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畜牧人

標題: 對纖維素酶測定問題求解! [打印本頁]

作者: zzy8604    時間: 2011-2-23 14:43
標題: 對纖維素酶測定問題求解!
本帖最后由 zzy8604 于 2011-2-23 14:48 編輯

Steward(1997)方法測定,以純棉花在瘤胃液中培養(yǎng)48小時(38 )的消失率代表瘤胃液中纖維素酶的相對活力。


在實驗中,我用的是亨氏管保持的厭氧環(huán)境,遇到幾個問題:一、試驗中用的金屬濾布是不是用的特殊的金屬?加入重鉻酸鉀后在沸水浴,溶液的顏色發(fā)生了改變。金屬濾布中的鐵和重鉻酸鉀發(fā)生了反應,還有一股刺鼻的味道。二、用的金屬濾布是不是要稱重,保持單一的變量?三、配制的硫酸亞鐵銨溶液是不是要進行標定?在網(wǎng)上查了下,有的是用重鉻酸鉀標定,那么用公式中的V1就可以算出來。按照國標是用的高錳酸鉀來標定。

具體方法見下(也是參考其他人的):
Steward (1997)方法測定,稱取5毫克脫脂棉于試管中,加入Menke培養(yǎng)1毫升,再加瘤胃液2毫升,混合后在38恒溫水浴振蕩器中厭氧培養(yǎng)2天。取出后放在金屬濾布上(200目)過濾,在依次用水、2mol/L氫氧化鈉、水、2mol/L醋酸、水沖洗。吸干,連同濾布一起移入50毫升錐形瓶中。在錐形瓶中加入0.36mol/L重鉻酸鉀5毫升,沸水浴30分鐘,冷卻后加入15毫升蒸餾水,2鄰苯氨基苯甲酸作指示劑,用0.2mol/L硫酸亞鐵銨滴定到終點(由紫紅色變成藍色),記錄所消耗的毫升數(shù)(V3.用未被瘤胃液作用的5毫克棉花,按同樣操作做空白對照。記錄所消耗的毫升數(shù)(V2.以純棉花在瘤胃液中培養(yǎng)48小時(38)的消失率代表瘤胃液中纖維素酶的相對活力。

纖維素酶的相對活力%=V3-V2/( V1-V2)×100%

其中,V15毫升0.36mol/L重鉻酸鉀所需0.2mol/L硫酸亞鐵銨的滴定毫升數(shù)。

謝謝大家!

作者: 401636839    時間: 2011-2-23 16:26
用3.5 一二硝基水楊酸法測Cx 酶活力,纖維素酶水解纖維素,產(chǎn)生纖維二糖、葡萄糖等還原糖,能將3.5 一二硝基水楊酸中的硝基還原成橙黃色的氨基化合物,利用比法色法測定其還原物的生成量來表示酶的活力
作者: zzy8604    時間: 2011-2-23 18:49
本帖最后由 zzy8604 于 2011-2-25 16:38 編輯

那種方法我也知道  現(xiàn)在就要用這種方法測纖維素酶的活性  不需要分開來測   測總的就可以了   






問過一些老師  都沒有回應,只有到論壇來問下,還是沒人氣啊    {:3_98:}





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