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畜牧人

標題: 轉基因技術與動物育種 [打印本頁]

作者: shigang 時間: 2009-4-9 17:13
標題: 轉基因技術與動物育種
轉基因技術與動物育種
摘
要：從20世紀80年代中后期以來，現代生物技術的出現和各種分子生物技術的應用，使動物育種已開始從群體水平進入分子水平。轉基因技術最為21世紀發展最為迅速的生物高新技術之一，隨著其不斷發展在動物育種中取的很大的成果。因此轉基因技術具有誘人的前景和發展前途。本文簡要總述了轉基因技術的原理、方法、研究前沿領域以及應用與動物育種的進展情況。
關鍵詞：轉基因技術
轉基因動物
動物育種
引言:常規育種方法是建立在利用種內遺傳變異的基礎之上的。但對于遠緣生物的雜交是及其困難的，有些甚至是不可能的，這就是眾所周知的種間生殖隔離。那么能否打破這種隔離，使一種生物同時具有一種或幾種生物的優良性狀，進而培育符合人們意愿的生物新品種，更好的服務于人類？科學家們經過多年艱苦的努力和探索，已經使其成為可能，這就是在基因工程發展的基礎上，融基因工程和胚胎工程為一體的轉基因技術。這種技術的應用可以打破這種種的界限而使育種工作可以充分利用所有遺傳變異，其實質就是通過對胚胎導入、去除或抑制部分基因，培養出獨具特色的動物。自Palmiter和Brinster1982年將大白鼠生長激素基因顯微注射到小白鼠受精卵獲得比正常小鼠大1倍的“超級巨鼠”以來，世界各國科學家競相開展轉基因技術研究，通過多種轉基因方法在豬、牛、雞、兔、羊等動物上獲得成功。轉基因技術不僅可以加快改良遺傳性狀的進程，使選擇的效率提高，改良的機會更多，而且可以提高動物生長速度以及動物的抗病力。如今轉基因技術正在對動物育種產生一場新的革命[1]。
1 轉基因技術的概述
1.1轉基因技術的概念

轉基因技術是一門起始于20世紀70年代高新技術，是按照科研和生產需要在分子水平上用人工方法提取或合成不同生物的遺傳物質（DNA片段）,然后在體外切割,并連接形成重組 DNA,重組DNA再與載體的遺傳物質重新組合，將其引入到沒有DNA的受體細胞中，進行復制和表達，生產出符合人類需要的產品或創造出生物的新性狀,并使之能穩定地遺傳給下一代[2]。簡要地說是指將體外重組DNA通過顯微注射或載體系統導入胚胎細胞中，并整合到基因組中，得到穩定地表達的技術[3]。
1.2轉基因動物技術的概念

轉基因動物技術是在20世紀80年代初發展起來的。從這項技術誕生的那天起,它就在改良畜禽生產性狀、提高畜禽抗病力以及利用轉基因畜禽生產非常規畜牧產品(如人藥用蛋白和工業用酶)等方面顯示了廣闊的應用前景[4]。它是將外源基因或體外重組的基因轉移到動物的受精卵內,使其在隨后發育的動物體內得到整合和表達，以產生具有新的遺傳特征或性狀的動物個體的過程，或者是將外源基因在特定調控元件作用下在某些宿主組織中進行獨立的復制,并在一定的時間內表達外源蛋白的過程[1]。
1.3轉入基因的選擇[5]

目前，在動物轉基因的選擇上主要考慮能提高動物的生長速度、產生性能、繁殖性能、抗性及開拓新的經濟用途等幾個方面，主要包括四大類: 1）編碼蛋白基因，這類基因參與機體組織生長發育的調節，如生長激素基因等；2）抗性基因，抗逆、抗病等; 3）經濟性狀的主效基因，如豬和綿羊的高繁殖力基因和肉牛的“雙肌”基因等，這些基因與動物的生產力密切相關；4）治療人類疾病所需的蛋白質基因,以拓寬動物的經濟用途

1.4轉基因動物的遺傳修飾策略[6]
轉基因動物的遺傳修飾策略包括：
（1）導致產生新功能的基因組修飾（gain of function,GOF）,主要有普通轉基因及基因重復；
（2）導致功能丟失的基因組修飾（loss of function, LOF），主要有插入突變、大片段缺失突變、點突變及條件性基因缺失突變；
（3）導致基因替換的基因組修飾，主要利用基因打靶技術使替換位點上的內源基因被另一個基因取代，使得內源基因丟失的同時，獲得另外一個基因的功能，這種策略通常比較精確，不影響鄰近位點基因結構；
（4）染色體畸變。
1.5 生產轉基因動物的一般步驟包括[5]:
（1）選擇能有效表達的蛋白質。

（2）克隆與分離編碼這些蛋白質的基因。

（3）選擇能與所需動物組織特異性表達方式相適應的基因調節序列。

（4）把調節序列與結構基因重組拼接，并在培養細胞或小鼠中預先檢驗其表達情況。

（5）把拼接的基因引入到受精卵的細胞核中。

（6）把引入后的受精卵移植到子宮，完成胚胎發育。

（7）檢測幼畜是否整合外源基因、外源基因的表達情況以及外源基因在其后代中的傳遞情況。部分后代細胞攜帶有轉入的外源基因，利用這些動物培育的新的品系。
2 轉基因動物技術的一般方法

使動物組織能夠特異性地表達外源蛋白質，需要人為地將編碼這種蛋白質的基因轉移到動物的胚胎中,使目的基因能夠整合到動物染色體上，進而得到表達 [7] 。
制作轉基因動物的方法主要有以下幾種。
2.1顯微注射法
是由美國人Gordon于1980 年首次發明。顯微注射法的制作過程是將SV40 的TK基因整合的質粒以顯微注射法注入到小鼠受精卵原核中,首次成功地培育出轉基因小鼠。其基本原理是通過顯微鏡注射將外源基因直接注射到受精卵的雄原核內,將外源基因整合到DNA 中,發育成轉基因動物。其優點是直接對基因進行操作,整合率較高.缺點是技術難度高,成功率低[8,9,10,11]。
2.2 逆轉錄病毒傳染法

此法的研究是1974 年Janenissh等將SV40DNA注入小鼠囊胚腔中，獲得轉基因小鼠。其原理是利用逆轉錄病毒的LTRs區域具有的轉錄啟動子活性這一特點，將外源基因連接到 LTRs的下部進行重組后，再使之包裝成為高滴度的病毒顆粒，直接感染受精卵或注入囊胚中，攜帶外源基因的反轉錄病毒DNA可以整合到宿主染色體上。逆轉錄病毒法的優點是操作簡單，外源基因的整合率高，動物病毒所具有的啟動子不但可以引發一些選擇標記基因的表達，還能引發所導入的外源基因的表達，缺點是逆轉錄病毒載體容量有限并且外源基因

難以植入生殖系統。成功率較低。而且逆轉錄病毒作為載體具有致癌性，所攜帶的外源基因片段的長度受到限制，一般不超過10kb [8,12,13,14,15]
。
2.3精子載體法
Lavitrano等1989 年首次報道把PSV CAT質粒與小鼠的附睪精子共育30min,進行體外受精和移植,獲得了陽性鼠并能遺傳給后代。但不少實驗利用相似的方法進行研究，未能重復這一結果。直到十年后Anthomy等才驗證了這一事實。其原理是直接用精子作為外源DNA載體的基因轉移法，精子直接與外源的DNA混合培養，外源基因可以進入精子頭部，受精后可以發育成轉基因動物。這種方法的優點是利用精子的自然屬性克服人為機械操作給胚胎
的損傷，整合率高，成本低。缺點是結果不穩定 [9, 10,11,13,15,16]
。
2.4 體細胞核移植法

1997 年，英國PPL公司的科學家Schnieke與羅斯林研究所的Wilmut等聯手通過體細胞核移植技術率先在世界上制作了轉基因綿羊Dolly。研究者將人凝血因子IX基因整合到羊胎兒的成纖細胞中，然后用整合了IX基因的羊胎兒成纖細胞作核供體，獲得了3只轉基因綿羊（其中一只生后不久死去）。該技術的步驟是：首先將外源基因導入到體細胞中，再將該細胞進行培養，選擇其中有外源基因的細胞進行擴增，再把這種細胞的細胞核移植到去核的卵母細胞中，將重組胚胎進行體外培養或者植入同步化的假孕動物的輸卵管進行動物克隆，從而獲得轉基因動物。體細胞核移植制備轉基因動物總效率高于原核顯微注射法，另外可以在核移植前選擇后代的性別，產生轉基因后代遺傳背景及遺傳穩定性一致，故不需選配，僅一代就可建立轉基因群體，節約時間和費用。存在的問題是研究基礎較為薄弱，體細胞系難以建立，細胞的傳代次數有限，成功率低 [10,14,17,18,19,20,21]
。
2.5 胚胎干細胞法
胚胎干細胞(ES細胞,Embryo
Stem
Cell)
指囊胚期的內細胞團中尚未進行分化的細胞。這種細胞具有類似癌細胞無限繁殖和高度分化的潛能，將目的基因轉移入ES細胞導入囊胚或經篩選后對轉入外源基因的ES細胞進行克隆，可培育轉基因個體。1981 年Evans等用不同的培養系統從小鼠囊胚的內細胞團分離開建立了多潛能干細胞。Bradly等于1984年用顯微注射法將從 129/SV/EV 鼠中分離的ES細胞株移植到胚泡腔，植入受體母鼠子宮，發育成生殖嵌合體。該方法的優點是操作簡單，可對轉化的干細胞進行陽性選擇，提高了轉基因效率；可以克服外源基因隨機整和所帶來的一些弊端，而且可在體外條件下對外源今音的表達進行篩選，為創造特定的預知轉基因動物開拓了一條新的途徑。缺點是第一代一般是嵌合體，很難把外源基因遺傳給后代；而動物育種需經過嵌合體途徑，受ES細胞的生殖嵌合能力以及交配概率的影響，實驗周期較長 [8,13,14,17,18,22]
。
2.6
人工酵母染色體法
人工件木染色體法是近年來發展起來的新型載體，能夠克隆出百萬堿基對的大片段外源DNA 。該方法可以通過兩條技術途徑達到轉基因的目的。第一條途徑是胚胎干細胞轉染酵母人工染色體后，體外篩選。陽性胚胎干細胞囊胚腔注射；第二條途徑是酵母人工染色體的原核注射。其優點是：（1）保證巨大基因的完整性；（2 ）保證較長的外源片段在轉基因動物研究中的整合率提高；（3）鑒于基因的完整性，目的基因上下游側翼序列可以消除或減弱基因整合后的位置不變。因此，人工酵母染色體法具有廣闊的應用前景。Fujiwara等建立210KB人工酵母染色體DNA轉基因小鼠，在乳腺獲得高水平表達人乳白蛋白，而未表現出普通轉基因鼠所出現的位置效應 [14,15,18,22]
。
2.7
基因打靶技術

基因打靶技術，也稱定位整合技術?；虼虬械姆椒ㄊ菍⒓毎蚪M中的某一序列克隆并加以改造后重新導入細胞中，這一序列就可以與基因組內的同源序列發生重組，從而將改造后的基因轉移到基因組沒，實現基因的定位突變。1988 年Mansow首次采用該技術使轉移基因在體內的定點整個成為現實，產生了敲除特定基因的轉基因小鼠。該技術的方法包括基因敲除和基因契入，同源重組等方法。此方法的優點在于清除了盲目性和偶然性，并且整合位點，精確表達水平高。其缺點是產生的串聯重復序列不穩定，能自發進行二次同源重組
[8,11,12,14,16,18]
。
2.8
原始生殖細胞技術

原始生殖細胞（Primordial germ cell,PGC ）介導的轉基因技術在原理和方法上與ES細胞技術相似。而且制作轉基因家禽方面有明顯的優勢。Brimster將ZF---LacZ系供小鼠的PGC植入C57B2/6XSTL雜交一代小鼠的曲精管，發現移植后的PGC能發育成具有受精能力的精子細胞，并能產生后代，Nationtff等于1994 年用此方法制作了轉基因雞。而大家畜PGCS可否像小鼠ES細胞那樣抑制分化并增加，到目前還不能得出確切結論。如果能，這將為動物轉基因帶來一場革命 [9,19]。
2.9脂質體介導法

將構件的還有外源基因的載體通過用脂質體介導的方法將外源基因轉染培養的體細胞，然后，篩選的細胞與轉核的卵母細胞融合，經電激活在體外培養至囊胚移入受體,最終獲得轉基因個體。脂質體易于制備并具有高效運載DNA片段的能力,其最大特點是可與受體細胞類型發生結合,受體細胞會將含外源基因的脂質體吞噬進來,從而實現了基因轉移.岳軍明等采用陽離子脂質體介導技術將人EPO基因轉移到小鼠體內,為貧血病人的基因治療提供了科學依據 [11,18]
。
2.10 電擊法
電擊法又叫電穿孔法，電脈沖刺激法或電場轉移法。其原理是外界的高電壓脈沖可以改變細胞膜的結構，使膜產生可變性的電穿孔，從而使得一定大小的DNA分子通過細胞膜進入細胞核，并進一步整個到宿主DNA上。1992年，Lonue等利用該方法在魚類的轉基因研究中獲得成功。許麗艷等利用該方法制作了轉人A Y W基因家蠅 [8,11,18]
。
2.11胞質內顯微注射法
鑒于精子載體法存在較大爭論，1999 年Authony CF perry等預先將小鼠精子進行破膜處理，與編碼綠色熒光蛋白GTP或S—半乳糖苷酶報道分子的外深DNA短時間共孵育，然后微注射入減數分裂Ⅱ期的卵母細胞中，最后可獲得轉基因的表達胚胎，然后通過胚胎移植能得到轉基因動物 [15,21,22]
。
2.12
扎刺法
這種方法是先將胚胎放在含有目的基因的培養液里，然后用針扎到細胞或細胞里。針快速拔出，此時外源基因就進入細胞核。細胞膜結構的流動性隨之而關閉，胚胎內進入的溶液很少。這種方法比顯微注射快，對胚胎損害小，但轉基因頻率低 [8]
。

除上述幾種常用的轉基因方法外，人們為了適應于一些特殊需要也探索了一些其他的方法。如畸胎瘤細胞介導法，激光導入法，受體介導法，染色體片段顯微注射法，高效微彈法等，但均因不太成熟不能廣泛使用。綜上所述，雖然目前使用的制備轉基因動物的方法也不少，但總體看來，仍不是十分理想，效率較低 [22]
。

3提高轉基因效率的方法[10,22]

轉基因的效率主要體現在導入基因的整合與表達上。轉基因在宿主體內的整合與表達一直是轉基因基礎研究的熱點。主要表現在兩個方面，一是基因構件的設計和轉基因陽性胚的篩選方法，二是對“位置效應”有緩解作用的特殊DNA 序列的研究和基因共轉移的探索。
3.1 基因構件的設計
3.1.1 啟動子和內含子

啟動子決定了外源基因在體內能否表達及表達效率的高低。把外源基因及其相配套的啟動子重組后，導入受體動物細胞，使其在染色體特異位點上進行定向重組，整合與表達，是建立轉基因動物及其應用研究的關鍵環節。選擇能指導外源基因高水平表達的啟動子，對于研究外源基因在轉基因動物中的表達十分重要外源基因的有效表達還取決于轉入基因是否有內含子，在轉基因動物中用 DNA比CDNA 有更適宜的表達。Chol 和Palmiter 分別用實驗證明了這一點。
3.1.2 增強子，反式作用因子和載體

由于增強子的作用無方向性和位置性，外源DNA 整合后可能受插入位點臨近部位宿主增強子序列的作用，因而，構建基因時帶有增強子序列，將會有效地提高目的基因的表達水平。另外，研究發現，某些增強子具有組織特異性，對實現目的基因的組織特異性表達有重要作用。反式作用因子在外源基因的特異表達中不僅能激活不同種外源基因轉錄，而且能結合到染色體的不同位點，同時，將一個基因的調節序列與另一個基因的結構序列重新組合，可以產生新的組織特異性表達。自從Cohen 等1973 年引入質粒PSC101 作克隆載體以來，克隆載體的整體結構與效率已有極大的發展改進，酵母人工染色體載體是近年來發展起來的新型載體。利用該載體能保證巨大基因的完整性，可清除或減弱位置效應，從而提高外源基因的表達水平。
3.1.3 轉基因定位整合設計

轉基因的定位整合，可通過打靶技術實現，該技術可以清除操作過程的盲目性和偶然性，進行有目的基因定位，從而提高轉基因效率。
3.2 體內標志系統的應用

解決轉基因動物效率低的一個方法是發展一種著床前篩選轉基因陽性胚胎的方法，目前應用的有PCR 法和體內標志系統即使用報道基因的方法，一般常用的報道基因有細菌氯酶素乙酰基轉移酶（CAT），S—半乳糖苷酶，將其作為轉基因動物的標志，這些標志系統的成功應用大大提高轉基因動物的生產效率。另外，修正外源基因mRNA
的錯誤剪接，增加外源基因拷貝數，增加核糖體進入位點等方法也可以提高轉基因的表達水平。
3.3
特殊DNA 序列的研究

對位置效應有緩解作用的特殊的DNA 序列包括MAR、LCR 及隔離子，這些DNA 序列要通過特殊的分子機制來激活外源DNA 的表達。MAR 序列是指細胞核中與核工業骨架基質結合的DNA
區段。其特點是富含DNA 拓撲酶Ⅱ可切割的序列對MAR 序列可以提高基因表達效率的原因尚不是很清楚.鑒于MAR幾個物種共同的特征是位于其機能轉錄單位的邊界,因此推測MAR 序列有可能通過核內因子(拓撲酶Ⅱ等)使附近基因形成獨立的調控元,從而屏蔽位置效應對轉基因表達的影響。LCR 是另一類對基因表達有促進作用的特殊DNA,其結構和機能在進化上是相當保守的。通過幾個物種B-珠蛋的附近LCR
序列研究表明:⑴ LCR 序列使與其相連的外源基因在轉基因鼠系中表現出非位點依賴性高效表達;⑵LCR 影響下游附近 200Kb 區域染色體結構及DNA 復制模式;⑶LCR 與珠蛋的基因相互作用具有組織及發育特征性;⑷珠蛋的基因LCR 具有組織特異性DNaseI 超敏位點.綜合實驗推測,LCR 可以摒除位置效應的主要原因可能是通過其鄰近染色體開放組織來起作用。隔離子序列在染色體中的作用可能是干擾其上游順式元件和其下游DNA
序列之間的相互作用,這只是一種假設,深層原因還需進一步研究。
3.4 利用基因共轉移提高表達效率

利用基因共轉移提高外源基因表達效率的途徑又稱基因拯救。具體是將高效表達的基因結構與低效表達基因結構共轉移,其表達效率往往得到改善。共轉移之所以能提高外源基因的表達效益,有可能是因為某些基因中存在增強子或隔離子序列或是某些基因的轉錄激活同時帶動其它基因的轉錄激活。共轉移緩解外源基因的染色質化,則可能涉及內元的存在.
內元的存在可能使異染色質化受到某種程度的抑制。

4 轉基因動物檢測的方法[5]

以轉基因鼠為例，說明轉基因動物檢測的方法。雌鼠受精后12h分離受精卵，在體外將加工的外源基因注射到受精卵原核內，將10-30個注射過的卵移植到假孕母鼠的輸卵管種，待幼鼠出生后采樣提取DNA。將制備好的DNA樣品點到尼龍膜或硝酸纖維素膜上，再用所注射的基因做成探針，做斑點雜交，檢測出帶有外源基因的小鼠。然后采集血樣或外源基因表達的器官組織用以制備RNA 。用外源基因作為探針與制備的RNA進行Northern分子雜交，檢查外源基因是否轉錄成mRNA.接著對帶有外源基因的小鼠進行放射免疫測定，以檢測由外源基因合成的蛋白質。可用原位雜交法測出外源基因在染色體上的整合部位，還可將帶外源基因的小鼠進行繁殖，檢查基因是否進入生殖系統，以及在后代中的傳遞情況；另外，還可通過細胞培養建立轉基因的細胞株，研究基因在染色體上的位置和基因的調節，找出基因的表達與基因在染色體上的整合部位的關系。對其他動物除了收集受精卵的方式，注射外源基因和胚胎移植不同之外，其余的檢測方法都是相同的。

5轉基因動物技術在動物育種中的應用[23]
5.1 通過轉基因技術改良重要經濟性狀利用轉基因技術可以培育出生長快、產量高、回報率好的優良品種[24]
。
例如，Harnmer 等（1985）首先利用轉基因操作技術獲得了轉基因豬。
5.2 通過轉基因可實現抗病育種

例如，外源Mx-基因在豬體內的表達，可增強豬抗流感病毒的能力。導入乳鐵蛋白基因的轉基因奶牛，具有很強的乳房炎抗病力。
5.3 通過轉基因還可改進動物產品的質量

例如，β-乳球蛋白在奶牛和奶山羊中的表達，可改變乳蛋白的構成，從而提高奶的質量和價值。再如，一種調控蛋白結構基因的導入，可以改變羊或蠶支持蛋白的合成，進而改變羊毛或絲的成分，提高其質量。
5.4 通過轉基因技術，可使奶牛或奶山羊獲得在乳腺中生產對合成藥物有重要意義的肽和蛋白質的新功能，即乳腺生物反應器。
其核心內容是通過各種轉基因技術,將乳腺組織特異性啟動子驅動的外源基因,在動物乳腺組織高效表達,在乳汁中生產目的產品[25]。目前研制生物反應器的主要目的基因有：人類凝血因子、α抗胰蛋白酶、胰島素、人體白蛋白、干擾素等等。
5.5 通過轉基因可建立毒理試驗的動物模型

如生產對致癌物質、誘變劑和毒物敏感的轉基因動物，從而有助于對環境中的危險因素的認識。
5.6 轉基因動物在人類醫學研究中也有廣闊的應用

例如，通過研究制備用于人類臟器移植轉基因豬。通過轉基因還可為胃腸癌的研究和治療提供動物模型系統。
5.7 通過轉基因可使動物產生新的代謝途徑，從而提高其生產性能

例如，具有外源半胱氨酸生物合成基因的轉基因羊，其生長速度得到大幅度提高。
6 轉基因動物技術應用于動物育種中存在的問題及對今后育種工作的建議
6.1 轉基因動物技術應用于動物育種中存在的問題
動物轉基因技術目前存在的問題主要有以下幾個方面：
6.1.1 目前制作轉基因動物的效率還很低

綜合各國實驗研究的報道可以看出，目前動物轉基因的效率仍然很低，這是制約轉基因動物技術應用的關鍵問題之一。經典的轉基因技術（通常指顯微注射法）應用在牛上，形成的合子存活率僅15%，其中僅約18%能發育為活犢牛[26]。
6.1.2 難以控制轉基因在宿主基因組中的行為

現有的動物轉基因技術仍無法實現轉基因的定點整合，轉基因在宿主基因組中的插入是隨機的。轉基因在宿主基因組中的隨機插入可能導致內源基因的破壞或失活，也可能激活某
些正常狀態下關閉的基因，結果導致轉基因陽性個體出現不育、胚胎死亡和畸形等不良現象[27]。
6.1.3 難以形成轉基因畜禽品種或品系

轉基因的隨機整合使得每個個體的外源基因在其基因組上的位置均不一樣，因此無法使轉基因固定，加上轉基因的穩定遺傳問題也未能解決，因而也就無法形成轉基因畜禽品種或品系。迄今為止，雖然有一些轉基因動物個體的后代也表現為轉基因陽性，但未見有培育成功轉基因畜禽品種或品系的報道。
6.1.4 無法控制轉基因的表達頻率和水平[27]
多數轉基因的表達強烈地受著其在宿主染色體上整合位點的影響，即存在著所謂的位置效應(position
effect)，相鄰基因或異染色質區域影響著外源基因的表達，從而導致同樣的基因在不同的轉基因個體表達的水平很不一致，大部分轉基因(尤其是cDNA) 的表達水平低得難以檢測，而個別個體轉基因的表達水平卻又太高，使宿主動物難以承受。
6.1.5轉基因動物模型可能與預期不符

在鐮刀狀貧血動物模型研究中，人們試圖將突變的血紅蛋的基因轉入小鼠以獲得鐮刀狀貧血動物，但結果使研究者大失所望，所有的轉基因動物都只表現出鐮刀狀紅細胞的病變而未發現貧血 [10] 。
6.1.6
轉基因動物的安全問題

轉基因動物給人帶來好處的同時，也存在著許多安全性問題。其主要包括：（1）具有某些優勢性狀的轉基因動物可能會對生態平衡及物種多樣性產生不良影響；（2）轉基因動物器官移植可能會增加“人獸共患”病的機會；（3）用轉基因動物生產的食品有可能使食用者發生過敏反應；（4 ）轉基因動物的研究還將會引發一系列社會倫理問題。為了確保轉基因動物對人體的安全性，在大規模生產之前必須對轉基因動物進行嚴格和生物安全檢測 [19] 。
6.1.7人們不了解哪些基因控制著多數生理過程，不了解基因表達的發育控制和組織特異性控制的機制。
6.1.8 沒有制定出申請轉基因動物的合理方案，有關轉基因的倫理學問題還困擾著許多人。
6.2 對今后轉基因動物育種工作的建議[1]
6.2.1 進一步加強基礎性問題的研究

如在提高基因轉移效率和定點整合的方法學方面應予以優先研究;對一些已用于轉移的基因，對其發育和組織特異性表達的基因開關和表達物水平控制的機制，應給予充分重視。
6.2.2 加強學科間、部門間的合作

轉基因動物涉及生物學、醫學、畜牧學、獸醫學的理論和技術問題，需要多門類、多學科的研究人員通力合作。另外，此研究也是一個具有高風險、高投人的研究領域，需要政府企業和研究機構共同參與完成。
6.2.3 加強轉基因動物的安全性評估

隨著功能性基因組研究的開發以及新基因的不斷發現和利用，需要積累相應的大量科學數據來為新基因對環境和人體健康的影響做出正確評價。因此，有必要建立轉基因安全性評估中心和相關技術體系，為轉基因動物安全性提供科學依據盡管轉基因技術目前還不完善，還在發展之中，但與傳統的育種方法相比，它仍具有許多優點。相信隨著生物技術的進步，它將逐步走向成熟，給動物育種和生產帶來重大變革。

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