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畜牧人

標(biāo)題: 豬口蹄疫鑒別診斷 [打印本頁]

作者: 小曉 時間: 2011-3-16 15:19
標(biāo)題: 豬口蹄疫鑒別診斷
　　豬口蹄疫的臨診癥狀主要是口、鼻、蹄、乳頭等部位出現(xiàn)水皰。發(fā)皰初期或之前，豬表現(xiàn)跛行。一般情況下主要靠這些臨診癥狀可初步診斷，但表現(xiàn)類似癥狀的還有豬水皰病、豬水皰疹（SVE）、水皰性口炎（VS）.因此，最終確診要靠實(shí)驗(yàn)室診斷。

　　豬口蹄疫病原學(xué)診斷
　　1.病毒分離鑒定病毒分離鑒定的首選病料是未破裂或剛破裂的水皰皮（液）,對新發(fā)病死亡的動物可采取脊髓、扁桃體、淋巴結(jié)組織等。將病料懸液凍融2次，4℃過夜（至少4h）浸毒。以3000r/min離心15min,除菌后取上清接種細(xì)胞。或加1/3體積氯仿混合搖振數(shù)分鐘，以3000r/min離心15min,取上清液裝入試管中，加棉塞，4℃過夜，氯仿?lián)]發(fā)后，接種單層細(xì)胞。每份樣品接種2～4瓶細(xì)胞，另設(shè)對照2～4瓶。37℃靜止培養(yǎng)48～72h.每天觀察記錄，對照細(xì)胞形態(tài)應(yīng)基本正常或少有衰老。接種了樣品的細(xì)胞如出現(xiàn)FMD病毒典型病變（CPE）,要及時取出并置-30℃凍存。無CPE的細(xì)胞瓶要觀察至72h,其后置于-30℃凍存作為第1代細(xì)胞/病毒液再盲傳，至少盲傳3代。凡出現(xiàn)CPE的樣品判定為陽性，無CPE的為陰性。為了進(jìn)一步確定分離病毒的血清型，將出現(xiàn)CPE的細(xì)胞/病毒液用間接夾心ELISA等檢測方法定型。

　　2.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT） CFT是根據(jù)抗原-抗體系統(tǒng)和溶血系統(tǒng)反應(yīng)時均有補(bǔ)體參與的原理設(shè)計(jì)的，以溶血系統(tǒng)作為指示劑，限量補(bǔ)體測定病毒抗原。當(dāng)病毒抗原與血清抗體發(fā)生特異反應(yīng)形成復(fù)合物時，加入的補(bǔ)體因結(jié)合于該復(fù)合物而被消耗，溶血系統(tǒng)中沒有游離補(bǔ)體將不發(fā)生溶血，試驗(yàn)顯示陽性。

　　3.病毒中和試驗(yàn)（VNT）口蹄疫病毒血清型劃分的依據(jù)是型間無交叉免疫保護(hù)性，VNT是型別鑒定的重要方法之一，其檢測結(jié)果可靠，缺點(diǎn)是動用活毒，且用時較長，只能在專門的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，無法推行于普通實(shí)驗(yàn)室。

　　4.反向間接血凝試驗(yàn) FMD反向間接血凝試驗(yàn)是將口蹄疫病毒抗體以化學(xué)方法偶聯(lián)于醛化的綿羊紅細(xì)胞上，當(dāng)貼附于血細(xì)胞上的抗體與游離的抗原相遇時，形成抗原抗體凝集網(wǎng)絡(luò)，綿羊紅細(xì)胞也隨之凝集，出現(xiàn)肉眼可見的紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。反向間接血凝試驗(yàn)可作為FMD病毒抗原型別鑒定的初步方法，該方法簡便、快捷，適合于田間使用。目前該法僅在前蘇聯(lián)國家和我國使用，西方國家很少應(yīng)用，也未列入國際推薦方法。

　　5.反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR） PCR具備實(shí)驗(yàn)診斷所要求的最重要的3個要素：①敏感，可將原樣品放大上百萬倍，使原本少得難以探察到的（Pg級）樣本擴(kuò)增到能在紫外燈下肉眼可見；②特異，核酸片段與引物間的序列互補(bǔ)，使反應(yīng)呈高度特異；③操作簡單快速。RT-PCR檢測的目標(biāo)物是FMD病毒的RNA,通常以病毒材料為被檢樣品，可對各種動物組織和細(xì)胞來源的病毒材料進(jìn)行檢測，擴(kuò)增到的PCR片段測定核苷酸序列后，可以確定所屬的基因型和基因亞型，進(jìn)而追蹤疫源。

　　6.間接夾心ELISA 國際口蹄疫參考試驗(yàn)室建議，檢測口蹄疫病毒血清型應(yīng)優(yōu)先采用間接夾心ELISA,OIE和FAO也一致推薦使用該方法定型診斷。

　　豬口蹄疫抗體檢測
　　通過檢測動物體液中（主要是血清）特異性抗體，可對FMD病毒感染與免疫狀況做出診斷，通常采用病毒中和試驗(yàn)和ELISA方法，這兩種方法也是國際貿(mào)易中指定方法。FMD病毒抗體檢測可用于以下幾個目的：①診斷急性感染，用同一試驗(yàn)檢測急性期和康復(fù)期豬血清樣品，血清抗體陰轉(zhuǎn)陽或抗體滴度急劇上升表示發(fā)生了感染，但診斷的前提是豬無疫苗接種史；②證實(shí)豬未被感染，用于國際貿(mào)易；③在流行病學(xué)調(diào)查中檢測感染情況；④支持疫病撲滅計(jì)劃和后期檢測；⑤接種疫苗后效價(jià)測定。值得提示的是免疫豬有時抗體滴度很低，甚至檢測不到抗體，但攻毒后仍能保護(hù)。
　　豬口蹄疫新診斷技術(shù)進(jìn)展
　　FMD診斷檢測技術(shù)正在不斷地改進(jìn)和創(chuàng)新，已從血清學(xué)診斷技術(shù)領(lǐng)域擴(kuò)展到了分子生物學(xué)診斷技術(shù)領(lǐng)域。這些新技術(shù)的最大優(yōu)點(diǎn)體現(xiàn)在簡便、快速、精確、靈敏以及高通量化。

作者: wgysy 時間: 2011-3-16 15:25
實(shí)驗(yàn)室加臨床癥狀鑒別診斷

作者: xiangrui 時間: 2011-4-9 15:01
實(shí)驗(yàn)室加臨床癥狀鑒別診斷

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