其抗逆性很強(qiáng)。芽孢桿菌進(jìn)入腸道后,在腸道上部迅速復(fù)活,消耗大量的氧,有利于腸道固有菌群繁殖,同時(shí)有效抑制病原菌生長,維持腸道微生態(tài)平衡,促進(jìn)動(dòng)物的健康生長。目前,在水產(chǎn)養(yǎng)殖也中應(yīng)用較多的芽孢菌主要有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis和蠟樣芽孢桿菌(Bacilis Cereus)等。Kozasa[13]用1株從土壤中分離的東洋芽孢桿菌(Bacillus toyoi)處理日本鰻鱺(Anguilla japonica),降低了由愛德華氏菌(Edwardsiella)引起的鰻鱺死亡。華雪銘等報(bào)道,基礎(chǔ)日糧中添加0.1%的由三種芽孢桿菌,枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和嗜熱球狀芽孢桿菌混合而成的益生菌,可以明顯提高暗紋東方鲀Takifugu obscurus幼魚的生長速度[ 14 ]。華雪銘等[15]在異育銀鯽 (Carassiusauratus gibelio)飼料中添加不同濃度的芽孢桿菌,結(jié)果表明芽孢桿菌可以極顯著地提高異育銀鯽對(duì)嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)的抵抗能力,添加量為0.2%的實(shí)驗(yàn)組異育銀鯽的相對(duì)增重率比對(duì)照組增加33%。總之,芽孢桿菌能提高魚類的存活率,促進(jìn)動(dòng)物生長,但是有關(guān)芽孢桿菌對(duì)魚類腸道菌群調(diào)控的研究較少。劉波等研究表明,基礎(chǔ)日糧中添加0.02%的地衣芽孢桿菌后,異育銀鯽增重率顯著提高,其腸道食糜中芽孢桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量大大增加,大腸桿菌的數(shù)量則顯著降低[16]。胡東興報(bào)道,從鯉魚(Cyprinus Carpio)體內(nèi)分離的地衣芽孢桿菌對(duì)氣單孢菌有生物拮抗作用[17]。因此,有關(guān)芽孢桿菌對(duì)魚類腸道菌群調(diào)控尚須今后深入研究。
乳酸菌(Lactic acid bacteria)是一類能利用可發(fā)酵糖產(chǎn)生乳酸的細(xì)菌的通稱。乳酸菌通常是不運(yùn)動(dòng)、不產(chǎn)芽孢的革蘭氏陽性菌,可在厭氧、兼性厭氧條件下生長。乳酸菌通常耐酸,在pH3.0-4.5時(shí)仍可生長,能耐受動(dòng)物胃腸道的酸性環(huán)境,因此乳酸菌能在恒溫動(dòng)物和魚類胃腸道中廣泛分布。其中,乳酸桿菌(Lactobacillus)、肉桿菌(Carnobacterium)等是魚類胃腸道中比較常見的乳酸菌種類?,F(xiàn)有研究顯示,餌料和水體中的有益菌進(jìn)入魚消化道后若能定植于腸道并大量繁殖,則可與消化道其它有益菌形成優(yōu)勢(shì)菌群,通過競(jìng)爭(zhēng)營養(yǎng)物質(zhì)和腸壁附著位點(diǎn)以及分泌抑菌物質(zhì)抑制致病菌的增殖,提高魚類的抗病力。Gildberg[18]報(bào)道,飼喂廣布肉桿菌(Carnobacterium divergens)制劑三周后,該菌成為大西洋鱈
(Gadus morhua)仔魚腸道的優(yōu)勢(shì)菌,仔魚的抗病力有一定的提高。王福強(qiáng)等[19]報(bào)道,投喂含有1.2×109cfu/g乳桿菌的飼料5 d后,牙鲆(
Paralichthys olivaceus)消化道定植的乳酸菌超過106cfu/g,同時(shí)弧菌數(shù)量明顯下降,提示乳桿菌能有效抑制弧菌的生長。Campos[20]報(bào)道,多株乳酸菌均通過產(chǎn)生細(xì)菌素抑制病原菌的生長。同時(shí),乳酸菌在代謝過程中產(chǎn)生乳酸、乙酸等有機(jī)酸,可降低消化道pH值。因?yàn)槎鄶?shù)致病菌難以在低pH值環(huán)境中生長良好,因此乳酸菌造成的這種低pH值環(huán)境能抑制病原菌的生長和繁殖。此外,大量研究顯示,乳酸菌是良好的免疫激活劑,添加于餌料中能有效刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng),增強(qiáng)魚類的抗病力[3]。
假單胞菌(Pseudomona)為革蘭氏陰性直或略彎曲的桿菌,不產(chǎn)生芽孢。作為魚類消化道的正常菌群,某些假單胞菌具有作為益生菌的潛力[21,22]。早期研究表明,熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)能產(chǎn)生抑菌物質(zhì)抑制魚類病原菌的生長[23,24]Gram[12]研究表明,熒光假單胞菌AH2能體外抑制鰻弧菌(Vibrio anguillarum)的生長,體內(nèi)試驗(yàn)亦得到一致結(jié)果,即熒光假單胞菌能降低人工感染鰻弧菌虹鱒的死亡率:感染鰻弧菌7 d后試驗(yàn)組虹鱒的死亡率僅為25%,而對(duì)照組的死亡率高達(dá)47%。Spanggaard[25]從虹鱒體表、腮和腸道分離到45株能抑制致病性鰻弧菌生長的細(xì)菌,其中28株屬于假單胞菌。作者選擇了其中9株(7株假單胞菌和2株肉桿菌)進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn),結(jié)果表明6株假單胞菌能提高人工感染鰻弧菌虹鱒的存活率。然而gram[26]研究表明,假單胞菌雖然能體外抑制殺鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida),但對(duì)于人工感染殺鮭氣單胞菌的大西洋鮭則沒有保護(hù)作用。因此,假單胞菌對(duì)魚類的保護(hù)作用及對(duì)消化道微生物的調(diào)控還有待深入研究。
弧菌通常菌體較小,彎曲成弧狀或逗號(hào)狀,廣泛存在于海水及淡水中,亦可見于動(dòng)物和人的消化道。雖然許多弧菌對(duì)于魚類具有一定的致病作用,但少數(shù)研究表明某些弧菌也具有一定的益生作用。Austin[27]報(bào)道,溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)能有效降低殺鮭氣單胞菌和兩株致病性弧菌對(duì)大西洋鮭(Salmo salar)的致病作用,以該菌作為益生菌時(shí),大西洋鮭的存活率顯著提高。Iranto[28]報(bào)道,分離自虹鱒消化道的河流弧菌Vibrio fluvialis作為飼料添加劑時(shí),人工感染殺鮭氣單胞菌虹鱒的存活率明顯提高。同一試驗(yàn)中,飼喂河流弧菌虹鱒的血清和粘膜的殺鮭氣單胞菌抗體沒有明顯提高,而紅細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞數(shù)量增加,溶菌酶活性增強(qiáng)。但是,迄今尚未見弧菌對(duì)魚類消化道微生物調(diào)控的報(bào)道。
2.2化學(xué)益生素
化學(xué)益生素一詞譯于“Prebiotics”,也稱前生素、益生元等,是一類非消化性食物成分,到達(dá)后腸后可選擇性地刺激動(dòng)物腸道有益菌的增殖,抑制潛在有害菌的增殖的作用[29]?;瘜W(xué)益生素必須具備以下三個(gè)條件:第一,在消化道前段不會(huì)被降解和吸收;第二,作為一種或幾種腸道細(xì)菌特異性的底物,選擇性地促進(jìn)相應(yīng)細(xì)菌的增殖;第三,能夠改善腸道菌群結(jié)構(gòu),促進(jìn)宿主健康。目前研究和應(yīng)用較多的化學(xué)益生素主要為寡糖和非淀粉多糖。陸生動(dòng)物研究結(jié)果表明,許多寡糖進(jìn)入小腸后,不能被病原菌如大腸桿菌和沙門氏菌利用,只能被有益菌如乳酸桿菌和雙歧桿菌等分解利用,從而促進(jìn)有益菌大量繁殖。同時(shí),有益菌大量繁殖使腸道pH 值下降,這樣一方面直接抑制病原菌的生長,另一方面使腸道氧化還原電勢(shì)降低,具有調(diào)節(jié)腸道正常蠕動(dòng)的作用,間接阻止病原菌在腸道中的定植[30]。Mahious[31]研究了菊糖和果寡糖作為化學(xué)益生素對(duì)大菱鲆Scophthatmus maximus生產(chǎn)性能及消化道微生物的影響。結(jié)果表明,果寡糖能顯著提高大菱鲆的生長速度。此外,飼喂果寡糖的大菱鲆腸道中分離到大量芽孢桿菌,而其它飼料組則沒有分離到芽孢桿菌,提示果寡糖能選擇性的促進(jìn)芽孢桿菌等有益菌的增殖。國內(nèi)張紅梅[32]研究了甘露寡聚糖對(duì)生長期鯉魚的生長及腸道菌群的影響。結(jié)果表明,餌料中添加甘露寡聚糖45 d后,鯉魚腸道大腸桿菌的數(shù)量顯著降低,而乳酸桿菌和雙歧桿菌(Bifidobacterium)數(shù)量略有上升,且以添加0.3%的甘露寡聚糖試驗(yàn)組結(jié)果最為明顯。作者由此得出結(jié)論:餌料中添加0.3%甘露寡聚糖可使鯉魚養(yǎng)殖達(dá)到最好的生產(chǎn)性能,也最有利于腸道菌群的優(yōu)化。
大量研究表明,非淀粉多糖能提高魚類的免疫功能[33,34],但有關(guān)非淀粉多糖對(duì)魚類消化道細(xì)菌菌群的調(diào)控研究很少。Ringo[35]利用梯度稀釋平板技術(shù)和電鏡技術(shù)相結(jié)合研究了糊精和菊糖對(duì)大西洋鮭魚后腸微生物的影響。結(jié)果表明,飼喂糊精的鮭魚腸道微生物主要為葡萄球菌(Staphylococcus、假單胞菌、微球菌(Micrococcus)等,而飼喂菊糖的鮭魚后腸道細(xì)菌數(shù)量較低,但肉桿菌、葡萄球菌、鏈球菌(Streptococcus)等革蘭氏陽性菌成為優(yōu)勢(shì)菌群,提示菊糖對(duì)大西洋鮭腸道菌群具有較好的調(diào)控作用。國內(nèi)蔡雪峰等[36]發(fā)現(xiàn)殼聚糖對(duì)虹鱒幼魚腸道菌群也有相似的影響,即飼喂殼聚糖后虹鱒幼魚腸道革蘭氏陽性菌的數(shù)量上升,而假單胞菌等革蘭氏陰性菌數(shù)量下降。最近,遲淑艷[37]研究表明,奧尼羅非魚Oreochromis aureus
×Oreochromis niloticus
飼料種添加1.0%~1.5 β-葡聚糖,可以明顯改善其生長性能和抗嗜水氣單胞菌感染的能力。
總之,化學(xué)益生素作為飼料添加劑能調(diào)節(jié)魚類消化道微生物組成,提高魚類的抗病力和生產(chǎn)性能,但化學(xué)益生素對(duì)魚類消化道細(xì)菌菌群的調(diào)控機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。
2.3 中草藥
中草藥來源于天然植物,成分眾多,除含有具有直接醫(yī)療價(jià)值的有效成分外,還含有蛋白質(zhì)、多糖、脂類、微量元素、維生素等營養(yǎng)成分,這使中草藥尤其復(fù)方中藥具有多種藥理效應(yīng)。大量研究表明,中藥能夠明顯改變腸道細(xì)菌組成及數(shù)量,使有益菌類增加,并抑制條件致病菌的生長,從而有效地調(diào)節(jié)病魚胃腸道的微生態(tài)平衡。羅琳等[38]報(bào)道,穿心蓮對(duì)草魚(Ctenopharyngodon idellus)腸道細(xì)菌的種類,尤其是優(yōu)勢(shì)菌群的種類沒有明顯影響,但1%和2%的穿心蓮可降低草魚腸道內(nèi)氣單胞菌的數(shù)量。劉紅柏等[39]5 種常用中草藥黃芩、板蘭根、黃芪、茯苓及魚腥草作為飼料添加劑飼喂鯉魚,均使鯉魚腸內(nèi)細(xì)菌數(shù)增加,并對(duì)組成產(chǎn)生影響,試驗(yàn)組出現(xiàn)了對(duì)照組所沒有的芽孢桿菌屬及棒桿菌屬(Corynebacterium)細(xì)菌,并且使優(yōu)勢(shì)菌群的組成發(fā)生了改變,不動(dòng)細(xì)菌屬明顯增加,芽孢桿菌屬所占的比率也在10%以上,而氣單胞菌屬、鄰單胞菌屬、假單胞菌屬、弧菌屬及腸桿菌科細(xì)菌數(shù)量則明顯下降。但是,由于中草藥成分非常復(fù)雜,其對(duì)魚類消化道微生物的調(diào)控機(jī)理尚不清楚,有待今后進(jìn)一步研究。
3 展望
雖然“魚類消化道微生物分布及其調(diào)控”的研究正成為當(dāng)前國際上的一個(gè)前沿研究領(lǐng)域。但是長期以來,由于傳統(tǒng)方法的嚴(yán)重制約,特別是消化道微生物區(qū)系復(fù)雜多樣且需厭氧環(huán)境,有關(guān)魚類消化道微生物區(qū)系及其調(diào)控的研究還很薄弱。這也間接導(dǎo)致了生產(chǎn)中益生素和化學(xué)益生素的使用效果不穩(wěn)定,限制了其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用。因此,加強(qiáng)魚類消化道微生物組成和結(jié)構(gòu)的研究,指導(dǎo)高效綠色的益生素、化學(xué)益生素和中草藥的開發(fā)和使用,促進(jìn)我國水產(chǎn)養(yǎng)殖的同時(shí),還將有助于從根本上解決我國水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中抗生素和其它化學(xué)藥物的長期大量使用所帶來的負(fù)面效應(yīng),具有重要而深遠(yuǎn)的意義。




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