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畜牧人

標題: 動物微生態工程 [打印本頁]

作者: 微生態岳陽    時間: 2010-9-10 21:40
標題: 動物微生態工程
  動物微生態制劑如何發揮作用?綜合國內外微生態的研究結論,有優勢種群學說,生物奪氧學說,定植抗力學說、生物拮抗學說、粘膜免疫學說、腸道營養學說、腸道調控學說等主流學說。以寶來利來產酶益生素為例,在以上學說的基礎上,細化為以下八個方面。
  ●產酶益生素八個作用之一 ——動物微生態平衡調控劑
  據Luckey測算,豬消化道含1014個細菌細胞,而豬自身細胞僅1013個,糞便細菌含量在5×109—5×1010/克糞便濕重之間,腸道微生物可分為三類:①優勢菌群,超過90%,包括雙歧桿菌、乳酸菌、消化球菌等,參與動物機體的生長發育、新陳代謝、消化吸收、免疫防御等重要功能;②機會性細菌占10%,包括無致病性的大腸桿菌、鏈球菌及腸球菌等,這些機會性細菌視腸道環境而改變停留在腸道的數量及時間;③致病性細菌,含量少于0.01%,包括梭菌、葡萄球菌、偽單胞菌、致病性大腸桿菌、曲型菌及部分真菌。這類細菌不僅具有致病性,同時也會消耗宿主的能量,之所以平時不發病,在于優勢菌群對其的競爭性排斥與控制。
  動物消化道的菌群種類及數量分布情況:
  動物微生態制劑扶持優勢菌群,抑制致病性細菌定植、繁殖和生長,調整腸道菌群平衡,治理腸道菌群失調。
  在中國目前的養殖環境和條件下,導致動物腸道失調的因素很多,如抗生素、環境中病原菌、驚嚇、轉群、炎熱和寒冷、飼料營養不良、注射疫苗、水污染、刺激性氣體等,都可以影響腸道菌群平衡。大多數情況下雖不發病,但優勢菌群的比例會有明顯下降,稱為腸道菌群的“亞平衡狀態”。不表現為典型病癥,但會影響到免疫、防御、消化、吸收等,隨時會因為外界病原菌的侵入或內源性感染而動物生病。因此,必須始終維護好動物的腸道菌群平衡,等到出現問題時治療,就會影響到動物的生長、生產性能和飼料報酬,增加了養殖成本和治療成本。許多國家將動物微生態制劑列為繼維生素、微量元素、氨基酸之后的第四類常規飼料添加劑,就是這個道理。
  近年來,寶來利來公司對動物腸道疾病尤其是幼齡畜禽下痢進行了微生態調控方面的大量研究,通過毒性試驗,人工感染治療試驗,藥物對比試驗等證明產酶益生素調整需氧菌或兼性厭氧菌引起的幼畜禽下痢有顯效,如對仔豬黃痢、白痢,犢牛下痢,雛雞白痢,雛鴨下痢等,治愈率可達90%以上。產酶益生素與氯霉素、土霉素、金霉素、痢菌凈等17種抗菌藥物比較,其療效平均高出26.1%。
  ●產酶益生素之八個作用之二——參與并調控營養物質的消化、吸收和代謝
  (一)產酶益生素通過調控腸道正常菌群參與營養物質的消化、吸收和代謝
  1.腸道正常菌群與蛋白質消化、吸收和代謝
  幾乎所有細菌都有肽酶,而具有蛋白酶的細菌則較少,如嗜熱脂肪芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌等能產生堿性、中性或酸性蛋白酶。肽酶是專一作用于肽鍵水解酶,每次水解出一個氨基酸。消化道細菌可分解存在于消化道,不管是來自食物或來自宿主本身組織的所有氮化物,而且它們還可合成大量的可被宿主再利用的含氮產物。
  消化道菌群的外源酶可補充肌體的內源酶的不足,特別是在幼齡動物更為明顯。如細菌蛋白酶可增強宿主胃蛋白酶和胰蛋白酶的活性,細菌尿酶在分解尿酸方面起主要作用。
  腸道菌群直接參與某些氮化物的代謝。微生物能降解氨基酸形成氨。這種氨可進入再循環和為宿主合成氨基酸再用。在蛋白質不足的情況下,腸道菌的活動在氨轉化上對宿主更為有益。腸道菌固氮主要發生在宿主對蛋白質的饑餓狀態下。
  2.腸道正常菌群與碳水化合物消化、吸收和代謝
  菌群與能量代謝:腸道微生物分解淀粉產生葡萄糖或雙糖(如麥芽糖等),促進宿主對養分的高效利用。細菌產生的淀粉酶有幾種,在飼料中起作用的主要有α-淀粉酶和糖化酶,其分解淀粉的方式也不同:(1)液化型淀粉酶(又稱α-淀粉酶),可將淀粉水解為麥芽糖或其它雙糖等;(2)糖化型淀粉酶能將淀粉水解成麥芽糖或葡萄糖。α-淀粉酶為內切酶,將淀粉大分子水解成易溶解的中等和低分子物質,糖化酶則是將被α-淀粉酶水解成的中等和低分子物質如線性寡糖、雙糖和糊精等進一步水解成葡萄糖,被動物所利用。纖維素及NSP是單胃動物消化系統無法分解的成分,必須借助結腸部位的菌群進行發酵作用,或分泌外源性消化酶,才能分解并吸收。單胃動物的盲腸中,微生物可向宿主提供25%—35%的因為細菌酶降解多糖而產生的營養物質。
  腸道微生物可通過直接作用于食物脂質和內源脂類,或間接改變膽固醇和其主要衍生物——膽鹽的代謝,消化道菌群也可以參加脂類代謝。腸道微生物發酵產生短鏈脂肪酸、短鏈脂肪酸又稱揮發性脂肪酸,一般在消化道內見到的主要揮發性脂肪酸有醋酸、丙酸、丁酸。短鏈脂肪酸是草食動物的前胃發酵以及所有動物的下部消化道(主要在大腸)的發酵而產生的。
  3.腸道正常菌群對維生素合成具有重要作用:反芻動物、家兔如飼料中無B族維生素不會產生缺乏癥,因其腸道菌群可以合成。在普通雞的盲腸內有一些微生物能合成硫胺素,吡哆醇、核黃素、泛酸、生物素、葉酸、煙酸及B12。Savage(1997)估計,盲腸中的微生物活動可提供動物維生素需要量的25%—35%。
  4.腸道正常菌群對礦物元素消化、吸收和代謝的影響:可提高鈣、磷、鐵、鎂、鋅等的利用率。
  (二)產酶益生素本身直接參與營養物質的消化、吸收和代謝
  產酶益生素的參與作用:產酶益生素中的芽孢桿菌具有很強的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性,能分解淀粉等多糖以及核酸和脂類(Madigan,1997)。乳酸桿菌屬和鏈球菌主要利用葡萄糖產生乳酸、丙酸、乙酸,在家畜飼料中添加芽孢桿菌使空腸內容物pH值下降(Ahrens,1987),這對新生仔畜是十分有益的。
  用產酶益生素飼喂生長育肥豬(20—90kg),結果表明豬的十二指腸和空腸(二者的均值)的α-淀粉酶的活性為22.74±2.3顯著高于對照組的7.26±0.7,胰蛋白酶活性為3.70±0.05,也顯著高于對照組。給鯉魚飼喂產酶益生素后,試驗組鯉魚腸道淀粉酶的活性為160酶單位(u),是對照組(41.6u)的3.84倍,蛋白酶185.6u是對照組67.2u的2.76倍。肉仔雞飼喂產酶益生素后可使血清中脂肪的活力由對照組的624.5±45.5(u/mg.Prot.)提高到試驗組的757.3±53.4(u/mg.Prot.)。母豬日糖中飼喂產酶益生素,刺激了后腸的發酵,從而導致揮發性脂肪酸產量和細菌發酵終產物增加,這樣就可為母豬多提供30%的能量需要,結果提高了母豬的養分利用率和產奶量。
  總之,產酶益生素通過調控作用并親自參與動物消化道營養物質的消化、吸收和代謝,可以明顯的提高飼料轉化效率,特別是對低營養濃度飼料有著不同尋常的意義。
  ●產酶益生素八個作用之三——保持非免疫性腸粘膜屏障和改善腸道免疫屏障。
  腸道不僅是消化、吸收和營養物質交換的重要場所,也是動物最大的免疫器官。動物的腸粘膜面積巨大,約2倍皮膚的表面,粘膜每時每刻都在接觸大量抗原,擔負著重要的免疫功能。腸道屏障包括六個層面:①腸道正常菌群;②粘膜層;③腸上皮細胞層;④腸道免疫系統;⑤腸一肝軸;⑥防御系。越來越多的證據表明,腸粘膜屏障與寄居在腸道中為數眾多的腸道菌群有密切關系。其參與了構成機械屏障,與粘膜共價結合,與機體產生的酶、活性肽以及代謝產物共同組成化學屏障,通過免疫賦活作用產生分泌型IgA及各種免疫活性細胞和細胞因子等。
  菌群失調時,腸道過度生長革蘭氏陰性桿菌,通過產生細菌蛋白酶直接破壞腸上皮細胞微絨毛膜蛋白,或通過改變腸道上皮細胞的生化反應,使絨毛受損甚至消失。(見下圖)
  產酶益生素可促使小腸絨毛高度增加,隱窩變淺,并維護正常形態和免疫屏障。
  菌群屏障是腸粘膜免疫第一關也是最重要的一關,可直接抑制外源性潛在的致病菌對腸上皮細胞的粘膜定植,起定植抗力作用;另一方面通過酸性代謝產物,營養和氧氣爭奪,生物拮抗功能,殺菌素和化學物質抑制和殺死大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌等有害菌。
  長期應用廣譜抗生素,一方面殺滅腸道敏感的專性厭氧菌,菌膜屏障功能喪失殆盡,正常菌群腸道定植抗力及其它生物拮抗功能消失;另一方面使易產生耐藥的腸桿菌科細菌(如大腸桿菌、克雷伯桿菌等)、外源性耐藥菌及真菌易粘附到腸上皮細胞上,并得到優勢生長,同時擴大腸道內毒素,引進腸道細菌及內毒素移位,由此引起的難以控制的二重感染,膿毒血癥、MODS甚至MOF在臨床屢見不鮮,是臨床面臨的一個十分棘手的問題。
  產酶益生素——腸道正常菌群可產生或誘導腸粘膜免疫系統產生的免疫物質
  試驗表明,對營養不良的肉雞飼喂產酶益生素,測定小腸免疫球蛋白分泌細胞,上皮層內的淋巴細胞、桿細胞和杯狀細胞的結構和超微結構,發現由營養不良而導致的腸粘膜屏障和粘膜免疫功能受損,可能通過產酶益生素的補充而修復。
  ●產酶益生素八個作用之四——對付耐藥性病原菌、預防內源性感染、二重感染和混合感染的首選
  動物體在微生態平衡條件下,正常微生物群可以排斥外源微生物的定植和浸入,使動物體免遭病原微生物及有毒代謝物的侵害。一旦這種微生態平衡被打破,則會發生感染。感染可分為自身感染、內源性感染、外源性感染、污染,外源性感染主要是指由于使用抗生素后,產生耐藥因子而表現出的外源性感染特點,引起感染的病原微生物有大腸桿菌、葡萄球菌、梭菌、變形桿菌、綠膿桿菌、空腸彎曲菌、幽門螺旋菌、耶爾森菌等。內源性感染是由腸道內的機會性細菌大量滋生而變成條件性致病菌,如大腸桿菌、消化球菌、腸球菌等。
  條件性致病菌大腸桿菌,動物主要感染源之一。特異性黏著在小腸上皮細胞上,定植后增殖和分泌腸毒素。
  大腸桿菌的耐藥性隨著抗生素劑量的加大而增大,幾十年間上升了成百上千倍。大部分抗生素很難再發揮抑菌作用。
  下圖為豬回腸產腸毒素大腸桿菌(ETEC)感染引起腹泄,正常菌群及產酶益生素共同抵抗的作用方式:共生菌群的免疫應答及抑制抗原,增強了對病原菌的免疫應答,共生菌群產生的物質增強了宿主抗體效價。
  抗感染微生態制劑產酶益生素,抑制大腸桿菌等有害病原菌的機理:(1)造成限制病原菌生長的環境,主要是醋酸、丙酸、丁酸的作用,降低腸道pH值。(2)競爭細菌受體位點,由于腸道正常菌群的定植抗性降低,生物拮抗作用和屏障作用減弱,必須應用抗感染微生態制劑來競爭占位并幫助正常菌群恢復優勢種群地位。(3)競爭氧和營養成分,抗感染微生態產酶益生素的耗氧能力很強,可在腸內造成厭氧環境,不利于有害需氧菌。(4)分泌抑菌物質。
  ●產酶益生素八個作用之五——使徹底取代飼用抗生素成為可能,抗生素重新回到自己的治療地位
  飼用抗生素是在藥用抗生素基礎上發展而來的,對動物具有促進生長作用,可提高飼料轉化率。飼用抗生素的促生長機制為:(1)抗生素可以抑制動物體內環境中有害微生物的生長繁殖,起到凈化環境的作用;(2)抗生素可以抑制腸道內微生物產生毒素和有害代謝產物,從而減少這些物質對腸壁細胞的刺激,有利于營養物質的吸收;(3)抗生素可抑制微生物在動物體內外分解產生過多的氨。
  飼用抗生素頻繁大量使用可引起動物內源性感染或二重感染,導致動物體內菌群失調,進而拉稀或發病死亡;導致抗藥菌株的產生,人們不得不頻繁換用抗生素品種或加大用量,造成抗生素在動物體內的殘留;這不但影響了人類的飲食安全,還影響了畜禽產品的出口創匯,大大制約著畜牧業的發展。大量的研究表明,所有的飼用抗生素在畜禽幼年階段促生長效果明顯,而在飼料中長期使用一段時間后,其促生長的效果就會降低而不明顯。另外,飼用抗生素與維生素、礦物質元素之間有相互拮抗作用。因此,許多國家紛紛通過立法對越來越多的抗生素品種加以禁止。
  介于飼用抗生素的種種弊端,世界各國學者先后開展了能克服抗生素種種弊端、無毒副作用、無殘留的綠色飼料添加劑的研究。在綠色飼料添加劑的研制與開發過程中,人們首先研究的是益生素(又稱微生態制劑)。益生素以其無毒副作用、無耐藥性、無殘留、成本低、效果顯著等特點,逐漸得到廣大養殖界同仁的首肯。許多專家預言,益生素將成為替代抗生素的跨世紀產品,是目前最具有發展前景的新型綠色飼料添加劑。
  “產酶益生素”與桿菌肽鋅、硫酸粘桿菌素飼喂肉雞的對比試驗
  1.試驗分組:2400只1日齡AA肉仔雞,隨機分成4組,每組600只,每組設3個重復,200只/重復。
  2.日糧:分為2個階段,0—22日齡,22—49日齡。
  一組為對照組飼喂基礎日糧。
  二組為“產酶益生素”組。0—21日齡基礎日糧+0.2%“產酶益生素”,22—49日齡基礎日糧+0.1%“產酶益生素”。
  三組為桿菌肽鋅組。基礎日糧+30ppm桿菌肽鋅。
  四組為硫酸粘桿菌素。基礎日糧+20ppm硫酸粘桿菌素。
  3.飼養管理:采用地面平養,自由采食飲水,常規免疫程序免疫。
  4.試驗結果:
  4.1 臨床觀察:“產酶益生素”組的消化率好,糞便正常,較干燥,且臭味小,雞只精神狀態良好,飲食欲旺盛,抗生素組與對照組相差不大,部分有稀便,消化不完全,8天后基本好轉,且雞糞臭味較大。
  4.2 各組死淘情況
  在0—21日齡,二、三、四組死淘率均明顯低于對照組(p<0.01),說明“產酶益生素”和桿菌肽鋅、硫酸粘桿菌素,在前期防病保健中均起到了很大作用,三者間存在顯著差異(p<0.05)。在22—49日齡“產酶益生素”組明顯低于抗生素組(p<0.01)和對照組(p<0.01),說明“產酶益生素”對肉雞腸道菌群平衡作用突出,效果優于抗生素。
  4.3 各組平均日增重和飼料轉化率
  “產酶益生素”組平均日增重比對照組提高14.58%,料肉比下降13.74%(p<0.01),桿菌肽鋅組日增重比對照組提高7.5%(p<0.05),料肉比下降7.1%(p<0.05),硫酸粘桿菌素組日增重比對照組提高8.33%(p<0.05)。而“產酶益生素”組的日增重和料肉比均顯著好于抗生素組。(本試驗由山東寶來利來公司委托山東農業大學動物科技學院所做)
  “產酶益生素”與金霉素、阿散酸飼喂仔豬的對比試驗
  1.試驗豬及分組:60頭30日齡,體重相近的長白仔豬,隨機分兩組,每組30頭。
  2.試驗日糧:基礎日糧60%、麩皮6%、豆粕27%、魚粉2%,預混料5%,豬消化能13.19MJ/kg,粗蛋白18%。對照組金霉素50mg/kg,阿散酸100mg/kg,試驗組加0.2%的“產酶益生素”。
  3.飼養管理:干粉料,自由采食、飲水。預飼期1周,試驗期30天。
  4.試驗結果
  4.1 臨床觀察:兩組均有腹瀉現象,但“產酶益生素”腹瀉率明顯低于抗生素組,糞便臭味大幅度降低。兩組豬毛光滑整潔、皮膚光亮,但“產酶益生素”組的精神狀態良好,食欲旺盛,均好于抗生素組,抗生素組的豬好吃懶動,昏昏欲睡。
  4.2 生產性能
  試驗表明:30日齡仔豬,在同等條件下,“產酶益生素”組比抗生素組的日增重提高7.8%,料肉比下降7.18%,日增重及料肉比均差異顯著(p<0.05)。
  小結:試驗結果表明,仔豬日糧中添加0.2%“產酶益生素”,在預防仔豬腹瀉,提高日增重和飼料轉化率,均比使用金霉素+阿散酸的效果好。
  討論
  肉雞和仔豬的飼喂試驗結果表明,“產酶益生素”完全可以替代飼料中添加的抗生素。“產酶益生素”與飼用抗生素相比的優勢在于:(1)首先,“產酶益生素”是一種無污染、無殘留、無毒副作用、安全可靠的綠色飼料添加劑,添加“產酶益生素”生產出的畜禽產品完全符合食品衛生要求,有益于人類健康。(2)“產酶益生素”的綜合使用效果好于飼用抗生素。(3)不產生抗藥性,可以長期連續使用。(4)“產酶益生素”能夠迅速調整動物腸道菌群平衡、預防感染、提高機體的細胞免疫和體液免疫機能,而飼用抗生素長期大量使用,導致抗藥菌株的產生,動物腸道菌群失調,造成內源性或二重感染,使機體的免疫功能下降。
  ●產酶益生素八個作用之六——促進肉雞、仔豬、犢牛、魚蝦等的生長速度,提高蛋雞產蛋率,提高奶牛泌乳量和乳脂率。
  1.產酶益生素對蛋鴨使用效果的研究(本試驗報告來自山東寶來利來生物研究院)。
  參試鴨品種為金定鴨,鴨齡405天(正值產蛋期)。分兩個組,一組停用產酶益生素7天,觀察產蛋率。
  ①產酶益生素可顯著提高蛋鴨的產蛋率。產酶益生素對生產中的鴨有促進產蛋作用。能使換羽后加快形成峰期,且有一定的持續作用。如果間斷使用,當停用第6天時產蛋率明顯下降,重新使用后恢復。
  ②預防疾病。使用產酶益生素鴨體活躍,新陳代謝平衡,抵抗能力明顯增強。以往經常發生的腸道疾病有所減少。目前未發現有因腸道感染的死鴨,死亡率由原來的萬分之六降至現在的萬分之二。
  ③軟殼率降低。軟殼率由原來的0.7%降至0.3%以下。
  ④節省飼料。采食量由原來的每只每天115克降至現在的110克,但產蛋量不減反增。
  ⑤鴨舍氨氣濃度降低。鴨舍門窗關閉,氨氣并不太嚴重。
  2.產酶益生素對奶牛夏季產乳量、乳脂率的影響試驗(本試驗報告來自中國農業科學院飼料研究所“863計劃“項目—安全飼料添加劑研制)。
  選取經產、胎次、產奶量基本相似的黑白花奶牛隨機分為2組,每組30頭,試驗組添加0.2%的產酶益生素,精料成本相當,試驗組和對照組都是每天喂3次,連喂30天,每天測定產乳量、乳脂率、蛋白質含量。實驗時間為2002年6月20日-7月20日。
  實驗結果表明,由于炎熱天氣的影響,對照組平均每頭每天的產乳量下降15.6%,而試驗組產乳量下降僅為7.1%,乳脂率在炎熱夏季未出現明顯下降,經過一個月的對比試驗,對照組乳脂率為3.84%,試驗組為4.12%。
  3.產酶益生素對仔豬的飼喂試驗(本試驗報告來自廣西農業大學動物科技學院梁明振博士生導師)
  ①產酶益生素對斷奶仔豬血清總蛋白、血清尿素含量的影響:將48頭杜長大三元雜交斷奶仔豬隨機分成2組,每個組設3個重復,每個重復8頭,試驗期30天。試驗組添加0.2%產酶益生素。
  從血清總蛋白和血清尿素含量情況看,產酶益生素可使仔豬血清的總蛋白含量明顯升高,由對照組的平均50.3g/l升高到55.1g/l,而血清尿素的含量則由對照組的平均3.63mmol/l下降到2.80mmol/l。產酶益生素有利于提高仔豬對蛋白質和氨基酸的利用。
  ②產酶益生素對30kg的健康杜長二元雜交豬增重試驗:
  4.產酶益生素對南美白對蝦的飼喂試驗(本試驗報告來自廈門利洋水產研究所所長 馬家好博士)。
  試驗1、2、3組的餌料中在對照組餌料的基礎上分別添加0.2%、0.4%、0.6%的產酶益生素,餌料的粗蛋白含量為40%;試驗結果表明:對南美白對蝦的體長、個體增重、餌料系數和成活率均有顯著性的提高。
  ●產酶益生素八個作用之七——改善畜產品的外觀和內在品質,有口皆碑
  1.產酶益生素可以明顯改善蛋殼的外觀,蛋殼紅潤光滑,質量好不易破碎,蛋黃大、顏色金黃、蛋清厚稠、蛋味純香。膽固醇低于普通雞蛋,而蛋白質、氨基酸、卵磷脂、卵黃素等均高于普通雞蛋。
  產酶益生素對生長育肥豬肉質及瘦肉率的改善:①胴體色澤改善6.3%;②瘦肉率提高5.8%;③肌肉顏色得到明顯改善;④肌肉pH值差異不大;⑤大理石紋更加明顯;⑥嫩度和香味明顯好于普通豬肉;⑦豬肉持水力提高12%,保鮮時間得以大大延長。
  產酶益生素對雞肉品質的影響:肌肉發育附著良好,胸骨尖基本不顯露(大腿和翼部除外),全身布滿均勻的皮下脂肪,尾部豐盈,整個胴體充盈豐滿。雞腿及胸脯肉持水率得到較為明顯的改善,顏色純正,保鮮時間延長。加熱至熟,肉質鮮嫩,肉味鮮美。
  ●產酶益生素八個作用之八——降低糞便N、P排泄量,降低糞臭素、氨氣等污染氣體的濃度
  1.產酶益生素對畜禽環境污染的改善作用:①應用產酶益生素的動物舍內氨氣、H2S、CO2等有害氣體的濃度明顯降低,據測算可使氨氣濃度下降60%—90%;②畜禽糞便內大腸桿菌等有害菌的數量明顯減少,而芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌等有益菌明顯增加,避免糞便塵埃含菌量對動物的污染;③降低N、P等排泄量,減少N、P對地表水的污染。
  2.產酶益生素對水產動物的水質環境有明顯的調節作用:①可減少水產動物糞便中N、P的排泄量,避免水質過肥,影響水質;②芽孢桿菌等有益菌可降低水中氨氮和亞硝酸鹽,增加溶氧量,起到凈化水質、穩定水質的作用;③產酶益生素中的有益菌可抑制病原微生物在水中的繁殖與滋生,保護水產動物不受水質有害微生物的污染;④應用產酶益生素的情況下可減少換水,甚至不換水,降低換水成本和養殖成本。
  產酶益生素可使中國養殖業遠離過度用藥、抗藥性、疾病、污染、殘留、高成本、低回報的惡性循環老路,而到達綠色、生態、環保、優質、低耗和可持續發展的良性循環道路,從而創造經濟價值、環境價值和社會價值。
作者: guomin    時間: 2010-9-10 22:32
學習了,謝謝分享




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