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畜牧人

標題: 波爾山羊良種繁育技術試驗研究 [打印本頁]

作者: apple12151007 時間: 2010-9-3 13:07
標題: 波爾山羊良種繁育技術試驗研究

　　波爾山羊良種繁育技術試驗研究

　　余華1 葉健強2*

　　(1. 四川出入境檢驗檢疫局，四川成都 610041;

　　2. 四川省畜牧科學研究院，四川成都, 610066)

　　波爾山羊是南非育成的一個世界公認的著名優秀肉用山羊良種，具有體軀高大，后軀發達，生長發育快，肉質好，屠宰率高，繁殖無季節性，適應性強，雜交改良當地山羊效果顯著等特點。我國于1995年開始少量引進布爾山羊，并通過與當地羊雜交取得了顯著的改良效果和經濟效益?，F在由于我國國內的波爾山羊引種數量有限，純種羊數量少，因此需要大量的擴繁純種的波爾山羊。在自然純繁的基礎上，為了加速純種繁育，我們開展了優秀波爾山羊胚胎移植工作。胚胎移植可以最大限度地發揮純種優秀母羊的繁殖潛力和優秀遺傳基因的利用，大大加快良種羊的純種繁育速度，提高繁殖效率，誘發母羊產多胎，擴大良種羊群等。本研究根據胚胎移植的關鍵技術(供體羊和受體羊的選擇、供體羊超數排卵處理和配種、人工授精、受體羊同期發情處理、胚胎回收與鑒定、胚胎保存和胚胎移植等)已經形成一套成熟的波爾山羊良種繁育技術方案，應用于波爾山羊的規?；a。
　　1 材料和方法
　　1.1材料
　　1.1.1 試驗種母羊、種公羊試驗種母羊為國外引進的原種波爾山羊母羊或其所產后代，臨床健康, 斷奶一個月以上，生殖器官無可見異常。種公羊為國外引進的原種波爾山羊或其所產后代，年齡2～4歲，臨床健康，性欲旺盛，精液品質優良。
　　1.1.2試驗用受體羊受體羊是從不同地區購入的有正常繁殖史的經產雅安奶山羊、成都麻羊、簡陽大耳羊和南江黃羊，或體格發育成熟的青年母羊，并適應飼養一個月以上，臨床健康。
　　1.1.3 藥品及試劑促卵泡素[FSH，國營寧波激素制品廠(寧一廠)，批號20000629、20010515;寧波第二激素廠(寧二廠),批號2000618、20010602;澳大利亞產，批號COIIV-L080;中科院動物所，2002年生產]。促排卵素3號(LRH-A3, 寧波第二激素廠，批號20000220)。氯前列烯醇(PG，上海市計劃生育科學研究所，批號02717)。羊實用型炔諾酮陰道栓(西北農林科技大學小動物胚胎工程二室試制)。胚胎回收液體(沖卵液)：含2～5%滅活新生犢牛血清(NCS)的磷酸鹽緩沖液(PBS)，用國產分析純試劑自配。胚胎保存液：含20% NCS的PBS。
　　1.1.44 主要器械及設備腹腔鏡，體視顯微鏡，恒溫水浴鍋，手術器械，自制手術保定臺，自制專用胚胎回收及移植器械。
　　1.2 方法
　　1.2.1 超數排卵處理將初選合格的波爾山羊母羊，用實用型炔諾酮陰道栓進行預處理。預處理7～10 d后開始采用FSH-PG法進行超數排卵。方法1：生理鹽水稀釋FSH，按遞減法多次注射;方法2: 用30%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)溶液稀釋后一次注射總劑量。兩種方法都分別在注射FSH后60 h和72 h注射PG，并在第一次注射PG時撤除陰道栓。母羊發情后每隔8～12 h配種一次，至發情結束。發情配種當天計為0 d, 在第5 d用腹腔鏡檢查卵巢反應，適宜手術回收胚胎者在第6 d用手術法回收子宮胚胎。
　　1.2.2 胚胎回收與質量鑒定手術前將手術羊空腹24小時,術前麻醉、保定,術部剃毛、消毒，進行胚胎回收?；厥找后w靜置2～5 min后，將集卵杯置體視顯微鏡下(15～20×)撿卵,并用新鮮的操作液體凈化胚胎2～3次，在60×下對胚胎進行形態質量分級，A、B、C級定為可用胚，置胚胎保存液中待移植，或進行胚胎分割或冷凍，剔除D級胚及未受精卵。
　　1.2.3 受體同期發情處理程序及同期發情有效性判定用國產炔諾酮陰道栓、FSH和PG組成三種誘導山羊同期發情的處理程序，對初選合格的母羊進行同期發情處理。程序1：陰道放置羊實用型炔諾酮陰道栓(0d)，11d撤栓，同時肌注FSH 33單位;程序2：放置炔諾酮陰道栓(0d)，10d肌注FSH 25單位，12h后撤栓，同時二次肌注FSH 25單位，并注射PG 0.1mg;程序3：肌注PG 0.1mg(0d)，6d放置炔諾酮陰道栓，16d肌注FSH 25單位，12h后撤栓，同時二次肌注FSH 25單位，并注射PG 0.1mg。處理程序從撤除炔諾酮陰道栓結束，從撤栓后12h開始，每隔12h用試情公羊試情，觀察發情情況，母羊接近公羊、搖尾、接受公羊爬跨或母羊互相爬跨者判定為發情，96h內發情者為同期發情處理有效。記錄發情羊號，并繼續試情、記錄每只羊的發情持續期，觀察到一次發情者持續期記為12 h、觀察到二次發情者持續期記為24 h，依此類推，直到連續發情結束。在發情結束后5 d用腹腔鏡觀察發情羊卵巢上排卵及黃體發育情況，記錄黃體側別及黃體數和質量，并記錄未排卵卵泡大小及數量，卵巢上卵泡正常發育、排卵并形成正常功能黃體，同時卵巢上無卵泡或只有較小卵泡的受體羊作為可用受體，于5～6 d進行手術胚胎移植;或在手術時探察并記錄卵巢上排卵及黃體發育情況，排卵并發育為功能黃體的受體進行胚胎移植。
　　1.2.4 胚胎移植采用手術方法將保存的可用胚移植于同期發情的受體羊黃體側子宮角前1/3。移植器械為自制專用胚胎移植器械，移植手術時，做到操作輕巧、動作穩妥可靠、避免過度牽拉生殖器官、禁止擠壓卵巢，以盡量減輕手術損傷。胚胎移植效率以移植受體妊娠率和移植胚胎最終發育為出生羔羊的胚胎成羔率計算，其中妊娠受體只計算妊娠到期產羔和觀察到的流產受體。統計分析受體妊娠率和胚胎成羔率。
　　2 結果
　　2.1 超數排卵結果
　　共超排處理120只波爾山羊，回收胚胎1849枚,平均每只15.4±7.20枚，其中可用胚16.8枚，平均13.4±7.94枚，各年度超排結果見表1。
　　表1 波爾山羊超數排卵結果

年度	羊數(只)	回收卵數(枚)		可用胚數(枚		可用胚比率(%)
年度	羊數(只)	總數	平均數(±Sd)	總數	平均數(±Sd)	可用胚比率(%)
2003	40	608	15.2±10.06a	538	13.5±8.01a	88.5 a
2004	50	752	15.0±9.25a	658	13.2±8.26 a	87.5 a
2005	30	481	16.0±7.05 a	412	13.7±7.82 a	85.8 a
合計	120	1849	15.4±7.20	1608	13.4±7.94	87.0

　　同列上標字母不同者差異顯著 P<0.05
　　2.2同期發情結果
　　共處理了1218只受體山羊，各年度同期發情只數、發情羊正常排卵并形成功能黃體的只數及處理羊總有效率情況見表2。
　　表2 受體山羊同期發情結果

年度	處理只數(只)	發情只數(只)	排卵并形成功能黃體只數(只)	處理羊總有效率(%)
2003	400	385	366	91.5
2004	500	492	453	90.6
2005	318	306	282	86.8
合計	1218	1183	1101	90.4

　　2.3胚胎移植結果
　　將1608枚新鮮胚胎移植給961只受體，受體妊娠率達64.3%，胚胎成羔率達54.%。各年度胚胎移植結果見表3
　　表3 新鮮胚胎移植結果

年度	移植受體數	移植胚胎數	妊娠受體數 (受體妊娠率%)	產羔數 (胚胎成羔率%)
2003	320	538	214(66.9)	270(50.2)
2004	412	658	253(61.4)	380(57.8)
2005	229	412	151(66.0)	218(53.0)
合計	961	1608	618(64.3)	868(54.0)

　　3 分析
　　3.1 超排效果穩定性分析
　　從表1統計的結果看，在三個年度進行超排時，都能夠取得較滿意的超排效果，平均回收卵數15.4±7.20枚，平均獲得桑葚胚及囊胚期可用胚13.4±7.94枚，優于或類似于同期報道的波爾山羊超排結果，但其中有的報道采用的是胚胎回收率相對較高的輸卵管回收法，這種回收方法對生殖器官的損傷相對較大，易造成生殖器官粘連，而且移植產羔率也相對較低。經統計分析，各年度超排羊回收卵平均數和可用胚平均數之間及各年度回收卵可用胚比率間均無顯著差異(P>0.05)。說明我們的超排程序已經達到了非常穩定的效果。
　　影響超數排卵有效性的因素很多，有個體差異，超排激素的來源、劑量、注射程序，供體羊的營養、繁殖生理狀況等多種因素。根據我們的試驗研究經驗，歸納以下幾點：①用PVP液稀釋FSH后單次注射的超排結果較好，但這種注射方法的一個主要缺陷是，處理程序結束后超排羊開始發情的時間差異太大，而且發情持續期差異也比較大，在生產條件下進行產業化應用時，難以安排合適的發情同期化的受體羊進行胚胎移植，不適于產業化胚胎移植的精確化和標準化的要求。②采取適宜的超排程序，只要激素質量有所保證，國內與國外生產的激素用于波爾山羊超排均是可行的，而且超排激素的國產化對良種山羊胚胎移植產業化具有重大意義，可以降低應用成本，增加經濟效益，促進國產胚胎移植產品的系列化配套。③我們試驗性地在春季進行了少量的超數排卵處理，取得了滿意的超排效果，與秋季超排結果無顯著差異。④體質較差的母羊，其營養水平不能滿足卵泡的正常發育和排卵，從而會影響超排的有效性。⑤在胚胎移植產業化應用時，必須選擇生長發育完全成熟的經產母羊進行超排，而且以2～3胎母羊超排效率較高。⑥首次超排效果較好的供體母羊可以進行重復超排，只要不嚴重損傷生殖器官，進行重復超排時仍能取得較滿意的超排效果。這將會大大提高胚胎移植供體羊的有效利用率。
　　3.2 同期發情效果分析
　　在發情周期的不同階段，母畜生殖器官的內分泌環境、生化和組織學特性，對不同發育階段的胚胎有不同的影響。所以在胚胎移植工作中，應做到使受體與供體的發情同期化，并將胚胎移植到與供體處于相應發情階段的受體生殖道(子宮或輸卵管)的適當部位，使胚胎在受體所處環境的生理狀態與供體相同，才能繼續發育。所以在山羊胚胎移植規模化生產應用中，提高受體羊同期發情效率、從而提高受體羊利用率，是胚胎移植成功與否、效益大小的關鍵技術之一。
　　我們在研究中，完全選用國產炔諾酮陰道栓、促卵泡素(FSH)和氯前列烯醇(PG)等同期發情制劑，首先用程序1誘導山羊同期發情，并加以改進逐漸過渡到使用程序2及程序3，形成了較為有效和標準化的處理程序。同時，用該程序處理羊同期發情后正常排卵并形成功能黃體的比率也非常高，這一指標能準確反映處理羊最終能夠作為胚胎移植可用受體的比例(即同期發情總有效率)，能為合理安排供、受體羊比例提供了準確的基礎數據。與國外、或國內使用進口同期發情處理制劑的同類研究相比，同期發情效率及穩定性較高。而且通過對不同同期發情制劑及輔助處理方法的改進，使同期發情總有效率逐漸提高。
　　在同期發情處理中主要采用孕激素及其類似物、前列腺素，促性腺激素一般只作為輔助處理制劑，可以提高同期發情效率。前列腺素處理法是溶解母羊卵巢上的黃體而誘導同期發情的方法，使用簡單方便，但其缺點是只對卵巢上有黃體的母羊起作用，對發情周期不正常、不處于發情周期黃體期或某些季節卵巢相對靜止的羊只無效，相對而言其同期發情效率不如孕激素處理法高，所以在胚胎移植中要達到一定數量的可用受體，必須增加被處理母羊的基數，這樣勢必增加胚胎移植中受體羊數量和飼養管理的成本。孕激素及其類似物處理法的可以克服前列腺素處理法的不足，常常與促性腺激素配合使用而同期發情效率較高，所以我們在研究初期即選用這種方法進行受體羊同期發情處理(程序1)，而且選用近年應用較多的短周期處理(11 d)，在研究應用過程中還配合去栓時加注小劑量PG的處理方法(程序2)，以增加同期性。為了進一步增加同期發情總有效率，降低受體羊群的數量，我們根據山羊發情周期中生殖內分泌基本規律，又對處理程序做了進一步改進，在放置炔諾酮陰道栓前加用一次小劑量PG，調整整個羊群的發情周期，之后再用炔諾酮陰道栓預處理，經過一個孕激素作用周期，使受處理的所有羊只的生殖生理狀態進一步統一，從而取得了非常滿意的同期發情有效性。
　　三種程序處理的受體山羊，大部分集中在去栓后24～60 h發情，發情持續期集中在24～60 h，各程序之間也無統計學差異，三個處理程序誘導同期發情的羊只發情特點的類似，說明方法的不同會產生不同的同期發情處理結果，而不會改變母羊的發情生理表現，而恰恰這一點也是我們在胚胎移植工作中所關心的關鍵問題之一，進一步說明我們所采用的同期發情處理程序，不僅有效，而且不會改變發情羊生殖生理規律，而對提高胚胎移植效率有較大的實際意義。
　　在山羊胚移中，一般要求供、受體羊同期化程度為供體與受體同步差在±24 h內，而且最好是-12 h，即受體羊晚于供體羊。而供、受體羊發情同期化的實質應該是排卵時間的同期化，山羊的排卵時間一般都在發情結束之前的一段時間，這就需要以發情結束時間來判斷同期化。在波爾山羊胚胎移植中，安排受體同期發情程序的結束點時，受體羊的撤栓時間應安排在比供體提前12 h～20 h左右為宜。
　　3.3 胚胎移植效率分析
　　胚胎移植數量、受體羊品種、黃體數量及質量對胚胎移植效率的均有影響。移植胚胎數量不同的受體，妊娠率和妊娠到期產羔的受體比率差異不顯著(P<0.05)，而移植胚胎最終發育為出生羔羊的比率差異顯著(P<0.05)，移植單胚、雙胚、三胚和四胚時胚胎成羔率分別為60.2%(171/284)、51.5%(890/1724)、41.33%(31/75)和36.36%(16/44)。各品種受體胚胎移植后妊娠率雖有所不同，移植雙胚時胚胎成羔率存在顯著差異(P<0.05)，最終使不同品種受體羊之間胚胎移植效率出現差異。奶山羊受體移植雙胚時胚胎成羔率最高，與成都麻羊和簡陽大耳羊差異顯著(P<0.05)，南江黃羊低于奶山羊、高于成都麻羊和簡陽大耳羊，而且奶山羊和南江黃羊移植單胚和雙胚時胚胎成羔率差別不大，成都麻羊和簡陽大耳羊則差異比較大。各品種受體羊卵巢上只有一個黃體與兩個黃體時，胚胎移植妊娠率無顯著差異，而且都非常接近。黃體大小不同時，受體妊娠率及胚胎成羔率差異不顯著，而隨著黃體大小變化有逐漸下降。這提示我們，在胚胎移植實際應用中，只要同期發情受體羊正常排卵并發育為黃體，都可以作為可用受體進行胚胎移植，但應慎重選用卵巢上黃體發育太小的受體。

作者: 海綿 時間: 2010-9-3 13:58
比較專業支持

作者: 260174134 時間: 2010-9-3 14:19
保持純種很難

作者: 12haoqiuyi 時間: 2010-9-3 14:33
來冒個泡對繁育不了解

作者: 史家村 時間: 2010-9-4 20:02
看一看。專業性太強，看不懂。

作者: aystyun 時間: 2010-9-23 16:56
繁殖技術學學好些。降低成本

歡迎光臨畜牧人 (http://www.cqnsfzw.com/)

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