3株乳酸菌體外拮抗致病性大腸桿菌試驗

中科Chock

摘要: 為研究乳酸菌體外對大腸桿菌的拮抗作用, 將3 株乳酸菌與2株大腸桿菌體外分別共培養(yǎng)觀察拮抗情況。結(jié)果顯示, 等量同時間接種, 96h內(nèi)乳桿菌就將大腸桿菌全部抑殺; 乳酸菌比大腸桿菌早24 h 接種, 72 h內(nèi)將大腸桿菌全部抑殺; 大腸桿菌比乳酸菌早24 h 接種, 在120 h 內(nèi)也可全部被抑殺。3 株乳酸菌按一定比例復(fù)合, 會使拮抗的效果增強(qiáng)。

關(guān)鍵詞: 微生態(tài)、中藥、益生素、發(fā)酵、乳酸桿菌; 大腸桿菌; 拮抗作用

    畜禽大腸桿菌病是畜牧業(yè)生產(chǎn)中常見傳染病之一, 對集約化養(yǎng)殖業(yè)危害極大。生產(chǎn)上由于大腸桿菌耐藥情況非常嚴(yán)重,給臨床治療此病帶來困難 。乳酸桿菌是畜禽腸道內(nèi)主要的正常菌群, 具有抗感染、免疫刺激等許多生理功能。本試驗研究3株乳酸菌體外對大腸桿菌的拮抗作用, 以期為乳酸菌用于預(yù)防治療大腸桿菌病提供理論依據(jù)。

1   材料與方法

1.1 試驗材料

    菌種: 乳酸乳桿菌( Lactobacillus lactis, L.l)、嗜酸乳桿菌( Lactobacillus acidophilus, L.a )、乳酸鏈球菌( Strep toccuelactis, S.l) 分離自健康雞腸道; 大腸桿菌1701株由發(fā)病雞場分離得到; 大腸桿菌TM 128株由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院惠贈。

    培養(yǎng)基: 改良MRS液體培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、普通肉湯培養(yǎng)基。

1.2  試驗方法

    將乳酸乳桿菌、乳酸鏈球菌、嗜酸乳桿菌、大腸桿菌分別在各自適宜的培養(yǎng)基內(nèi)繁殖, 傳1代。取20 h培養(yǎng)物, 調(diào)整菌的濃度為10^7 CFU /mL。

    取含改良MRS液體培養(yǎng)基試管4 支, 分別接種乳酸乳桿菌、嗜酸乳桿菌、乳酸鏈球菌及三者的混合物( 50:50 :2) 100uL, 同時再分別接種大腸桿菌1701或TM 128各100 uL; 設(shè)大腸桿菌單獨培養(yǎng)管作對照, 置恒溫培養(yǎng)箱37 培養(yǎng)。取培養(yǎng)24、48、72、96、120 h的培養(yǎng)液倒普通瓊脂平板, 檢查大腸桿菌存活情況, 記錄含活菌數(shù)。

    取含改良MRS液體培養(yǎng)基試管4 支, 分別接種乳酸乳桿菌、嗜酸乳桿菌、乳酸鏈球菌及三者的混合物( 50:50: 2) 100 uL, 37 培養(yǎng)24 h后, 分別接種大腸桿菌各100 uL, 置恒溫培養(yǎng)箱37 再培養(yǎng); 取培養(yǎng)24、48、72、96、120 h的培養(yǎng)液倒普通瓊脂平板, 檢查拮抗情況。

    取含改良MRS液體培養(yǎng)基試管4支, 接種大腸桿菌各100 uL, 37 培養(yǎng)24 h后, 分別接種乳酸乳桿菌、嗜酸乳桿菌、乳酸鏈球菌及三者的混合物( 50:50:2) 100 uL, 37 ℃再培養(yǎng); 取培養(yǎng)24、48、72、96、120 h的培養(yǎng)液倒普通瓊脂平板,檢查拮抗情況。

    分別取上述各時間點培養(yǎng)物0.5 mL, 用滅菌生理鹽水做連續(xù)稀釋( 10^-1－ 10^-10 ) 后, 用滴注法點種于事先制作并烘

干表面水分的普通瓊脂平板上, 每滴100 uL, 每個稀釋度平

行3滴。經(jīng)37℃ 24 h培養(yǎng)后分別計數(shù)大腸桿菌菌落數(shù)。