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畜牧人

標題: 在發酵的角度廓清“后抗生素時代”的含義 [打印本頁]

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:41
標題: 在發酵的角度廓清“后抗生素時代”的含義
大家都說“后抗生素時代”，除了歐盟禁抗帶來的畜牧行業的緊迫外，它的含義還有另一個。n

那就是，在以往（2005-2006以前），發酵處于抗生素時代。抗生素時代的含義，是指，以抗生素工藝代表最高發酵技術，引導行業。以抗生素工藝評價體系為整個發酵行業的指導。也即，抗生素發酵工藝，指導了有機酸（主要檸檬酸）行業，氨基酸（主要味精）行業的生產構成體系。
抗生素發酵，是經典發酵的代表。

所謂后抗生素時代，指進入分子時代后，工程菌由于自身原因不適應以抗生素發酵為指導，而自身發展了一種開發，生產，和評價體系。工程菌株的高精度控制發酵，代表了行業的最高水平。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:45
后抗生素的時代特點，有點和經典發酵時代不同，在經典發酵時代，抗生素工藝技術涵蓋了，指導了整個發酵行業，但后抗生素時代，分子技術和工程菌發酵技術，并不能代表整個行業。

它與經典發酵，即抗生素工藝指導下的發酵，是同時存在的。這一點，與抗生素時代不同。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:46
下面，以蛋白表達為例，大致闡述下后抗生素時代的技術過程，然后，再做一下對比。

先闡述大致工藝過程：

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:48
蛋白表達的技術與工藝概述

在分子生物學角度講，找到或合成外源蛋白基因，構建質粒，并導入細胞以表達具有生物活性的折疊正確的蛋白，是一種成熟的常規技術。目前，包括酶，抗原，抗體，激素，其他小分子調節蛋白在內的很多蛋白，都已經用這種技術實現了工業化生產。在具體的工藝選擇上，歷史沿襲習慣和表達體系的選擇，對工藝穩定性，成本，有巨大的影響。

目前，常用的蛋白表達系，有3個類別：

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:51
1，大腸桿菌表達系。
大腸桿菌的遺傳背景十分清楚，代謝相對簡單，發酵副產物少，在不是很嚴格的情況下，是表達蛋白的首選。通過按經驗選擇合適的菌株及合適的質粒，既可以以包涵體的形式得到大量的目標蛋白，又可以在細胞外得到可溶性蛋白，是常見的一種表達系。

2，酵母菌表達系。
用酵母做表達系，理由之一，也是遺傳背景清楚，而且，當蛋白分子量過小，不能形成包涵體時，或蛋白的二硫鍵過多，不易體外復性時，酵母菌就成了合適的選擇。另外，酵母對蛋白也會有一個簡單的修飾，近似于高等動物的蛋白糖基化過程。這樣，在合成在體液中發揮作用的蛋白，而且，又不能（技術水平限制）用動物細胞時，就可以退而求其次的選用酵母菌表達。一般是用信號肽把蛋白導出細胞，在發酵液中以可溶性蛋白的形式存在。這也是一個常見的表達系。

3，動物（或說，人的）細胞表達系。
這種情況，在純度或毒性方面有較高要求的產品應用。一般國外產品應用較多，國內還沒有用動物細胞表達蛋白實現商業化生產的報道。由于技術限制，國內工業化生產用這個方法目前還有較大難度。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:52
這3種表達系，各自有自己的優缺點。首先，在潛在的毒性影像方面講，由于和真核生物親緣關系太遠，大腸桿菌就最不合適。其次是酵母菌。而在表達量和代謝控制成本上來講，酵母菌和動物細胞又是差強人意的。現在，很多蛋白習慣性的選用酵母菌做表達系，就是因為早期提取蛋白技術低下，而動物細胞培養技術又不過關的原因所致。目前，雖然提取工藝提高了，但作為蛋白這種高附加值產品，運作成本集中在銷售而不是生產，所以，降低生產成本的訴求很低。站在降低開發難度的角度講，一方面，質粒構建和質粒與菌株的匹配方面依賴大量經驗，另一方面，發酵工藝策略選擇與發酵工藝優化又需要很大的投入，所以，技術開發部門沿用自己熟悉的，已經積累了大量經驗的表達系，是合理的。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:53
不過，隨著分子技術進一步的發展，分子技術進入低附加值的產品領域又是必然的，降低生產成本就變的越來越必要了。

大腸桿菌表達系有兩種得到外源蛋白的方法：

1，緩慢的表達，得到可溶性蛋白，這種方法產量和酵母菌表達類似，與酵母菌比，不具有明顯的優勢，一般是有做大腸桿菌傳統的研究機構生產小分子蛋白的一種沿襲性做法。

2，使用T7啟動子表達蛋白，這樣，高速的蛋白表達速率使蛋白來不及折疊，在細胞內形成非水溶性的包涵體。最后目標蛋白可以達到總細胞質量的15%-25%，這樣，就為降低成本提供了一種可能。

不過，在使用T7啟動子表達時，也存在兩個難點：

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:55
1，蛋白的復性技術，如果形成可溶性蛋白，那利用（使用分子技術加載在目標蛋白上）信號肽，只要過一遍柱子就能分離得到純度非常高的，具有生物活性的產品，而形成包涵體，對提取，復性就有較高的要求，特別是二硫鍵的存在，會對復性產生很大的影響。在目前國內和國際流行技術看，并不是所有的蛋白都能在預定成本下復性的。

2，任何情況下，高產都是代謝網絡互相依賴與作用的結果。在如此高的表達量下，甚至細胞的形態都已經發生很大變化，正常代謝受到嚴重干擾，以至于放大時，搖瓶工藝對發酵工藝幾乎沒有任何參考價值。發酵工藝策略的選擇將直接依賴于工程人員在生化，生理水平對菌株的理解，而匱乏可資參考的數據資料。發酵工藝的優化要離開搖瓶經驗在發酵罐上逐步進行，這樣，整個發酵工藝的確立就需要比想象中要大得多的人員與時間的投入。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:56
另外，再說一下糖基化的問題。

在動物細胞內合成的折疊正確的蛋白，在分泌入體液前會有一個糖基化的過程，加上一個糖鏈就不會很快被蛋白酶當做折疊錯誤的蛋白水解掉。但是以微生物為表達系表達的蛋白，不具有動物細胞的修飾過程，用大腸桿菌表達的目標蛋白，很快會在血液中被降解。解決或回避這個問題，有兩種方法：

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:58
1，用動物細胞表達，一般，是用癌化的人類細胞。由于動物細胞培養技術要求過高，在國外比較昂貴的醫藥中有應用，國內不常見。

2，由于酵母菌也有一個對蛋白的粗略的修飾過程，可以用酵母菌表達目標蛋白。這個技術，國內國外都在用，可以是一個權宜之計。主要難點集中在對合適菌株的分子水平的改造，以達到盡可能接近滿意的修飾效果。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:59
這樣，就可以在不同目標蛋白上表達系和發酵工藝上做出選擇。如果是小分子，無糖基化修飾或不在體液中發揮作用的蛋白，可以選擇大腸桿菌和酵母菌表達系，得到可溶性蛋白，然后提取。如果分子量合適，并對生產成本有訴求，而且可以比較方便的復性，則選用大腸桿菌表達系，得到包涵體，然后復性。如果是需要在體液中發揮活性并有糖基化要求的蛋白，則選用經過分子生物學改造的酵母菌表達系。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 22:01
下面，以溶菌酶為例，闡述一下蛋白表達系的選擇和工藝的確定。

溶菌酶是一類具有種屬差異的非特異性免疫物質，在動物界中普遍存在，種類繁多，其實，在植物和微生物中也有發現。但研究最多的還是動物。開發獸用溶菌酶，主要是想作為抗生素的替代物，作為添加劑使用。因此是一個低附加值的產品。下面一切的工作，都會圍繞“獸用”和“低附加值”展開。

首先，我們比較了幾種常見和認為有效的溶菌酶，我們發現，殺菌效果最好的是人的溶菌酶，但考慮到潛在的危險（具有對人溶菌酶產生抗性，并使抗性基因擴散），我們舍爾求其次，用了鳥類蛋清溶菌酶，作為表達對象。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 22:02
然后，在得到溶菌酶蛋白的一級結構后，我們對此進行了分析。此蛋白不會用于體液內，故沒有糖鏈修飾的問題。分子量不是很大，但也不太小，130左右的氨基酸構成，足以形成包涵體，這就為用大腸桿菌表達系高效表達提供了可能。討厭的是有4個二硫鍵，其中有兩個在結構復雜區域，折疊正確有一定的困難。但是，如果用酵母菌做，可能沒法解決成本問題，即便優化工藝現在過去了，也不會是最終版本----肯定會有人用大腸桿菌做。所以，結論就是必須知難而進，拿下復性工藝。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 22:03
另外，由于是低附加值產品，發酵噸位就不能太小。以往分子生物學流行的50升，100升小罐發酵，肯定是不行的。發酵罐的放大，除了溶氧，剪切力發生變化，更重要的是攪拌線速度改變了胞外酶以及包括細胞本身的代謝方式和速度。在胞內體現就是氧化還原電勢的改變，這在工藝上會帶來很多麻煩。雖然說，一般是放大后產量往往提高，但放大過程中，小罐的經驗就不能照搬了。同時，也因為是低附加值產品，發酵過程中諸如質粒丟失等穩定性要求，就很高了，應為只有穩定，才能控制成本。這樣，工藝就成了第二個難點。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 22:05
明白這些之后，我們按照大腸桿菌的喜好，合成了溶菌酶的基因。然后構建質粒，導入細胞。在搖瓶水平表達溶菌酶。在篩選復性條件的同時，我們就同時在發酵罐水平對工藝穩定性進行了優化。

首先，為了進一步提高質粒穩定性，我們對初始培養基進行了重新設計。并改動發酵工藝策略，由于是胞內產物，我們應用高細胞密度發酵控制法延長限制性生長時間（不能用經典發酵的延長對數期生長時間的辦法，對工程菌不適合，會造成質粒丟失，代謝紊亂等一系列問題），提高細胞量，并改變了誘導時機，得到了穩定的高產，具體數據比較枯燥，就不在此展開了。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 22:06
提取方面，經過不懈的努力，我們也掌握了比較成功的復性條件（具體由另外人員負責，也不做詳細介紹了）。這樣，工藝才基本拼湊好。進一步優化，在試生產多次重復時在進行。

以上，是外源蛋白表達的粗略的一個技術和工藝的過程。

[ts]葉赫娜蘭-孤城于 2009-6-2 09:10 補充以下內容[/ts]

沒人回，自己回。

很無聊的，但該補充的還是補充下，萬一有人看呢？

還有兩個表達系,也比較常用：乳酸菌和芽孢桿菌。都是細菌。

作者: 孟俊英 時間: 2009-7-3 19:33
看過了，一氣呵成。你的這些太專業了，我還要好好轉化一下。:)3:畜牧微生物學雖然是畜牧業的一個重要分枝，但做酸奶、乳酪的工藝流程才是核心，不過溶菌酶的研發關乎今后的飼料養殖業發展，希望你堅持下去，同道會越來越多的。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-7-4 11:12
謝謝俊英君的鼓勵。

現在還是有些困難的，真做工藝了，在設備擴大和選型，物料平衡等一些常規問題上，遇到阻力。--主要還是成本，在這個壓力下，有可能重新回到工程菌構建上，重新設計構建方案，重新開始。

做抗生素出身，雖然作過研發和生產，對成本還是大意了。慚愧:liuhan:

好在是小試，損失還談不上。嘿嘿。

作者: 東方龍 時間: 2009-7-5 00:28
21世紀是基因工程的時代，我堅信這一天遲早要到來，基因工程，發酵工程，蛋白（酶）工程，細胞工程。真正意義上的分子時代

[ts]東方龍于 2009-7-5 00:29 補充以下內容[/ts]

溶菌酶也是好東西，我更堅信。因為我一直在堅持使用！！！！！！！！！

作者: kltdzhong 時間: 2009-7-5 02:41
隨著技術的進步應該會代替抗生素吧。

作者: 孟俊英 時間: 2009-7-5 10:24
樓主的目標蛋白是禽溶菌酶，因選用大腸桿菌表達系而增加了蛋白復性的難度，重點是解決菌種和工藝問題，任重道遠，支持支持，希望不久的將來有成功的溶菌酶產品面世。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-7-21 08:52
感謝諸君的鼓勵和期待，孤城一定多多努力----讓別人努力（玩笑，呵呵）。

作者: 學農愛農 時間: 2009-8-17 11:02
后抗生素時代，不是對于抗生素功過的評判，而是對于新型功能性添加劑的研發。
樓主的專業專注，讓人敬佩！盡管曲高和寡，呵呵，研發就要耐得寂寞。
溶菌酶的生產工藝，相信也不是什么世界級難題。只是我們的專家考慮到成本控制，對于自己提高了鉆研層次。
不僅僅溶菌酶，許許多多的功能性產品都是在應用中逐步清晰成熟的，一如人的成長，需要時間，需要鍛煉，需要修正，需要創新！
每一步都是付出，每一步都有成就！惟有虔誠的祝福：一路走好，祖國的畜牧業！

作者: xqcgy 時間: 2009-8-17 16:23
所謂后抗生素時代，指進入分子時代后，工程菌由于自身原因不適應以抗生素發酵為指導，而自身發展了一種開發，生產，和評價體系。工程菌株的高精度控制發酵，代表了行業的最高水平。

作者: 孟俊英 時間: 2009-8-17 19:42
24樓對分子發酵的理解相當精到，事實上也是如此，由于單一、大量表達某個蛋白，工程菌的生命力都比較弱；發酵過程控制更為關鍵 24# xqcgy

作者: 東方龍 時間: 2009-8-27 10:13
樓主的專業專注，讓人敬佩！我們盡管不能搞科研創新，但我們能作為科學成果的推廣者和傳播者

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-8-29 12:45
26# 東方龍 謝謝龍兄鼓勵。對分子生物學在畜牧的應用，我也希望早日出一個工業水平的答復。

作者: tian11aiguo 時間: 2009-8-31 11:12
樓主的專業理論很是專業，我有些不懂，學習了。。。。。

作者: wubai8219 時間: 2009-9-14 09:56
太專業了得慢慢消化！

作者: liping 時間: 2009-10-11 09:56
有意思，有見解，在發酵方面確實功底扎實，樓主這種水平，如果年薪未曾拿到100W，實在有違天意，如果還在高校，可以做一個公司，在發酵上面大做文章。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-10-11 10:16
30# liping 哈哈，謝謝liping兄錯愛。

兄弟在高校不錯，可是并未想要開公司。實話實說，作為一個工程人員，而不是純粹的理科科研人員，在實驗室，雖然是有事可做的，但在學校，位置卻是尷尬的，年薪100w是想都沒敢想啊。

作者: 廖綠杰 時間: 2009-10-12 13:00
樓主的專業令人欽佩，對發酵工藝的嚴謹認真和精辟分析更令我敬佩，頂了！

作者: horsegreenhill 時間: 2009-10-13 23:43
敢問孤城兄，您現在是不是正在做這個課題？

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-10-14 08:52
是啊。現在已經構建到第三個菌株，更換了兩次工藝策略，以期得到理想的成本。 34# horsegreenhill

[ts]葉赫娜蘭-孤城于 2009-10-14 08:54 補充以下內容[/ts]

引用自葉赫娜蘭-孤城發表于 2009-10-11 10:16的內容
30# liping 哈哈，謝謝liping兄錯愛。

兄弟在高校不錯，可是并未想要開公司。實話實說，作為一個工程人員，而不是純粹的理科科研人員，在實驗室，雖然是有事可做的，但在學校，位置卻是尷尬的，年薪100w是想都沒

“知易行難,理論易學,真要出產品就不容易了,所以年薪未曾拿到100W，是很正常的 ”

狗王兄，您在想想，是這么回事嗎？

作者: horsegreenhill 時間: 2009-10-14 19:15
本帖最后由 horsegreenhill 于 2009-10-14 21:05 編輯

我們也在做相關的課題，希望以后多多交流！

作者: 東方龍 時間: 2009-10-28 17:33
早日愿君年薪100W:)3::)3::)3:

作者: 牧羊雪 時間: 2010-1-29 14:37
在物欲橫流的時代，有如此多的精英，耐得住寂寞與誘惑，靜下心來默默從事畜牧行業的里程碑式的、劃時代變革的事業。

支持中，敬佩中。

行業內羊頭狗肉之案例太多了。期望樓主成功。

作者: 劉小雁 時間: 2010-2-23 11:19
向專業人士學習！

作者: 李向陽 時間: 2010-3-14 14:09
畜牧人論壇是業界全國最好的論壇，注意，沒有之一。比之灌水論壇的天涯、貓撲的地位。但我極端鄙視一些所謂專業人，他們天天說用這個藥不好，那個藥不好。又是對人不好，又是危害環境。但養殖業是怎么回事你們這些人又不是不清楚，凡是說實話的你們就說不好，你們到底是什么居心。如同現在非要說妓女下賤，你養個二奶就好了？又是中藥、又是微生態，一會又鼓搗出來一堆學術術語，生物制劑、提取物。難道這些東西最終起作用的不是化學品？到底是中藥無毒，還是生物制劑就很安全？你們如果生病了是吃兩根草還是注射生物制品。混肴視聽不還是為了賣本廠的東西么，一堆垃圾，忽悠老百姓，讓本來明白的人糊涂，讓本來就糊涂的人徹底喪失判斷力就是你們想要的。號召全體有良心的業界人士一起來剎住這股歪風，還論壇朗朗乾坤，我們要交流的是技術，不是忽悠。我想說的是，你養過豬么？你見過豬長什么樣么，你知道豬食怎么養的么，豬有幾條腿你都分不清就來對別人挑三揀四了，吆五喝六了。你打開你們公司老總的簡歷，看看他們當初在做什么。現在藥物保健這一套都是你們老總做業務員的時候親自告訴養殖戶的，現在好了，有錢了，有地位了，心野黑了，想賺更多的錢了，可同行多，競爭激烈，怎么辦？好辦，我來告訴你們，你們都錯了，就我是對的，我賣的跟你們不一樣，整個中國只有我才最懂養殖，都買我的產品你們才是有良心，才是無公害，才是專業，你媽怎么會生出你這種畜生，莫非你爹是你媽搞養殖的時候出現的。我真的很想來句國罵，但我怎么能當畜生的爹呢，我就看著天雷怎么劈死你們這幫炒作概念的垃圾。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:20
畜牧人論壇是業界全國最好的論壇，注意，沒有之一。比之灌水論壇的天涯、貓撲的地位。但我極端鄙視一些所謂專業人，他們天天說用這個藥不好，那個藥不好。又是對人不好，又是危害環境。但養殖業是怎么回事你們這些人又不是不清楚，凡是說實話的你們就說不好，你們到底是什么居心。如同現在非要說妓女下賤，你養個二奶就好了？又是中藥、又是微生態，一會又鼓搗出來一堆學術術語，生物制劑、提取物。難道這些東西最終起作用的不是化學品？到底是中藥無毒，還是生物制劑就很安全？你們如果生病了是吃兩根草還是注射生物制品。混肴視聽不還是為了賣本廠的東西么，一堆垃圾，忽悠老百姓，讓本來明白的人糊涂，讓本來就糊涂的人徹底喪失判斷力就是你們想要的。號召全體有良心的業界人士一起來剎住這股歪風，還論壇朗朗乾坤，我們要交流的是技術，不是忽悠。我想說的是，你養過豬么？你見過豬長什么樣么，你知道豬食怎么養的么，豬有幾條腿你都分不清就來對別人挑三揀四了，吆五喝六了。你打開你們公司老總的簡歷，看看他們當初在做什么。現在藥物保健這一套都是你們老總做業務員的時候親自告訴養殖戶的，現在好了，有錢了，有地位了，心野黑了，想賺更多的錢了，可同行多，競爭激烈，怎么辦？好辦，我來告訴你們，你們都錯了，就我是對的，我賣的跟你們不一樣，整個中國只有我才最懂養殖，都買我的產品你們才是有良心，才是無公害，才是專業，你媽怎么會生出你這種畜生，莫非你爹是你媽搞養殖的時候出現的。我真的很想來句國罵，但我怎么能當畜生的爹呢，我就看著天雷怎么劈死你們這幫炒作概念的垃圾。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:21
回復 40# 葉赫娜蘭.孤城

我怕有人后來修改自己的帖子，先復制一遍再說。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:29
首先，我不是任何公司的，也沒有任何產品，但既然您在我的帖子下發表觀點，那我就站在技術人員的素質上，回答一下里面的技術問題（非技術問題，如，立場，觀點，恕在下不談了---我回避某些論辯，不參與任何非技術領域的辯論，所以，早在很久以前，我就是一沒有觀點，二沒有立場的了，但是，技術人員的錚錚鐵骨，還在！），我現總結一下里面的技術問題總量，然后撿著會的回答幾個。

1，生物制劑安全不安全。

2，不懂養豬做不做技術。

對不起，還真找不到沒其他的了，剩下的都是謾罵了。那就回答這兩項。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:34
1，說生物制劑安全不安全，就好像說衣服在御寒的同時能不能管飽肚子一樣，有點風馬牛不及，雖然，服裝從業者可以通過利潤，買兩包子果腹，但終歸衣服是穿的，不是吃的。

生物制劑，和安全性是兩個概念。

安全的概念是歷史的，相對的，而生物制劑的概念是相對穩定和嚴格的，比如說，嚴格意義上講，抗生素就是一個相當典型的生物制劑，可是，現在歐盟卻禁用了----可見這是兩個概念。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:40
2，養豬合作技術，很遺憾，這也是兩個概念。

克隆技術最早是在我們微生物行業發展的，那個時候，畜牧的技術水平和微生物專業相比，簡直相差兩個時代，在多利綿羊之后，終于才有克隆技術和畜牧沾點邊，那在這之前，所有搞分子生物學的都該放下工作，原地踏步，等著畜牧行業趕上來才做科研不成？那可是一等就是幾十年啊！不僅僅是中國人，就是咱人類，等不起。

往國內說，我在抗生素研究機構引進國外的獸用抗生素時，不僅僅我自己，就是整個機構幾萬號人，沒有一個懂得養豬，而這藥物，偏偏就是給豬用的，治療支原體的-----這樣，我們就放下國家的工作，先學學養豬去？

我認為這兒，概念雜糅了。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:45
我發表這個帖子，原帖子，本來是給四川抗生素研究所的一個內部交流的綜述，拿到論壇，是為了幫助畜牧業弟兄們正本清源，分清是非，不要壞人蠱惑。

如果畜牧行業不接受，我改，以后，再也不把其他行業（主要是我們行業）的東西介紹進來了----我省事----就是一部分人在夜郎自大中封閉，目光短淺，而不能發展，又和我有什么關系？

[ts]葉赫娜蘭.孤城于 2010-3-15 09:46 補充以下內容[/ts]

想起一個呂洞賓和某種哺乳動物的故事。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-18 14:34
好久沒有關注這個版塊了。

回答了兩個技術問題，也沒人搭理，今天才看看板塊----明白了，原來是刷帖啊，并不是認真的回復，就是把所有的帖子回復相同的內容，然后，在自己還沒有乏味之前，盡可能的多拷貝幾個帖子。

唉！刷帖！

居然出自一個自認為瞧不起灌水論壇如天涯貓撲之類的人之手！

這世界，居然墮落到這種地步，我想這不是個人的悲哀，而是民族的悲哀！

一屋不掃，何以掃天下！

振興中華！從點點滴滴做起，從在小事上認真開始！呼吁嚴肅的人生態度！

[ts]葉赫娜蘭.孤城于 2010-3-18 14:35 補充以下內容[/ts]

早知道是刷帖，我就不該回答！

[ts]葉赫娜蘭.孤城于 2010-3-18 14:35 補充以下內容[/ts]

很后悔！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！！

作者: wjianyang123 時間: 2010-4-11 23:17
講的很專業，好好學習了。

作者: rq165531343 時間: 2010-4-13 09:09
個人覺得，如果你的產品是出口？你會不會考慮做相關檢測嗎？抗生素殘留的的確確是對人有危害，只是你一時不會留意，如果抗生素藥物泛濫，那以后怎么辦？
不要貪圖一時的省事，為他人增添危害。請造福他人~~~

作者: sdlaosui 時間: 2010-4-20 21:16
只有學習的份了，不說話不代表不崇拜，只是沒法表達而已

作者: ywg1021shan 時間: 2010-5-10 15:42
學習了，講的很深刻

作者: kkl301 時間: 2010-7-12 07:24
學習學習。。。

作者: wuhandiyi 時間: 2010-8-26 17:34
怎么做啦？

作者: 基層配方師 時間: 2010-8-27 13:02
1. 您請講的真好，學到了東西，謝謝！希望以后在專業雜志發表文章，而不是發帖。至于有人不禮貌回帖，您多包涵，我們飼料養殖業你從極端回帖看得出素質還較低；另外，角度立場也不一樣，賣獸藥的當然希望抗生素再用一萬年，他們不了解我們配方師的難處。

2. 可否請教您兩個問題：a）你提取出的最后酶產品耐受高溫嗎？；b）可否告訴酶測定方法？急！

3. 另外，您有空參閱“現實與傳說中的后抗生素時代之一二三”的帖子，他期待你說幾句。

4. 真誠感謝！多發好帖！技術為主，不做垃圾辯論！謝謝！

作者: levekingph 時間: 2010-8-27 13:29
學習學習！！！！！！！！！！！！！！！！

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-8-27 13:49
回復 53# 基層配方師

1，酶一般的講，不耐高溫，如果固定化之后，如“包被”等處理，可以耐受一定程度的高溫，但是，即便包被，目前看依然是不穩定。

另外，某些酶本身相對來說，由于結構或來源，可能耐受一定程度的高溫，但依然看做高溫下不穩定。

我們表達的酶，因為我們沒有期待它耐高溫，所以，實話實說，我不知道耐不耐高溫----一般來估計，不耐高溫。

2，酶的測定方法，

A，以底物為方法，設置空白測酶活，這個可以查到的。一般用于產物的最終測定。在表達過程中，由于酶有可能是先得到包涵體，折疊錯誤，沒有活性，所以不用這個方法實現過程檢測。

B，用電泳，根據分子量定性的檢測----這個是實驗室常規做法。

C，可能的更先進方法----對不起，這個可以有，這個真沒有---沒辦法，我們也就用上面兩種方法了，抱歉。

作者: 基層配方師 時間: 2010-8-27 17:36
回復 55# 葉赫娜蘭.孤城

回復很清楚，非常感謝！

作者: as1985323123 時間: 2010-10-31 23:48
學習學習

歡迎光臨畜牧人 (http://www.cqnsfzw.com/)