粉狀飼料中小麥粉碎粒度對肉雞生產(chǎn)性能、消化器官發(fā)育和腸道健康的影響

2018-5-30 09:21| 發(fā)布者: IMCTT| 查看: 2423| 評論: 1

摘要: 玉米作為傳統(tǒng)的能量飼料廣泛用于畜牧生產(chǎn)，近年來由于供需關(guān)系緊張，玉米的價(jià)格不斷上漲，從而導(dǎo)致飼料成本不斷增加。

　　導(dǎo)讀

　　玉米作為傳統(tǒng)的能量飼料廣泛用于畜牧生產(chǎn)，近年來由于供需關(guān)系緊張，玉米的價(jià)格不斷上漲，從而導(dǎo)致飼料成本不斷增加。充分利用和開發(fā)現(xiàn)有飼料資源對畜牧生產(chǎn)具有重要的意義。小麥能量略低于玉米，但其粗蛋白質(zhì)、氨基酸和非淀粉多糖等含量高于玉米，目前，小麥型飼糧已在生產(chǎn)中廣泛使用。當(dāng)小麥型飼糧中非淀粉多糖的問題被酶制劑減弱后，人們更關(guān)注如何通過飼料加工技術(shù)科學(xué)合理的使用小麥，而適宜的粉碎粒度是最關(guān)鍵的問題之一。研究表明，粉碎粒度是蛋雞養(yǎng)殖能耗最大的部分'也與動物生產(chǎn)性能和腸道健康有很大的關(guān)系。粉碎粒度過大，在消化道內(nèi)的消化率低，動物排泄的氮、磷等增加，污染環(huán)境的同時(shí)造成資源的極大浪費(fèi);而粒度過細(xì)，容易造成動物胃腸道疾病，損害機(jī)體的健康。有關(guān)粉碎粒度對家禽影響的研究主要集中在玉米的粉碎粒度上，關(guān)于小麥粉碎粒度對家禽的影響研究相對較少。本研究主要考察在添加木聚糖酶的情況下，不同小麥粉碎粒度對肉雞生產(chǎn)性能、養(yǎng)分利用率、消化器官發(fā)育及腸道健康的影響，為小麥型飼糧在肉雞中的合理應(yīng)用提供參考。

　　1材料與方法

　　1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)試

　　驗(yàn)采用單因子設(shè)計(jì)，小麥通過5種孔徑的篩片粉碎成2、4、6、8、10mm共5種粉碎粒度。試驗(yàn)為5個(gè)處理，每個(gè)處理7個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)11只雞，共選用385只AA肉公雞。試驗(yàn)期42d，分1~21d和22~42d兩個(gè)階段。

　　1.2 試驗(yàn)飼糧

　　試驗(yàn)采用小麥-豆粕型飼糧，粉狀。飼糧營養(yǎng)水平參照中國雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(2004)肉用仔雞營養(yǎng)需要結(jié)合生產(chǎn)中實(shí)際飼糧營養(yǎng)水平設(shè)定。飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

　　1.3 飼養(yǎng)管理

　　試驗(yàn)在四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所試驗(yàn)場進(jìn)行。試驗(yàn)肉雞均采用網(wǎng)上平養(yǎng)(高0.5mx寬1mx長1m)。試驗(yàn)前清洗雞舍、籠具、料盤、料桶和飲水設(shè)備，然后用福爾馬林和高錳酸鉀（每立方米加30mL福爾馬林，15g高錳酸鉀)對其熏蒸48h，開窗敞5d后正式試驗(yàn)。人雛前24h將雞舍升溫至32~35℃，此后溫度每周降低2~3℃，直至保持在22~24℃為止。采用連續(xù)光照、自然通風(fēng)、自由采食和自由飲水的管理方式。定期打掃圈舍衛(wèi)生，常規(guī)免疫。

　　1.4 代謝試驗(yàn)

　　在試驗(yàn)第18~21天和第39~42天進(jìn)行代謝試驗(yàn)，代謝室預(yù)先用紅外溫控?zé)羯胶驮囼?yàn)飼養(yǎng)圈相同溫度，分別在15d和36d 20:00,每個(gè)重復(fù)選一只接近均重的健康肉雞，轉(zhuǎn)移至代謝籠，預(yù)飼2d并記錄預(yù)飼期間的采食量。在17d 與38d 20:00分別斷料12h，自由飲水到次日8:00。稱取代謝試驗(yàn)所需飼料，代謝試驗(yàn)分別在18d 8:00至21d 8:00和39d 8:00至42d 8:00，自由采食和飲水，全收糞法連續(xù)3d收集糞便，隨排隨收，小心去除羽毛、皮屑和雜物，計(jì)算損失料。排泄物鮮樣于-20℃保存，最后將收集到的排泄物混合均勻，65℃烘干，24h回潮，粉碎并過0.245mm x 0.245mm篩，以重復(fù)為單位用封口袋封裝，-20℃保存待測。

　　1.5 測定指標(biāo)及方法

　　1.5.1 生產(chǎn)性能

　　分別于試驗(yàn)第22天和第43天提前12h斷料，以重復(fù)為單位稱重，空腹稱量肉雞體重和剩余料重，計(jì)算階段體增重(BWG)，階段采食量(FI)和料重比(F/G)。

　　1.5.2 養(yǎng)分利用率測定

　　飼糧和排泄物中的干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、能量含量，并計(jì)算養(yǎng)分表觀利用率和表觀代謝能(AME)，方法參照文獻(xiàn)。

　　養(yǎng)分表觀利用率(％)=100-(糞中養(yǎng)分含量伊風(fēng)干糞樣重量)/(飼糧養(yǎng)分含量伊采食量)伊100。AME=(食人總能-排泄物總能)/食人飼糧干物質(zhì)量

　　1.5.3 消化器官發(fā)育

　　在試驗(yàn)第22天和第43天時(shí)，每個(gè)重復(fù)選擇一只接近平均體重的雞進(jìn)行屠宰，迅速分離各組織器官。稱取肝臟、胰臟、腺胃、肌胃的重量。計(jì)算消化器官指數(shù)。

　　1.5.4 空腸腸道形態(tài)

　　雞屠宰后，分離空腸，在空腸中段處理剪下給1cm的腸段，用0.9%c的生理鹽水洗凈后放人10%c甲醛固定液中固定。將固定好的空腸修理后用乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋進(jìn)行切片，然后用蘇木精-伊紅(HE)染色、光學(xué)顯微鏡下觀察。測量空腸絨毛高度、隱窩深度，腸黏膜厚度，并計(jì)算絨隱比。

　　1.5.5 空腸杯狀細(xì)胞數(shù)

　　取4豫多聚甲醛固定的空腸組織樣品，用Moxvry(AB-PAS)染色法，對杯狀細(xì)胞進(jìn)行染色。具體方法參考操作步驟簡述如下:切片脫蠟至水后，用3%醋酸液、阿利新蘭液和3%醋酸液處理后，蒸餾水洗，再用0.5%過碘酸氧化后水洗，經(jīng)schiff液染色后水洗，脫水、二甲苯透明、樹脂膠封片。在400倍的視野下隨機(jī)選10個(gè)視野，用Image Plus 5.0圖像分析軟件統(tǒng)計(jì)光密度值(I0D)，將10個(gè)視野I0D值的平均值作為該張切片的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

　　1.5.6 空腸黏膜緊密連接蛋白基因相對表達(dá)量

　　使用總RNA試劑盒（Takara)RNAiso試劑盒(Takara,中國大連）。cDNA的合成采用primeScript RT試劑盒（Takara,中國大連），real-time PCR采用SYBR Premix ExTaq(Takara，中國大連)。采用Applied Biosystems 7900 HT Real Time PCR系統(tǒng)(Applied Biosystems，CA)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，具體反應(yīng)條件參考試劑盒說明書。基因表達(dá)水平的計(jì)算參考K.J.Livak和T.D.Schmittgen文獻(xiàn)中的方法。采用384孔板，每個(gè)樣品測定3個(gè)平行。基因相對表達(dá)量采用2-△△CT法分析，內(nèi)參基因選用GADPH。以6mm的小麥粉碎粒度為對照組，引物設(shè)計(jì)使用primer3.0軟件，測定肉雞空腸黏月旲緊密連接基因：Occludin 、ZO-1、Claudinl mRNA的相對表達(dá)豐度。基因引物序列如表2所示。

　　1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

　　采用SPSS21.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)及線性（linear)、二次（quadratic)分析，差異顯著者采用LSD法多重比較。分析結(jié)果用平均值與SEM表示，P<0.05表示差異顯著。

　　2結(jié)果與分析

　　2.1 小麥粉碎粒度

　　錘片粉碎機(jī)分別用孔徑為2、4、6、8、10mm的篩片進(jìn)行粉碎，對應(yīng)篩片粉碎小麥實(shí)測幾何平均粒度分別為:460、580、760、880、1100μm;具體粒度分布見圖1。

　　2.2 小麥粉碎粒度對肉雞生產(chǎn)性能的影響

　　從表3可知，小麥粉碎粒度對肉雞1〜21d、22~42d和1〜42d平均階段增重(BWG)和平均階段采食量(FI)均無顯著影響(P>0.05);當(dāng)小麥粉碎粒度大于8和10mm時(shí)，肉雞的料重比顯著高于其他處理組(P<0.05)，而2、4、6mm粉碎粒度組料重比差異不顯著(P>0.05)。

　　2.3 小麥粉碎粒度對肉雞養(yǎng)分利用率的影響

　　從表4可知，小麥粉碎粒度對肉雞21d和42d養(yǎng)分利用率和AME均沒有顯著影響(P>0.05)。但從數(shù)值上可以看到，隨著小麥粉碎粒度的增加，粗蛋白質(zhì)的表觀利用率呈增加趨勢，而干物質(zhì)的表觀利用率和AME卻呈降低趨勢。

　　2.4小麥粉碎粒度對肉雞器官發(fā)育的影響

　　從表5可以看出，21d時(shí)，肉雞肌胃指數(shù)隨著小麥粉碎粒度的增加而增加，當(dāng)小麥粉碎粒度為10mm時(shí)，肌胃指數(shù)顯著高于2、4mm組(P<0.05)，且呈顯著的線性相關(guān);42d時(shí)，小麥粒度為6mm組肝臟指數(shù)顯著高于2、4mm組(P<0.05),與8、10mm組差異不顯著(P>0.05),呈現(xiàn)出顯著的線性相關(guān)。其余各指標(biāo)各處理組間差異不顯著(P>0.05)。

　　2.5 小麥粉碎粒度對肉雞空腸形態(tài)的影響

　　從表6中可以看出，小麥粉碎粒度對肉雞21d和42d的空腸腸道形態(tài)存在顯著的影響(P<0.05)。21d時(shí)，隨著小麥粉碎粒度的增加，絨毛高度、黏膜厚度和絨隱比顯著增加(P<0.05)，且呈顯著的線性相關(guān);42d時(shí)，10mm組絨毛高度顯著增加(P<0.05)，而6mm組隱窩深度顯著降低(P<0.05),6mm組絨隱比顯著高于10mm組(P<0.05)。

　　2.6 小麥粉碎粒度對肉雞空腸杯狀細(xì)胞光密度值的影響

　　從表7可以看出，隨著小麥粉碎粒度的增加，肉雞空腸杯狀細(xì)胞光密度值顯著增加(P<0.05)。21d時(shí)，4、6、8mm組顯著高于2和10mm組（P<0.05),呈顯著的二次曲線關(guān)系；而42d時(shí)，8、10mm組杯狀細(xì)胞光密度值顯著高于2、4mm組(P<0.05)，與6mm組差異不顯著(P>0.05)，呈顯著的線性相關(guān)。

　　2.7 小麥粉碎粒度對肉雞空腸黏膜緊密連接蛋白基因表達(dá)的影響

　　由表8可知，隨著小麥粉碎粒度的增加，21d時(shí)，肉雞空腸黏膜和claudinl的mRNA表達(dá)量也相應(yīng)提高，且10mm組claudinl的mRNA表達(dá)量顯著高于2mm組(P<0.05),呈線性增加(P<0.05);但42d時(shí)，各組間沒有顯著差異(P>0.05)，從數(shù)值上看，其表達(dá)量有一定的降低。

　　3討論

　　3.1 小麥粉碎粒度對肉雞生產(chǎn)性能和養(yǎng)分利用率的影響

　　本試驗(yàn)結(jié)果表明，在粉狀伺糧中，小麥粉碎粒度為460、580、760、880、1100 μm時(shí)，對肉雞BWG和FI均無顯著影響。S.Naderinejad等研究表明，粉料中，玉米粉碎粒度對肉雞FI，BWG和F/G沒有顯著影響。C.Jacobs等研究了4個(gè)玉米粉碎粒度(GMD557、858、1210和1387μm)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)粉料中玉米粉碎粒度對肉雞生產(chǎn)性能沒有顯著影響。孟艷莉等研究表明，在蛋雛雞飼糧中小麥粉碎粒度為2、和6mm時(shí)，對蛋雛雞的體重、采食量、日增重、料重比等生產(chǎn)性能指標(biāo)均無顯著影響。S.Yasar使用過4 、5 、6 、7 mm篩的小麥及整粒小麥，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，7mm小麥組肉雞21d生產(chǎn)性能最佳，而4 mm小麥組最差，42 d時(shí)，各組間生產(chǎn)性能無顯著差異。本試驗(yàn)結(jié)果與前人的研究結(jié)果基本一致。但也有不一致的報(bào)道，I.Nir等發(fā)現(xiàn)大粒度飼喂時(shí)有較高的FI和BWG(粒度為897、996μm和1332μm)。本試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)小麥粉碎粒度為880、100μm時(shí)，肉雞的F/G顯著增加，且F/G隨粉碎粒度的增大有線性遞增和二次曲線關(guān)系，這和XuY.等的研究一致，XuY.等報(bào)道，粉料中6個(gè)粉碎粒度(420，430，470，509，542和640μm)，F(xiàn)/G隨粉碎粒度的增大呈線性遞增。然而A.M.Amerah等得到相反結(jié)果，即粗粉碎相對中等粉碎組的F/G低。導(dǎo)致原料粉碎粒度對生產(chǎn)性能研究結(jié)果不一致的原因可能與試驗(yàn)動物日齡，不同試驗(yàn)設(shè)定的原料幾何平均粒度以及不同谷物的特性有關(guān)。

　　通常情況下，與粗粒度飼糧相比，細(xì)粉碎飼糧與消化酶的接觸面積更大，更有利于營養(yǎng)物質(zhì)的消化。但家禽由于有肌胃的存在，粗顆粒日糧通過肌胃的速率降低。延長了消化酶與食糜的作用時(shí)間，增加酶在食糜中的滲透性，從而提高能量和其他營養(yǎng)物質(zhì)的利用率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，小麥粉碎粒度對肉雞養(yǎng)分利用率和AME均沒有顯著影響，隨著小麥粉碎粒度的增加，粗蛋白質(zhì)的表觀利用率呈先增加后降低的趨勢。這與孟艷莉等的研究結(jié)果基本一致，孟艷莉等發(fā)現(xiàn)中等粒度組(4mm)的蛋白質(zhì)消化率顯著高于細(xì)粒度組(2mm)和粗粒度組(6mm)。說明粗粉碎粒度小麥有利于粗蛋白質(zhì)的消化，但不是越粗越好。

　　3.2 小麥粉碎粒度對肉雞消化器官指數(shù)和空腸形態(tài)的影響

　　本試驗(yàn)結(jié)果表明，肉雞飼喂粉料時(shí)，肌胃指數(shù)隨小麥粉碎粒度的增大而增大，這與前人的研究一致。對家禽而言，肌胃能夠?qū)︼暳线M(jìn)行充分的研磨，使粗顆粒飼料選擇性地留在肌胃中直到被研磨到某一允許的尺寸后再進(jìn)人后段消化道，以利于后段消化道的消化吸收。而對于細(xì)顆粒飼料，肌胃的研磨作用較少，能夠較快地通過肌胃進(jìn)人后段消化道。所以粗粉碎對于維持肉雞肌胃健康具有重要作用。

　　空腸是營養(yǎng)物質(zhì)吸收的重要部位，其發(fā)育狀況直接影響營養(yǎng)代謝和生長性能。本試驗(yàn)結(jié)果表明，小麥粉碎粒度對肉雞空腸腸道形態(tài)存在顯著的影響。21 d 時(shí)，隨著小麥粉碎粒度的增加，絨毛高度、黏膜厚度和絨隱比(V/C)顯著增加，且呈顯著的線性相關(guān);42 d 時(shí)，10 mm組絨毛高度顯著增加，而6mm組隱窩深度顯著降低，6 mm組絨隱比顯著高于10 mm組。張春蘭等在蛋雞上的研究發(fā)現(xiàn)，十二指腸絨毛高度、V/C 值和腸黏膜厚度隨玉米粒度的增加而增加，隱窩深度降低。田玉民等發(fā)現(xiàn)，飼喂粗粉碎粒度的肉雞空腸絨毛顯著較高。這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。可能是由于粒度大的飼糧在消化道中流通時(shí)間較長，對腸絨毛及腸腺的刺激作用導(dǎo)致的。也可能與腸道微生物的變化有關(guān)，有研究表明，日糧的粉碎粒度對胃腸道微生物的發(fā)酵有影響，D.G.Valencia等研究發(fā)現(xiàn)，飼料粉碎越細(xì)，與消化道內(nèi)微生物的接觸面積越大，對有害微生物的生長越有利。在肉仔雞上的研究也發(fā)現(xiàn)，飼喂粗顆粒粉狀日糧，盲腸和直腸內(nèi)的乳酸菌群數(shù)量增加，而細(xì)顆粒時(shí)乳酸菌數(shù)量最少。腸道中有害微生物的增加會破壞腸道結(jié)構(gòu)的黏膜層導(dǎo)致腸絨毛受損，進(jìn)而導(dǎo)致腸道形態(tài)的變化。但也有不一致的報(bào)道，I.Rohe等研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)粉碎組的絨毛均高于粗粉碎;A.M.Amerah等報(bào)道，玉米和小麥粉碎粒度對肉雞的十二指腸絨毛高度、隱窩深度及上皮黏膜厚率均無顯著性影響。造成這種不一致的結(jié)果可能與試驗(yàn)階段、飼糧類型、實(shí)際粉碎粒度和消化道部位有關(guān)。

　　3.3 小麥粉碎粒度對肉雞空腸杯狀細(xì)胞和緊密連接蛋白基因表達(dá)的影響

　　杯狀細(xì)胞分泌黏液黏附于上皮表面，有潤滑和保護(hù)腸道的作用。杯狀細(xì)胞的增多能更好地保護(hù)小腸黏膜，維持上皮細(xì)胞的完整性。本試驗(yàn)中，隨著小麥粉碎粒度的增加，肉雞空腸杯狀細(xì)胞光密度值顯著增加，且呈顯著的二次曲線關(guān)系。說明小麥粉碎粒度能促進(jìn)空腸黏膜杯狀細(xì)胞數(shù)量的增加，但不是粒度越大越好。而關(guān)于粉碎粒度對杯狀細(xì)胞的影響研究未見報(bào)道。分析飼料粉碎粒度導(dǎo)致杯狀細(xì)胞數(shù)量變化的原因可能與粉碎粒度對腸道微生物的影響有關(guān)，當(dāng)飼料粉碎粒度較細(xì)時(shí)，引起腸道有害微生物數(shù)量的增加導(dǎo)致腸道黏膜損傷，而腸黏膜損傷時(shí)杯狀細(xì)胞伴隨絨毛脫落而丟失，導(dǎo)致杯狀細(xì)胞數(shù)量的下降。

　　腸道四大屏障中，機(jī)械屏障是腸黏膜屏障中最重要的一環(huán)。由上皮細(xì)胞和它們之間的連接組成，細(xì)胞間連接生物在外環(huán)境的穩(wěn)定性中發(fā)揮重要作用，而緊密連接(TJ)是細(xì)胞連接最重要的組成成分。緊密連接蛋白的基因表達(dá)量是衡量腸上皮屏障功能的重要指標(biāo)。ZhaoJ. 等發(fā)現(xiàn)Occludin和Claudin能夠通過影響TJ通透性維持來調(diào)節(jié)腸道物理屏障功能。本試驗(yàn)研究表明，21d肉雞空腸ZO-1、occludin和claudinl mRNA相對表達(dá)量均隨小麥粉碎粒度的增大呈線性遞增。42 d ，ZO-1、occludin 和claudinl相對表達(dá)量均隨粉碎粒度的增大呈線性遞減。說明在1~21d 增大粉碎粒度有利于維持空腸黏膜機(jī)械屏障的完整性，利于腸道健康，但不是越大越好。關(guān)于飼料粉碎粒度對腸道緊密連接蛋白基因表達(dá)的研究未見報(bào)道。有研究表明，腸道上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的基因表達(dá)量與腸道細(xì)菌的代謝產(chǎn)物有關(guān)。有害微生物黏附于腸道上皮細(xì)胞，會引起腸黏膜功能紊亂，TJ屏障被破壞。飼料粉碎粒度可能通過影響腸道微生物進(jìn)而影響腸道黏膜緊密連接蛋白的基因表達(dá)，但其具體作用機(jī)理還需進(jìn)一步研究。至于21 d 和42 d 緊密連接mRNA相對表達(dá)量隨小麥粉碎粒度的增大呈現(xiàn)不同的變化趨勢的原因也有待進(jìn)一步研究。

　　4結(jié) 論

　　①在粉狀飼糧中，小麥粉碎粒度對肉雞增重和采食量沒有顯著影響，但隨小麥粉碎粒度的增加，料重比顯著增加，以中細(xì)粉碎較為適宜。

　　②小麥粉碎粒度增加，可促進(jìn)肌胃發(fā)育和空腸形態(tài)改善；增加空腸杯狀細(xì)胞數(shù)量和空腸黏膜claudin mRNA的表達(dá)，以中粗粉碎效果更好。綜上所述，肉雞粉狀詞糧中，小麥通過6 mm篩片粉碎時(shí)較適宜。

　　注：本文由生物飼料開發(fā)國家工程研究中心（BFC）小編整理發(fā)布，如有任何建議或意見及投稿等，請您加小編微信（13260429991）交流互動。
　　參考文獻(xiàn)略
　　責(zé)編：馬維軍；審閱：陳達(dá) 博士
　　來源：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)；作者：鐘麗梅，李東東，張克英，曾秋鳳，白世平，王建萍，丁雪梅