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畜牧人

標題: 多維預混合飼料中維生素E的測定 [打印本頁]

作者: hdx20082008 時間: 2009-3-5 19:01
標題: 多維預混合飼料中維生素E的測定
測定多維預混合飼料中的維生素E有多種的方法。最常用的方法一般會使用將樣品進行皂化，然后用溶劑進行萃取，揮發(fā)溶劑后再進行稀釋，配制到一定的濃度，再進行HPLC的分析。　　我們先來討論一下皂化的作用。皂化是一種化學反應，是酯類化合物和強堿反應，生成醇和酸的反應，生成的酸再和強堿反應生成鹽和水。在飼料的分析中不是利用反應的生成物，而是有以下的作用：
　　對于用明膠包膜的維生素組分，可以打開明膠包膜，使內容物溶出。
　　對于脂溶性維生素，通過萃取可以去除一部分雜質。
　　可以在分析低含量脂溶性維生素樣品時，濃縮組分。
　　從上面的論述中我們可以了解到，皂化反應在分析維生素E組分時，可以起去除一部分雜質，在分析低含量樣品時可以起到濃縮組分的作用。在進行皂化反應和萃取的過程中，操作的難度較高，影響準確度的因素很多，如果操作者不熟練的話，則會得到偏低的結果，甚至測不出維生素E來。因為維生素E醋酸酯經皂化后會變成生育酚，而酚羥基從理論上說是帶有酸性的，極易破壞。所以化驗員要進行反復的練習后，并經過回收率的測試后，才能進行樣品的分析操作。對于多維預混合飼料中的維生素E，一般來說含量比較高，雜質的干擾也可以忽略。因此，下面推薦一種直接萃取的方法來進行分析，操作簡單準確度很高;
　　多維預混料中維生素E醋酸酯的測定
　　試驗方法
　　除特別注明外，試驗中所用試劑均為分析純，水為相應純度的水，溶液為水溶液，試驗儀器為一般實驗室設備。
　　試劑和溶液：
　　甲醇（HPLC級）
　　甲醇
　　維生素E醋酸酯對照品
　　標準溶液的制備：
　　稱取維生素E醋酸酯對照品約100mg （準確到0.0001g）, 置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻后再精密吸取10.00mL 置于另一100mL 棕色容量瓶中，用甲醇定容。濃度約為100μg/mL。
　　維生素預混料樣品溶液的制備：
　　稱取預混料約1g (精確到0.0001g)于100mL的容量瓶中，加入甲醇約70mL，置于50℃超聲波水浴中處理20 min，冷至室溫后用甲醇定容，充分搖勻。再取部分溶液用甲醇進行稀釋，最終濃度約在50 ~ 120μg/mL，取部分溶液離心，上層清液通過0.45 μm濾膜過濾后，用于HPLC測定。
　　進樣：
　　將標準溶液和試樣溶液各50μL依次注入儀器進行分析。（進樣量可以根據(jù)不同的儀器自行調整）
　　色譜條件
　　色譜柱：Lichrospher 100 RP-8, C8, 5μm, 250mm × 4.0mm

作者: hdx20082008 時間: 2009-3-5 19:04
流動相：甲醇（HPLC級）

　　流速： 1.0 mL/min

　　進樣量： 50 μL

　　檢測波長： 285nm

　　運行時間：約7min

　　分析結果的計算：

　　樣品中所含維生素E(mg/g)的效價可依照下式計算：

　　Cst × Wst × As × ns

　　維生素E =__________________________

　　W × Ast ×nst

　　式中：Cst — 維生素E對照品的含量，%；

　　Wst — 維生素E對照品的質量，m g；

　　Ast — 維生素E對照品的峰面積；

　　As — 樣品溶液的維生素E峰面積；

　　nst — 維生素E標準溶液的稀釋倍數(shù)；

　　ns — 樣品溶液的稀釋倍數(shù)；

　　W — 樣品的質量，g。

　　注：如果樣品中雜質太多，在高效液相色譜中與維生素E分離不完全，則應采用皂化的分析方法進行分析。

　　使用直接萃取的本方法進行多維預混料中維生素E醋酸酯的分析，其回收率可以高達95％以上，準確度非常的高。

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