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畜牧人

標題: 正確評估和選擇酶制劑 [打印本頁]

作者: mche2005 時間: 2009-4-29 09:47
標題: 正確評估和選擇酶制劑
　　這篇文章轉載于飼料添加劑網。看了這篇文章，就可以或多或少的明白為什么在使用酶制劑方面存在著很多爭議和分歧。酶制劑要發揮作用，受到的影響因素實在太多。有酶制劑自身的一些限制性因素，如最適的Ph與畜禽的消化道Ph不相匹配，酶配方與飼料多糖含量及動物的發育階段不相匹配等。

　　現在酶制劑已廣泛應用于各種畜禽及水產飼料中，但目前市場上酶制劑生產廠家及種類繁多，標準不一，產品良莠不齊，給使用者帶來了諸多不便。怎樣比較不同廠家的酶制劑、怎樣選擇優良適用的酶制劑，成為困惑選購者的問題。本文就影響酶活力的因素、如何評價酶制劑的質量問題進行討論，供選用者參考。
1 酶的特點
1.1高效催化性
以發生反應的分子數表示，酶催化反應速度比非催化反應高108~1020倍；比化學催化劑的催化速度高107~1013倍。酶的高效催化性決定了酶能在動物體內新陳代謝中發揮有力的催化作用，如果沒有酶的作用，動物體內的各種生化反應都將無法進行，生命無法延續。
1．2高度專一性
一種酶只作用于某一種或某一類特定的底物。例如：蛋白酶只對蛋白質水解起作用。酶的專一性要求酶制劑的選擇要根據需要有的放矢，不能盲目使用。
1．3失活變性作用
蛋白質易于失活變性使酶具有不穩定性，凡能使蛋白質變性的因素都能破壞酶，使之喪失活性，如強酸、強堿、高溫等。
1．4 可調控性
酶活力的調控方式多種多樣，如抑制作用、誘導作用、酶原激活、共價修飾、激素調控等。這一性質對我們有兩方面的意義：1）在特定條件下，動物的內源消化酶會缺乏，如應激狀態（斷奶、逆境）、疾病發生、動物幼年或老年時期等，需要外源酶調控；2）酶制劑生產中，在一定工藝條件下可誘導產生大量高活性的酶。
2 酶活力的測定
酶促反應可表示為：底物+H20 消化酶 >水解產物
酶活力常用單位時間內、單位體積中底物的減少量或產物的增加量來表示。實際測定中以測定產物的增加量為好（因底物過量，變化量小不易測準，而產物從無到有可正確測定）。根據底物或產物的性質，可采用的方法有滴定法、比色法、電化學法、熒光法、同位素法等。
2．1測定方法
2．1．1同種酶測定底物和產物的方法不同。例如：淀粉+水淀粉酶 >可溶性還原糖。
測定底物的原理是：淀粉與I2液顯藍色，用藍色消失的時間或速度來表示酶活力。
測定產物的原理是：還原糖與3，5-二硝基水楊酸反應產生棕紅色物質，在540nm比色測定溶液顯色深淺來測定酶活力。
2．1．2同種底物或產物可用不同方法測定。例如：木聚糖+水木聚糖酶 >木糖等還原糖。產物還原糖可用3，5-二硝基水楊酸法、砷鉬酸鹽法、鐵氰化鉀法等測定，不同方法測定的結果可能不相同。
2．2 測定條件
2．2．1溫度
不同酶有不同變性及催化反應的最適溫度。同一酶樣在不同溫度下測定值有很大差異，見表1。
表1 同種酶制劑在不同溫度下測定的酶活力

溫度

酸性蛋白酶

木聚糖酶

纖維素酶

35℃

40℃

45℃

50℃

55℃

60℃

48706

49112

49910

50138

50021

49070

4851

4904

4967

5089

5203

4955

877

936

939

1027

962

893

2．2．2PH值
不同酶的最適pH值不同，同種酶制劑在不同pH下測定的酶活力見表2。
表2 同種酶制劑在不同pH下測定的酶活力

酸性蛋白酶

中性蛋白酶

木聚糖酶

纖維素酶

PH3.0

PH4.0

PH5.0

PH6.0

PH7.0

PH8.4

PH9.0

PH10.0

50158

50034

49850

35075

20026

10125

8064

5591

20245

30184

35073

49218

5153

49507

38895

24032

2475

3586

4975

5088

50143

4263

3259

2748

895

1011

1054

923

805

628

436

259

2．2．3底物種類
　　同種測定方法可采用不同底物測定。例如：纖維素+水纖維素酶還原糖。同樣采用3，5-二硝基水楊酸法（DNS法）測定還原糖的增加量，用于反應體系中的纖維素底物可以是羥甲基纖維素（CMC）、濾紙纖維、棉花纖維等，用不同底物測定的酶活力數值不同，見表3。
表3 同種酶制劑用不同底物測定的酶活力

酶樣
	1	2	3	4	5
CMC 濾紙	969 92	1153 36	1266 31	1341 130	2113 28

3．3酶活力定義
　　不同的定義，其酶活數值有很大不同。1961年，國際酶學委員會規定：在特定條件（25℃、最適pH及底物濃度）下，1min內轉化1μmol底物（或底物中1μmol有關基團）所需的酶量，為1個酶活力單位。此酶活力單位又稱國際單位，單位為μmol/min。
但實際應用中酶活力的定義，有些是出于應用方便，有些是沿用習慣。例如：目前所見的不同文獻或生產廠商對木聚糖酶活力的定義達6種之多，其酶活力數值大小迥異，見表4。
表4 木聚糖酶活力數值不同定義方法的不同

國際單位(IU)μmol/min

其他定義所使用單位及換算值

μmol/h

μmol/s

nmol/min

nmol/s

μg/min

與IU換算系

數酶活力

1000

60000

1/60

16.7

1000

1000000

1000/60

16700

150

150000

從表4中數據可見，雖然不同定義的酶活力數值差異很大，但只要測定方法和測定條件相同，換算后就可以直接比較。
3 酶制劑的質量評價及選擇
3．1質量評價
　　應用酶制劑的目的是幫助動物充分消化吸收飼料中的營養物質，提高飼料利用率，降低飼料成本，減少糞便對環境的污染。評價一種酶制劑優劣的主要指標是看它能否達到酶制劑的使用目的，因此主要從以下幾方面評價：1）酶活性高低；2）酶的種類和組成比例是否能夠滿足所飼養的動物的需要；3）酶制劑是否能在動物消化道中對所使用的飼料發揮預期的作用。
3．2酶種類選擇
3．2．1根據動物種類選擇
不同動物對酶種的要求有差別，見表5。
表5 不同動物對酶的要求

	豬	家禽	反芻動物	水產動物
需添加的主要酶種	內源消化酶、降解抗營養因子的酶	內源消化酶、降解抗營養因子的酶（要求更高酶活力）	以纖維素酶為主	內源消化酶為主，草食性種類補充半纖維素酶和纖維素酶

3．2．2根據動物生理需要選擇
　　在同種動物不同生理狀況下對酶有不同需求：1）消化機能尚未健全的幼年動物、由于疾病或衰老引起消化酶分泌不足的動物必須添加酶制劑幫助消化；2）健康成年動物當自身所產酶能完全滿足充分消化之需要時不需添加；3）當飼料中某些成分過多、有抗營養因子存在，阻礙正常消化過程，自身所產生的酶不能將底物完全消化時應該添加酶制劑。生產實踐表明，我國的高品質飼料中，仍有30%干物質、25%總能、50%總氮和55%磷不能被健康成年動物消化吸收，從糞便中排泄掉了，說明即使是健康成年動物對高品質精飼料的消化吸收，也不完全，有必要添加酶制劑。由于健康成年動物的消化不良多由飼料中抗營養因子引起，因此只添加助消化的酶制劑效果不明顯，必須加入降解相應抗營養因子的外源酶消除抗營養因子，這樣動物的內源消化酶才能充分發揮作用。加入外源酶種類主要根據日糧類型、日糧中抗營養因子的種類來選擇。
3．2．3根據降解日糧中抗營養因子的不同，有針對性地添加不同的外源酶。
　　玉米-豆粕型日糧是我國的常規日糧，通用的消除抗營養因子的最適酶種主要為木聚糖酶、果膠酶、纖維素酶。若飼料中添加了其他非常規原料，則需補充相應酶種。在我國玉米是主要的能量飼料，目前面臨著玉米短缺問題，我國有豐富的小麥資源，若用小麥代替玉米作能量飼料，添加木聚糖酶可產生可觀的經濟效益和社會效益。
3．3酶特性選擇
　　應根據動物消化道的生理條件來選擇適合的酶。動物消化道的生理條件及酶的最適作用條件見表7、表8。
表7 動物消化道的生理條件

生理條件	豬			禽
生理條件	胃	十二指腸	空腸	腺胃	十二指腸	空腸
pH 值	2.5~4.5	6~6.2	≈6.5	2~2.5	5.8~6.2	6~6.5
溫度	38-40℃

表8 不同酶的最適作用條件

	酸性蛋白酶	中性蛋白酶	木聚糖酶	纖維素酶	α-淀粉酶
最適溫度最適pH	50~75℃ 2.5~4.3	30~50℃ 6.5~9	40~60℃ 4.5~10.5	40~60℃ 2.5~5.5	50~90℃ 3.6~6.9

　　最好選擇最適溫度及pH都與動物消化道的生理溫度及pH相同或相近的酶，差異太大的酶不宜使用。如耐高溫淀粉酶在90℃時酶活高，堿性蛋白酶能耐受強堿，但在生理條件下他們的活性往往很低。所以，要全面衡量在體內條件下的酶活力，而不應片面追求酶對高溫或酸堿的耐受性。當酶的最適條件與動物消化道的生理條件差別較大時，很可能因在試管中采用最適條件測定酶活性很高，而應用時酶活性卻很低。
3．4酶活力大小比較
1）不同測定方法所得數值不可比較；2）同種測定方法在不同溫度、pH、底物種類等條件下測定所得數值不可直接比較，加以分析可作定性比較，最好在完全相同條件下重新測定；3）在完全相同條件下測定，但對酶活力的定義不同時，需換算后再作比較；4）在完全相同條件下測定，且對酶活力的定義相同時，可直接比較。
　　總之，酶種選擇搭配合理、既適用于飼養對象又適合于所用日糧種類、酶活力大小既能滿足需要又不造成浪費的酶制劑，才稱得上是優良的酶制劑。

作者: 鄭旭陽 時間: 2009-5-14 04:52
1# mche2005

作者: 鄭旭陽 時間: 2009-5-14 05:25
從上文得出,
1. 酶活和酶制劑的生物學效價是兩個評估角度, 不易建立關聯, 但是, 酶活是實驗室可以評測的指標, 生物學效價是動物代謝實驗指標,有很大的變異性和不準確性;
2. 在生產實際中, 評估酶活不失為一個評價酶制劑的好方法, 對于同一菌種來源, 相同定義的酶活比較而言, 酶活高,生物學效價就高,
3. 對于同一個菌種來源的酶制劑, 單就不同溫度,底物,PH,定義, 測定出了不同的酶活, 不能說明生物學效價有何區別,
4. 目前, 植酸酶的同工酶較少, 易于評估, 木聚糖酶等非植酸酶的酶制劑, 同工酶較多, 不易評價, 但是對于目前的已經工業化的產品體系而言, 就那么幾個菌種來源, 也便于大家比較;
5. 有些人說: "酶活高,生物學效價不一定高, 使用效果不一定好", 這是不會生產酶制劑的人講的話, 是在故意混淆視聽, 魚目混珠,
6. 希望大家科學的評估酶制劑的酶活和生物學效價的關聯, 酶活測定肯定是有效評估酶制劑產品質量的最好手段, 先評估酶活, 把酶活過關的產品用于飼養實驗比對,

作者: yourancixin456 時間: 2009-5-19 18:19
本帖最后由 yourancixin456 于 2009-5-19 18:22 編輯

[有些人說: "酶活高,生物學效價不一定高, 使用效果不一定好", 這是不會生產酶制劑的人講的話, 是在故意混淆視聽, 魚目混珠.

很想聽聽您的理解！期待中------

作者: yourancixin456 時間: 2009-5-19 18:32
“希望大家科學的評估酶制劑的酶活和生物學效價的關聯, 酶活測定肯定是有效評估酶制劑產品質量的最好手段, 先評估酶活, 把酶活過關的產品用于飼養實驗比對”

LZ這句話很簡單，但是對于篩選酶制劑的廠家而言是需要付出更多的，這對于資金實力不夠的企業是很難做到的。即使檢測酶活，也只是產品穩定性的檢測，我覺得可以倒可以把你的方法調換過來，通過動物實驗確定良好的性價比酶制劑產品，再通過實驗室檢測確定購買的每個批次酶制劑產品是否質量保持穩定
況且

作者: mche2005 時間: 2009-5-21 09:36
本帖最后由 mche2005 于 2009-5-21 09:41 編輯

呵呵，鄭版主，是我的。
酶活和酶制劑的生物學效價是兩個評估角度, 不易建立關聯。從這點上，我非常的佩服版主的學術功底。
5. 有些人說: "酶活高,生物學效價不一定高, 使用效果不一定好", 這是不會生產酶制劑的人講的話, 是在故意混淆視聽, 魚目混珠,
同樣的菌種，不同的發酵工藝和飼料酶應用配方，其效果截然不同。不同的菌種，不同的發酵工藝和飼料酶應用配方，其效果差異就更沒有辦法比了。不知道國內的幾家飼料酶企業他們的主打單酶生產菌種一樣么？
6. 希望大家科學的評估酶制劑的酶活和生物學效價的關聯, 酶活測定肯定是有效評估酶制劑產品質量的最好手段, 先評估酶活, 把酶活過關的產品用于飼養實驗比對,
生產菌種的差異和具體的某種飼料酶其酶學性質是不一樣的。決定飼料酶的應用效果，不僅僅是酶活，更重要的是酶的酶學性質和動物腸道的符合程度或者說是適合程度。這是個綜合因素。綜合因素決定了有效酶活。而相同的酶活力下，其有效酶活力可能大相徑庭。
有效酶活的定義是：在特定的工藝環境中或者是特定的應用環境中，酶所表現的活力。這個特定環境就包括ph、溫度、環境中的金屬離子、等對酶活起到抑制或激活的各種因素。
呵呵，這個有效酶活是我自己在做酶動力學方面的實驗和果膠酶應用研發時的一些認識。

作者: mche2005 時間: 2009-5-21 09:47
本帖最后由 mche2005 于 2009-5-21 09:49 編輯

你好：yourancixin456
誰說它的飼料酶好，做做養殖實驗就可以了。耳聽畢竟為虛，眼見方能為實。
鄭版主講的話是很有道理的，只是你沒有體會到鄭博版主所說的前提條件。鄭博專業知識很淵博佷精深的。
任何事，都需要在一定的前提下才有討論和存在的基礎。

作者: tq8322 時間: 2009-5-21 23:00
看了樓上幾位的高見，對這個問題更深的認識。那請問現在公司一般是怎樣確定酶制劑復配的種類和酶制劑的推薦添加量呢？有辦法通過廠家提供的信息比較辨別效果不？

作者: mche2005 時間: 2009-5-25 21:44
酶制劑的配方和應用效果這塊，每個公司都不一樣的。技術實力才最終決定應用效果的。目前，市場上占有率高的產品，其效果是不言而喻的。當然，酶制劑配方的確定，是飼料酶企業技術總監和高工吃飯的看家本領。呵呵，人家就靠著吃飯了，一如飼料配方師了。
在下的拙見是：盡量買市場上市場占有率比較大的品牌。對于沒有聽過的品牌，作為飼料酶生產企業，他們的義務和職責就是提供符合他們技術實力和市場需求的產品。

作者: 胡海波 時間: 2009-6-16 01:00
言語中表露出來的除了版主，估計很多都是動物營養出生的，其實動物營養出生的對酶制劑的認識是有偏向性的，這種對酶制劑偏向性帶有很強的主觀意愿，這種主觀的臆斷并不一定適合飼料酶制劑的發展。渴望聽到生物技術方向的聲音！

作者: lll.net 時間: 2009-6-16 02:11
很好的資料，爭論也很激烈，學習效果非常好啊

作者: llppaa 時間: 2010-7-28 09:24
寫的不錯，越爭越明

作者: zqf823 時間: 2010-8-4 20:20
學習效果非常好啊

作者: jefflelele 時間: 2010-9-12 12:25
酶制劑，魚龍混雜啊！

作者: saturnbio 時間: 2010-9-12 16:10
所以選擇酶制劑應該選擇研發能力，有專門的飼用酶研發團隊的企業，才有時間能力認真篩選出生物學效價高的菌種。那些買個菌種+發酵罐做酶的，或者買單酶復配的，都很難研究到這個深度。

作者: 小咪渣 時間: 2010-9-15 09:25
三正公司生產溶菌酶嗎，如果在昆明能買到云南的產品就太好了

歡迎光臨畜牧人 (http://www.cqnsfzw.com/)