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　　摘要：研究日糧中添加活性乳酸菌微生態中藥發酵制劑-保禽肽對鵪鶉小腸發育，腸道菌群及血清中膽固醇質量濃度的影響。選用1日齡鵪鶉180羽，隨機分成4組，每組3 個重復，每重復15羽。對照組飼喂基礎日糧，試驗組在基礎日糧中分別按比例0.1%、0.2%、0.3%添加活性乳酸菌發酵制劑-保禽肽。結果顯示，保禽肽對鵪鶉小腸發育影響不大（P>0.05） , 隨保禽肽添加量的增加，小腸中大腸桿菌數顯著降低（P<0.05） ,乳酸菌數量顯著增加（P<0.05）。日糧中添加0.2%和0.3%保禽肽可顯著降低血清中膽固醇質量濃度（P<0.05）。由此得出，飼料中添加保禽肽可減少鵪鶉腸道內大腸桿菌數量，增加乳酸菌數量，同時可降低血清膽固醇質量濃度。
　　關鍵詞：微生態、中藥、益生素、發酵、保禽肽、乳酸菌、小腸發育、大腸桿菌、血清膽固醇。
　　保禽肽是利用現代生物技術和先進設備利用工業規模生產的活性乳酸菌對精選中藥進行發酵，提高中藥功效4-28倍，并且改變了其適口性差的缺點。活性乳酸菌發酵制劑-保禽肽具有功效全面、見效快（24小時）、貯藏時間長、使用方便等優點。活性乳酸菌是國際公認的可以飼用的有益菌種，也是中國批準使用的有益菌品種，是一種綠色環保無公害添加劑。目前，有關研究報道主要集中于豬、肉雞、反芻動物方面，對于鵪鶉的作用尚未見報道。本試驗通過在日糧中添加活性乳酸菌發酵制劑來研究活性乳酸菌對鵪鶉小腸發育、腸道菌群及血清膽固醇質量濃度的影響。
　　1 材料與方法
　　1. 1 試驗材料
　　飼用活性乳酸菌發酵制劑-保禽肽（活菌數≥10 億/g ）由哈爾濱中科生物工程有限公司生產。基礎日糧不含任何添加劑、聚糖類、益生素及抗生素，分為0-2周齡和3-5 周齡2 個階段，基礎日糧配方及營養成分見表1。
　　1. 2 試驗動物的選擇與分組
　　將180 羽1 日齡雛鵪鶉隨機分成4 組，每組3 個重復，每重復15 羽。對照組飼喂基礎日糧。試驗組分別在基礎日糧中添加0.1%、0.2%、0.3% 的保禽肽。
　　表1 基礎日糧配方及營養水平

飼料原料/ ( g/ kg)	0-2 周齡	3-5 周齡
玉米	540	510
豆粕	270	260
進口魚粉	100	90
米糠	50	100
骨粉	15	15
多維	2.5	2.5
微量元素	2.5	2.5
賴氨酸( 99%)	6	6
蛋氨酸( 99%)	1	1
食鹽	1	1
石粉	12	12
合計	1000	1000
粗蛋白CP	243.8	229.4
總磷 P	4.0	4.0
總鈣Ca	13.3	12.3
粗纖維	34.3	25.3
賴氨酸	11.2	8.7
蛋氨酸	4.7	3.8

　　注：代謝能分別為12. 05 和11. 98 kJ/g。賴氨酸、蛋氨酸為計算值，其余為實測值。基礎日糧中微量元素添加為Mn 90 mg/kg、Zn 100mg/kg、Cu 7mg/ kg 、I0.3 mg/kg 、Fe 80 mg/kg.

　　1. 3 飼養管理

　　7 d育雛期在育雛箱中飼養， 7 d后采用籠飼養，試驗期35 d。自由采食和飲水，消毒程序按常規方法進行。自然光和日光燈結合，試驗初期全天24 h 光照， 10 d 后逐漸減少日光燈光照時間，直至完全停止，保持室內溫度在33℃以上， 7 d后逐漸降低溫度至室溫。

　　1. 4 樣品采集與制備

　　1. 4. 1 血清采集 35 d 時從每個重復中隨機抽取已停止飼喂12 h以上的空腹鵪鶉4 羽，稱量活體質量，用于計算腸指數。然后采用斷頸放血進行采血，分別裝入離心管中， 3000 r/ min 離心10 min, 分離血清，置-20℃冰箱中保存。

　　1. 4. 2 腸樣采集將35 d屠宰后的鵪鶉每個重復隨機取4 羽，總計48 羽進行解剖，取其腸，測量其空腸、回腸、十二指腸長度（mm） , 并計算腸指數。結扎盲腸口，裝入樣品袋，立即進行微生物培養計數。腸指數= 腸長度/體質量。

　　1. 5 指標測定

　　1. 5. 1 微生物麥康凱培養基、乳酸桿菌選擇性培養基購于北京奧博星生物技術有限責任公司，用常規檢測法進行測定。采用麥康凱培養基37℃有氧培養24 h 進行大腸桿菌菌落計數；采用乳酸桿菌選擇性培養基37℃厭氧培養48 h進行乳酸桿菌菌落計數。根據菌落形態、顏色和革蘭氏染色鏡檢結果進行鑒別，用每克腸道內容物中細菌個數的常用對數來表示。

　　1. 5. 2 血清膽固醇取潔凈干燥試管5支，編號，依次加入標準膽固醇應用液0、0.1、0.2、0.3、0.4 mL, 再依次加入醋酸液使各管體積均為0.4mL, 然后，每管加入鄰苯二甲醛試劑0.2 mL, 蒸餾水0.01 mL, 混合酸4 mL, 混勻，靜置10 min,于550 nm 波長處比色測定，以總膽固醇質量濃度為橫坐標，光密度為縱坐標，繪制標準曲線。

　　取3 支清潔干燥試管編號， 1 支為對照，其余2 支為樣品，分別加入稀釋的血清樣品0、0.4、0.4mL, 各加入鄰苯二甲醛0.2 mL, 混合酸4 mL, 另外在對照管中加入0. 4 mL 冰醋酸，然后與標準曲線同時比色測定。其中量取0.1 mL 稀釋的未知血清樣品，再用冰醋酸稀釋到4 mL 制成分析樣品。混勻，靜置10 min, 在550 nm 處比色，從標準曲線查出樣品的膽固醇質量濃度。

　　1. 6 數據處理

　　采用SPSS15.0 統計分析軟件進行數據統計分析，采用單因素方差分析（One-Way ANO-VA），并進行Duncan?s 多重比較，取P <0.05 作為差異顯著性的臨界值，數據以“平均數± 標準誤”表示。

　　2 結果與分析

　　2. 1 鵪鶉腸長度及腸指數

　　從表2 可以看出， 0.3%保禽肽組鵪鶉空腸長度顯著高于0.1%保禽肽（ P<0.05） ; 但各水平保禽肽組鵪鶉空腸長度與對照組相比差異不顯著（P>0.05）。活性干酵母對鵪鶉回腸、十二指腸長度沒有顯著影響（P>0.05）。小腸長度隨添加量的增加總體有增長的趨勢，但未達到統計學顯著水平（P>0.05）。日糧添加保禽肽對空回比沒有顯著影響（P>0.05）。0.2%保禽肽組鵪鶉空腸指數顯著高于0.1%保禽肽組（P< 0.05） ; 但各水平保禽肽組鵪鶉空腸指數與對照組相比差異不顯著（P>0.05）。保禽肽對鵪鶉回腸、十二指腸、小腸腸指數沒有顯著影響（ P>0.05）。

　　表2 保禽肽對鵪鶉空腸、回腸、十二指腸、小腸長度及腸指數的影響

項目	保禽肽添加量(%)
項目	0(CK)	0.1	0.2	0.3
空腸長度/ cm	26.0±3.60ab	24.92±2.78b	27.98±3.25a	25.65±3.13a
回腸長度/ cm	25.19±3.68	26.13±3.70	25.48±3.42	26.85±5.07
十二指腸長度/ cm	12.42±1.27	12.77±1.63	12.57±1.00	12.67±1.30
空回比	1.05±0.19	0.97±0.19	1.11±0.12	0.98±0.17
小腸長度/ cm	63.64±5.70	63.8±4.922	66.39±6.19	65.07±6.21
空腸指數	1.41±0.18ab	1.25±0.11b	1.45±0.15a	1.31±0.09ab
回腸指數	1.36±0.08	1.32±0.12	1.32±0.17	1.37±0.09
十二指腸指數	0.67±0.13	0.64±0.09	0.65±0.08	0.65±0.10
小腸指數	3.44±1.24	3.21±1.32	3.44±1.10	3.32±1.21

　　注：同行數據后不同小寫字母表示差異顯著（ P< 0. 05）。

　　2. 2 鵪鶉腸道菌群含量

　　從表3 可看出，保禽肽對鵪鶉腸道內大腸桿菌的菌群有較強抑制作用，試驗組鵪鶉腸道內大腸桿菌顯著低于對照組（P<0.05） ,而且隨添加量增加，作用增強，0.2%和0.3%保禽肽組鵪鶉腸道內大腸桿菌顯著低于0.1%保禽肽組（P<0.05）。日糧添加保禽肽對鵪鶉腸道內乳酸菌有促進作用，試驗組鵪鶉腸道內乳酸菌顯著高于對照組（P<0.05） , 而且隨添加量增加，作用增強，0.2%和0.3%保禽肽組鵪鶉腸道內乳酸菌顯著高于0.1%活性酵母組（P<0.05）。

　　表3 保禽肽對鵪鶉腸道內大腸桿菌、乳酸菌及血清膽固醇質量濃度的影響

保禽肽(%)	每克腸道內容物中細菌數量的常用對數值
保禽肽(%)	大腸桿菌	乳酸菌	膽固醇質量濃度/(g/L)
0(CK)	8.20±0.31a	6.75±0.09c	0.0416±0.0014a
0.1	4.88±0.20c	17.09±0.19a	0.0405±0.0014a
0.2	2.61±0.23c	27.30±0.24a	0.0381±0.0021b
0.3	2.45±0.20c	37.39±0.18a	0.0371±0.0013b

　　注：同行數據后不同小寫字母表示差異顯著（ P< 0. 05）。

　　2. 3 鵪鶉血清膽固醇質量濃度

　　從表3 可以看出，隨日糧活性保禽肽添加量的增加鵪鶉血清中膽固醇質量濃度減少，且0.2%和0.3%保禽肽組血清膽固醇質量濃度顯著低于對照組和0.1%保禽肽組（P<0.05）。

　　3 結論與討論

　　3. 1 保禽肽對鵪鶉小腸發育的影響

　　小腸作為動物體吸收營養物質的主要場所，其長度直接影響營養物質吸收，各種營養物質在小腸內吸收的部位不盡相同，如糖類、蛋白質和脂肪的消化產物大部分是在十二指腸和空腸吸收；鐵、鎂、鈣在小腸上段吸收；而維生素、膽鹽則在回腸被吸收。各段腸指數也側面反映了各段腸道的發育狀況。本試驗研究表明，保禽肽對鵪鶉小腸不同段（空腸、回腸、十二指腸）的生長發育雖然有一定的促進作用，但影響程度不盡一致，保禽肽對空腸發育影響最大，0.2%保禽肽組鵪鶉空腸長度、空腸指數顯著高于0.1%保禽肽組。說明隨保禽肽量的增加對空腸發育的刺激作用較其他小腸段強。盡管隨日糧保禽肽添加量的增加對各組間鵪鶉空腸長度、空腸指數有顯著影響，但日糧添加保禽肽組與對照組相比，差異不顯著，而且日糧添加保禽肽對鵪鶉回腸、十二指腸及整個小腸的長度、腸指數未達到顯著差異水平。各組間空回比也未達到顯著差異水平。由于腸道長度增長可增加食物在腸道內的吸收面積，利于食物在腸道內的消化吸收，從而促進動物生長。這說明保禽肽促進禽類生長，提高禽類生長性能的原因是由于保禽肽改善了腸道環境，因為從本試驗來看保禽肽對促進腸道發育影響不大。

　　3. 2 活性干酵母對鵪鶉腸道內菌群的影響

　　小腸不僅是營養物質吸收和消化的主要場所，也與腸道內菌群的平衡與宿主的生產性能有重要關系。日糧添加保禽肽，鵪鶉腸道內大腸桿菌數量明顯減少，而乳酸桿菌數量顯著增加，保禽肽組與對照組相比，保禽肽組在降低大腸桿菌和提高乳酸菌數量方面效果很明顯。這說明保禽肽對腸道微生態具有調節作用。乳酸菌屬于厭氧菌，在無氧條件能繁殖，在消化道內大量繁殖，并大量產酸，從而抑制了大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌群的生長繁殖，促進雙歧桿菌、乳酸菌等有益菌的繁殖。適量添加保禽肽可以改善胃腸環境和菌群結構，促進整個腸道乳酸菌、芽孢桿菌、雙歧桿菌等有益菌的繁殖，提高其數量及活力，從而促進動物對營養物質的消化、吸收和利用。

　　3. 3 保禽肽對鵪鶉血清膽固醇質量濃度的影響

　　本試驗采用保禽肽飼喂鵪鶉可降低血清中膽固醇的質量濃度。這可能是由于添加保禽肽提高了腸道內乳酸菌的數量。膽固醇可經肝臟催化形成膽酸，再同甘氨酸或牛磺酸結合形成可溶于水的脫氧甘膽酸鹽或牛磺膽酸鹽等膽汁鹽，通過糞便排出體外。腸內一些乳酸菌等微生物產生的膽汁鹽水解酶催化膽汁鹽產生脫甘氨酸或脫牛磺酸的不溶于水的去結合型膽汁鹽，這種膽汁鹽可同血清中膽固醇發生共沉淀作用排出體外。除此之外，飼喂保禽肽降低鵪鶉血清中膽固醇質量濃度的另一個原因可能是保禽肽含有β-葡聚糖， β-葡聚糖妨礙膳食膽固醇的吸收，抑制膽酸鹽的再吸收，增加膽固醇的排出量從而降低了血漿膽固醇的質量濃度。

畜牧人