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畜牧人

標(biāo)題: 關(guān)于淀粉糊化度的測定方法 [打印本頁]

作者: glory143    時間: 2008-12-23 10:36
標(biāo)題: 關(guān)于淀粉糊化度的測定方法
試劑:

1. 聯(lián)甲苯胺(o-Toluidine)試劑:溶解1.5g硫脲于940ml冰醋酸,家60ml甲苯胺,存于有色玻璃瓶中。

2. 乙酸鈉緩沖液:溶解4.1g無水乙酸鈉與1L蒸餾水,用乙酸調(diào)pH至4.5。

3. 葡萄糖淀粉酶溶液:將2g根霉葡萄糖淀粉酶(目錄號No.A-7255,Sigma Chemical Co.供貨)分散于250ml乙酸緩沖液,用玻璃棉濾紙(Whaatman No.GF/A)迅速過濾,限2小時內(nèi)使用。葡萄糖淀粉的特異活性是在pH4.5,溫度40℃下生成28.4umol葡萄糖/min/mg蛋白。

操作規(guī)程:

1. 制備淀粉部分糊化的樣品。將20mg樣品分散于50ml離心管中的5ml蒸餾水中。

2. 制備淀粉完全糊化的樣品。將20mg樣品分散于50ml離心管中的3ml蒸餾水和1ml 1N NaOH中。5分鐘后加1ml 1N HCl。

3. 葡萄糖淀粉酶水解和測定葡萄糖。每個離心管加250ml葡萄糖淀粉酶溶液,40℃保溫30min。加2ml 25%的三氯乙酸鈍化葡萄糖淀粉酶(并使該酶和其他蛋白沉淀),以16,000×g離心5min。

4. 取0.5ml上清液于試管中,加入4.5ml聯(lián)甲苯胺(o-Toluidine)試劑,將試管置沸水中10min,用冷水冷卻,加5ml冰醋酸,測定在63.nm的吸收率。

按下式計算淀粉糊化度:

Y=100*(B-K)/ (A-K)

K=A*(C-B) / (A-2B+C)

其中,A=全糊化淀粉的吸收率;

B= 全糊化淀粉和經(jīng)過30min的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率;

C= 部分糊化淀粉和經(jīng)過60 min的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率;

K= 1%完整淀粉經(jīng)過30min水解后的吸收率。這對每種淀粉或特定處理的淀粉是一個常數(shù),常規(guī)分析中只需測=定一次。

這規(guī)程也可用來計算總淀粉%;用葡萄糖溶液(720ug/ml)制定標(biāo)準(zhǔn)曲線。按前法第

2步和第3步驟處理樣品,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取葡萄糖濃度。按下式計算淀粉含量:

淀粉總量%=葡萄糖*0.9*100/樣品重(干基)

這個方法有誰做過??“每個離心管加250ml葡萄糖淀粉酶溶液”“測定在63.nm的吸收率”這兩個地方感覺有問題,做過的出來說一下,謝謝
作者: yylz417    時間: 2009-3-21 13:05
實驗當(dāng)中!!
[img][/img]
作者: glory143    時間: 2009-3-21 15:24
兄弟,你看到帖子最后一句話沒有啊??
這方法里存在錯誤啊,在63nm測吸光度???63是X光譜了吧???再有250ML的離心管???也太大了吧
16,000×g下離心???




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