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畜牧人

標題: 抗氧化酶的測定方法 [打印本頁]

作者: cuiyming    時間: 2009-3-31 08:52
標題: 抗氧化酶的測定方法
抗氧化酶(SOD、CAT、GXP)能否用放射免疫法測定啊?哪位老師解答一下!! 謝謝!!
作者: 李業明    時間: 2009-3-31 09:10
這個我真不懂!請專業老師指點一下吧!
作者: fansssss    時間: 2009-4-11 13:34
這個用一般的分光光度計比色法就解決了,為啥要用放免呢,我們通常買南京建成的試劑盒來測的。
作者: xmzhao    時間: 2009-4-14 11:23
血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定:
通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子自由基(O
2.-),后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽,在顯色劑的作用下呈現紫紅色,用可見分光
光度計測其吸光度。當被測樣品中含SOD時,則對超氧陰離子自由基有專
一性的抑制作用,使形成的亞硝酸鹽減少,比色時測定管的吸光度值低于
對照管的吸光度值,通過公式計算可求出被測樣品中的SOD活力。高等動
物細胞內只有兩種SOD即銅鋅-SOD(CuZn-SOD)與錳-SOD(Mn-SOD),
二者相加等于總SOD(T-SOD)。本試驗測定的即為血清與乳清中的總SOD
活力。
試劑組成與配制
試劑一:液體10ml×1瓶(天冷時或放冰箱會有部分結晶析出,需熱
水浴溶解后再用),用時加熱蒸餾水稀釋至100ml。
試劑二:液體7ml×1瓶,4-10℃保存。
試劑三:液體7ml×1瓶,4-10℃保存。
試劑四:液體0.5ml×1支,4℃保存,不可冷凍;4號稀釋液7ml×1
瓶,4℃保存;用時二者按1:14稀釋,可以一次稀釋,也可以分次稀釋。
配好的4號試劑4℃保存,不可冷凍。配好的可保存2-3個月。注:所
用吸嘴必須為專用且消毒處理過。
試劑五:粉劑×1支,用時加70-80℃蒸餾水75ml溶解后備用,若加
熱過程中水分蒸發減少,此時必須用蒸餾水補充至75ml,配好后的試劑
避光4℃冷藏。
試劑六:粉劑1支,用時加雙蒸水75ml溶解后備用,配好后的試劑
避光4℃冷藏保存。
顯色劑的配制:按照5號試劑:6號試劑:冰醋酸=3:3:2的體積
比配成顯色劑,4℃避光冷藏。
操作步驟
按表1-3-1進行
表1-3-1(Table1-3-1)SOD的測定過程
試劑測定管對照管
試劑一(ml)1.0 1.0
樣品(ml)a*
蒸餾水(ml)a*
試劑二(ml)0.1 0.1
試劑三(ml)0.1 0.1
試劑四(ml)0.1 0.1
用旋渦搖勻器充分混勻,置37℃恒溫水浴40分鐘
顯色劑(ml)2 2
勻,室溫放置10分鐘,于波長550nm處,1cm光徑比色杯,蒸餾水調
比色。
注:其中a*為樣品的取樣量,血清取50μl。
結果計算
SOD活力(U/ml)=(對照管OD值-測定管OD值)/對照管OD值×
2×反應體系的稀釋倍數×樣品測定前的稀釋倍數



碩士論文中的方法,希望有用!




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