鴨病毒性肝炎卵黃抗體生產(chǎn)工藝對(duì)其使用效果的影響
山東信得科技股份有限公司
家禽業(yè)務(wù)部 李峰
262200
青島研發(fā)中心 趙風(fēng)立 266061
肉鴨養(yǎng)殖經(jīng)過(guò)10多年的快速發(fā)展，已經(jīng)成為畜牧養(yǎng)殖中的重要板塊，其年均增長(zhǎng)率（約10%）遠(yuǎn)高于肉雞，市場(chǎng)高峰期年出欄量更是超過(guò)了30億只；但是相對(duì)于肉雞，肉鴨科研乏力，經(jīng)費(fèi)投入不足，育種水平與國(guó)外相比仍有差距；營(yíng)養(yǎng)及生理研究工作也剛剛起步，專用生物制品的開(kāi)發(fā)速度以及疾病防控技術(shù)也跟不上產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。簡(jiǎn)易的鴨舍、落后的設(shè)備、粗放的管理、傳統(tǒng)的技術(shù)很難生產(chǎn)出高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的鴨肉產(chǎn)品，農(nóng)村規(guī)模化飼養(yǎng)戶由于缺乏系統(tǒng)而全面的技術(shù)培訓(xùn)，生產(chǎn)過(guò)程中普遍存在著缺乏隔離、消毒、預(yù)防、治療等綜合防疫措施的全面落實(shí)，給鴨病毒性肝炎等傳染病的爆發(fā)提供了溫床。
鴨病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)病原為鴨肝炎病毒 (Duck epatitis virus,DHV)目前歸屬于小RNA病毒科的未確定種。ＤＨＶ具有 3個(gè)在抗原性互不交叉、無(wú)相關(guān)性，有著明顯差異 ，無(wú)交叉保護(hù)和交叉中和作用，但引起的病狀與病變甚為相似的血清型 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型 )。我國(guó)于1958年首次在上海地區(qū)某些鴨場(chǎng)發(fā)現(xiàn)鴨肝炎，迄今已流行半個(gè)多世紀(jì)，1984年郭玉璞等證實(shí)我國(guó)鴨肝炎流行株為Ⅰ型。ＤＨＶ-I型又稱古典株 , 此病毒流行甚廣，呈世界性分布，主要侵害3周齡以內(nèi)的雛鴨，發(fā)病急、傳播快、死亡率可達(dá)死亡率為 50%～9 0%。
鴨肝炎病毒對(duì)氯仿、乙醚、胰蛋白酶和PH3.0都有抵抗力，在56℃加熱60min仍可存活，在37℃中能抵抗2%來(lái)蘇兒作用1h和0.1%福爾馬林8h，在15～20℃中的1%福爾馬林或2%NaOH中能存活2h，在2%的漂白粉溶液中能存活3h，3%酚、碘制劑可使病毒滅活。在自然環(huán)境中，病毒可在污染的孵化器肓雛室中存活10周，在陰濕處糞便中存活37d以上，在4℃存活2年以上，在－20℃則可長(zhǎng)達(dá)9年。
近年來(lái)，美國(guó)、印度、法國(guó)等國(guó)家已發(fā)現(xiàn)Ⅰ型 D H V的變異株， 美國(guó)已對(duì)其分離物進(jìn)行了比較，證明其確為Ⅰ型 D H V的一個(gè)變異株，命名為 B a rn - h a r d t株，與DHV-Ⅰ型在中和試驗(yàn)中呈部分交叉反應(yīng)。1992年Sandhu也發(fā)現(xiàn)一類毒株，與Ⅰ型僅有部分血清學(xué)相關(guān)性，稱之為Ⅰ型的變異株，命名為Ⅰa型。2007年，中國(guó)、韓國(guó)和臺(tái)灣的學(xué)者也先后報(bào)道和證實(shí)了DHV-Ⅰ型的變異。
我國(guó)自1958年發(fā)現(xiàn)本病至1996年前后，各地暴發(fā)與流行的鴨肝炎，其疫情均可以被標(biāo)準(zhǔn)DHV-I型疫苗及抗體良好控制。但近幾年來(lái)，在許多暴發(fā)鴨肝炎的鴨場(chǎng)和地區(qū)，針對(duì)Ⅰ型的主動(dòng)免疫（疫苗）或被動(dòng)免疫（抗體）并不能有效地保護(hù)雛鴨抵抗DHV的感染（林世棠，蘇敬良等）。目前全國(guó)養(yǎng)鴨密集地區(qū)正在大面積流行的鴨病毒性肝炎，其部分毒株的毒力有所增強(qiáng)，抗原性發(fā)生了變異，使得所流行的DVH發(fā)病日齡、發(fā)病死亡率均有增大傾向，采用鴨病毒性肝炎卵黃抗體的防制效果出現(xiàn)多樣化，常發(fā)生防治失敗，給養(yǎng)鴨業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失。本文將就鴨病毒性肝炎卵黃抗體生產(chǎn)工藝對(duì)其使用效果的影響展開(kāi)論述。
隨著養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展，疾病種類越來(lái)越多，某些病原體的變異也越來(lái)越快，雖然疾病控制手段越來(lái)越多，也越來(lái)越先進(jìn)，但疾病感染壓力卻越來(lái)越大，疾病互傳的可能性也越來(lái)越大，畜禽疾病仍舊是影響?zhàn)B殖效益和人民健康的重要因素之一。無(wú)論政府部門還是養(yǎng)殖業(yè)戶、組織都迫切需要有相應(yīng)的快速有效的對(duì)策來(lái)控制疾病的發(fā)展，降低死亡，減小損失。毋庸置疑，外源性的特異性抗體是治療某些特定傳染病的最直接最快速最有效的方法。卵黃抗體作為一種價(jià)廉易得的外源性特異性抗體，其使用效果已經(jīng)在臨床獸醫(yī)學(xué)上得到了驗(yàn)證和認(rèn)同。但為什么在畜牧生產(chǎn)實(shí)踐中，越來(lái)越多的人卻對(duì)鴨病毒性肝炎卵黃抗體的使用效果產(chǎn)生了懷疑，到底出現(xiàn)了什么問(wèn)題？難道實(shí)踐不能檢驗(yàn)“真理”了嗎？信得科技集團(tuán)山東信得科技股份有限公司作為動(dòng)保行業(yè)的領(lǐng)先者，擁有農(nóng)業(yè)部認(rèn)證的精制卵黃抗體生產(chǎn)車間，并持有鴨病毒性肝炎、雞傳染性法氏囊炎、小鵝瘟三種精制抗體的國(guó)家二類新獸藥證書(shū)，信得科技集團(tuán)青島研發(fā)中心博士后科研工作站研發(fā)團(tuán)隊(duì)在關(guān)于卵黃抗體生產(chǎn)工藝對(duì)其使用效果的影響方面進(jìn)行了持久和廣泛的研究。
抗體(免疫球蛋白，Ig)是機(jī)體受到外來(lái)抗原物質(zhì)刺激后，機(jī)體免疫系統(tǒng)細(xì)胞產(chǎn)生的可以特異性地識(shí)別和結(jié)合外來(lái)抗原并使之失活的一類球蛋白。家禽經(jīng)特定抗原免疫后，可產(chǎn)生相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)入血液循環(huán)，當(dāng)血液流經(jīng)卵巢時(shí)，特異性抗體在卵細(xì)胞中逐漸蓄積，并儲(chǔ)存于卵黃中，這種抗體稱為卵黃抗體(Immunoglobulin of yolk，IgY)，它是卵黃中唯一的免疫球蛋白，具有特異性和針對(duì)性,無(wú)毒副作用。
雞、鴨、鵝等禽類的蛋在營(yíng)養(yǎng)成分上大致相同，主要由蛋黃、蛋清（即蛋白）和蛋殼構(gòu)成。鴨蛋每個(gè)約重60-75克，其中蛋黃占32%，蛋清占57%，其余11%為蛋殼。其中蛋黃又由如下圖所示的成分所構(gòu)成：
從圖中可以看出，在治療鴨病毒性肝炎，使用卵黃抗體時(shí)，起到關(guān)鍵作用的是卵黃中的免疫球蛋白（IgY)，IgY的作用非常廣泛，其中最主要的作用有以下幾種：
v
特定的卵黃抗體能黏附于特定病毒的衣殼上，直接抑制病毒的生長(zhǎng)繁殖；
v
可以黏附于細(xì)菌的菌毛上，使之不能黏附于粘膜上皮細(xì)胞，失去感染能力；
v
能夠促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞的吞噬作用（調(diào)理作用）；
v
中和細(xì)菌、霉菌等毒素的毒性（中和毒素）；
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與病毒抗原結(jié)合使病毒失去感染宿主細(xì)胞的能力（中和病毒）。
既然鴨病毒性肝炎卵黃抗體的作用即是蛋黃中免疫球蛋白的作用，那么，有無(wú)方法把蛋黃中的免疫球蛋白分離出來(lái)呢？蛋黃中所含有的大量脂蛋白及脂肪等物質(zhì)沒(méi)有任何治療作用且體積大，粘稠度高，注射困難且難以吸收，注射后對(duì)機(jī)體的應(yīng)激大，易造成過(guò)敏反應(yīng)，是外源性致熱原，加上注射后易造成注射部位局部組織出血、腫脹、壞死，壞死的組織也會(huì)導(dǎo)致機(jī)體發(fā)熱，而發(fā)熱會(huì)造成機(jī)體神經(jīng)調(diào)節(jié)、體液調(diào)節(jié)等功能的紊亂，從而導(dǎo)致鴨群采食量減少，抵抗力下降，繼發(fā)傳染性漿膜炎、大腸桿菌等疾病。大量的調(diào)查還發(fā)現(xiàn)，目前市面上可見(jiàn)的粗制抗體幾乎都是地下作坊生產(chǎn)的“三無(wú)”產(chǎn)品，生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品質(zhì)量令人堪憂。這些粗制抗體不僅抗體效價(jià)難以保證，而且通常會(huì)污染禽呼腸孤病毒、禽淋巴白血病病毒、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生因子、大腸桿菌、沙門氏菌、支原體等外源性致病原。在注射抗體預(yù)防或者治療鴨病毒性肝炎時(shí)，極有可能造成垂直傳播病原或其他一些細(xì)菌、病毒的擴(kuò)散甚至疾病的爆發(fā)，帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
此外，由于非法造假者往往試圖通過(guò)添加大劑量的甲醛、青、鏈霉素等措施來(lái)延長(zhǎng)其產(chǎn)品的保質(zhì)期，增加所謂的使用安全性，但結(jié)果往往是造成更大的應(yīng)激和嚴(yán)重的藥物殘留。這就是鴨病毒性肝炎粗制抗體的購(gòu)買者和使用者對(duì)粗制抗體的使用效果產(chǎn)生疑問(wèn)的重要原因之一。
信得科技集團(tuán)的精制蛋黃抗體采用了物理、化學(xué)、生物等多重滅活技術(shù)，并結(jié)合使用
酸化法、高速離心、超濾等現(xiàn)代生物技術(shù)HOF生產(chǎn)工藝
。精制就是將蛋黃中的免疫球蛋白進(jìn)行分離純化的過(guò)程。已知蛋黃是由水溶相（Water soluble fraction, WSF）和水不溶相（Water insoluble fraction, WIF）構(gòu)成的乳濁液。WIF主要為脂蛋白構(gòu)成，而蛋黃抗體存在于蛋黃的WSF中。WSF中的脂蛋白類含量甚微，其物理性狀為近乎透明的透明液體。因此蛋黃抗體精制過(guò)程即是WSF的分離過(guò)程。大量臨床使用案例表明，信得精制蛋黃抗體具有效價(jià)穩(wěn)定、效果確實(shí)、保存時(shí)間長(zhǎng)和便于應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)精制蛋黃抗體不會(huì)在注射部位殘留，對(duì)胴體品質(zhì)無(wú)任何影響。
下列表格是信得精制蛋黃抗體與市售粗制蛋黃抗體的比較：
項(xiàng)目 | 信得精制蛋黃抗體 | 市售粗制卵黃抗體 |
合法性 | 合法產(chǎn)品，國(guó)家二類新獸藥 | 非法產(chǎn)品 |
批準(zhǔn)文號(hào) | 國(guó)家正式批準(zhǔn)文號(hào) | 三無(wú)產(chǎn)品 |
執(zhí)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) | 國(guó)家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) | 無(wú)標(biāo)準(zhǔn) |
質(zhì)量監(jiān)控 | 中監(jiān)所復(fù)核合格 | 無(wú)監(jiān)控 |
生產(chǎn)環(huán)境 | GMP車間 | 地下作坊 |
生產(chǎn)工藝 | HOF綜合滅活提取技術(shù) | 生理鹽水或涼開(kāi)水?dāng)嚢璺盅b |
產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) | 抗體效價(jià)達(dá)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)菌、無(wú)支原體、無(wú)外源性病毒污染 | 無(wú)效價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，不進(jìn)行菌檢和外源病毒檢測(cè)，含有大量外源性病原， 使用后可能傳染其他病毒病、細(xì)菌病、支原體病 |
安全性 | 安全可靠 | 不確切 |
抗體含量 | 高 | 低 |
傳播其他疾病 | 不會(huì) | 可能會(huì) |
性狀 | 近似透明 | 粘稠糊狀 |
刺激性 | 很小，幾乎沒(méi)有 | 大 |
使用方便性 | 流動(dòng)性好，易注射 | 不易注射，有時(shí)堵塞針頭 |
貯藏 | 2-8℃或常溫保存 | 必須冷凍 |
吸收性 | 非常好，無(wú)殘留 | 差，易形成機(jī)化組織 |
保存期 | 18個(gè)月 | 短，易腐敗變質(zhì) |
信得鴨病毒性肝炎卵黃抗體（肝倍舒）的特點(diǎn)：
1、國(guó)家二類新獸藥，GMP認(rèn)證；
2、保護(hù)譜廣、治愈率高：本產(chǎn)品在制備過(guò)程中除采用了標(biāo)準(zhǔn)毒株外，還采用了國(guó)內(nèi)各養(yǎng)鴨密集區(qū)的超強(qiáng)毒株及變異株，對(duì)鴨病毒性肝炎變異地區(qū)亦有非常好的防治效果，對(duì)發(fā)病鴨群的治愈率達(dá)95%以上；
3、提純濃縮、抗體效價(jià)高：梯密度濃縮技術(shù)，精制提純到免疫球蛋白，效價(jià)是一般市售產(chǎn)品的4-5倍，達(dá)到1：1024-1280；
4、見(jiàn)效快，保護(hù)時(shí)間長(zhǎng)：5-6小時(shí)控制病情，降低死亡，恢復(fù)精神狀態(tài)，注射一次有效抗體效價(jià)能夠維持10天以上；
5、注射劑量小，應(yīng)激小，無(wú)毒副作用：將蛋黃中脂肪、脂蛋白分離去除，其性狀為近乎透明的無(wú)色液體，不含任何有害物質(zhì)和外源污染，安全性高，對(duì)機(jī)體無(wú)任何刺激及毒副作用，對(duì)胴體品質(zhì)無(wú)影響；
6、抗體粘稠度低，流動(dòng)性好，使用時(shí)無(wú)需解凍，注射方便快捷，只需使用小號(hào)針頭，更有利于注射部位皮膚愈合；
7、抗逆性強(qiáng)，疫苗耐熱保護(hù)技術(shù)及疫苗專用包裝，效價(jià)穩(wěn)定，保存時(shí)間長(zhǎng)：2－8℃條件保存18個(gè)月，常溫條件下保存6個(gè)月對(duì)抗體效價(jià)無(wú)任何影響。
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