飼糧添加蒙脫石和枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋雞盲腸菌群和腸道通透性的影響

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　　摘要: 本試驗旨在研究飼糧添加蒙脫石（MMT）和枯草芽孢桿菌（BS）對產(chǎn)蛋雞盲腸菌群和腸道通透性的影響。采用2×2雙因子隨機(jī)設(shè)計，選擇360只29周齡健康的羅曼粉殼蛋雞，隨機(jī)分為4組（每組6個重復(fù)，每個重復(fù)15只），分別飼喂基礎(chǔ)飼糧（對照組）、基礎(chǔ)飼糧+0.5 g/kg MMT（MMT組）、基礎(chǔ)飼糧+5×108 CFU/kg BS（BS組）、基礎(chǔ)飼糧+0.5 g/kg MMT+5×108 CFU/kg BS（MMT+BS組）。預(yù)試期7 d，正試期70 d。結(jié)果表明：1）BS組測序獲得的有效序列顯著多于其他各組（P < 0.05），試驗組測序獲得的優(yōu)質(zhì)序列較對照組均有一定增加（P > 0.05）。2）在門水平上，與對照組相比，MMT組梭桿菌門相對含量有降低的趨勢（P=0.072），MMT+BS組迷蹤菌門相對含量有降低的趨勢（P=0.053）。在屬水平上，與對照組相比，MMT組梭桿菌屬相對含量有降低的趨勢（P=0.072），BS組乳桿菌屬相對含量顯著提高（P < 0.05），BS組和MMT+BS組巨單胞菌屬相對含量顯著提高（P < 0.05），MMT+BS組梭菌屬相對含量顯著降低（P < 0.05）。3）與對照組相比，飼糧添加BS顯著降低了產(chǎn)蛋雞血漿二胺氧化酶活性和內(nèi)毒素含量（P < 0.05），有降低血漿D-乳酸含量的趨勢（P=0.051）。可見，MMT、BS及其聯(lián)用均在一定程度上影響了產(chǎn)蛋雞盲腸菌群的物種豐度，添加BS降低了腸道通透性。

　　關(guān)鍵詞: 蒙脫石 枯草芽孢桿菌 腸道菌群  腸道通透性     產(chǎn)蛋雞

　　家禽腸道是一個開放的生態(tài)系統(tǒng)，棲居著大量的微生物并形成功能復(fù)雜的微生態(tài)環(huán)境。腸道微生物對宿主具有重要的作用，比如發(fā)酵不溶纖維提供能量[1]、維持機(jī)體免疫功能[2]、調(diào)節(jié)機(jī)體新陳代謝[3]等。而腸道菌群失衡或微生物多樣性降低會導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降、養(yǎng)分利用率降低，且可能與乳糜泄和炎癥性腸病等的發(fā)生有關(guān)[4-5]。可見，健康的腸道菌群有利于維持宿主正常的生理功能和發(fā)揮生長或生產(chǎn)潛能。蒙脫石(montmorillonite，MMT)是一種鋁硅酸鹽類黏土，比表面積大，表面分布著無數(shù)微孔，具有很好的吸附性，已被證實(shí)能在動物腸道中吸附細(xì)菌及其毒素，改善腸道菌群[6-7]。枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis，BS)是生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛的飼用益生菌之一，它可通過消耗腸道游離氧、競爭腸腔內(nèi)養(yǎng)分和分泌類抗生素物質(zhì)等抑制有害菌增殖，促進(jìn)有益菌生長，進(jìn)而調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡[8-9]。在斷奶仔豬上的研究表明，MMT和嗜酸乳桿菌聯(lián)用對調(diào)節(jié)腸道菌群和降低腸道通透性的作用優(yōu)于二者單獨(dú)使用[10]，提示MMT和益生菌在改善腸道菌群和腸道屏障功能方面可能具有協(xié)同作用，因此，我們推測MMT和BS聯(lián)用可能更有利于優(yōu)化產(chǎn)蛋雞腸道菌群、降低腸道通透性。但目前尚未有關(guān)于BS及其與MMT互作對產(chǎn)蛋雞腸道通透性影響的報道，且二者對調(diào)節(jié)腸道菌群是否具有協(xié)同作用尚不明確。此外，本課題組最近的研究表明，飼糧添加0.5 g/kg MMT、5×108 CFU/kg BS及其聯(lián)用均提高了產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能[11]，鑒于腸道微生物與宿主免疫、養(yǎng)分吸收、生長發(fā)育或維持生產(chǎn)的相關(guān)性，我們推測它們對產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能的影響與腸道菌群存在一定關(guān)聯(lián)。因此，本試驗旨在探討飼糧添加MMT和BS對產(chǎn)蛋雞腸道菌群和腸道通透性的影響，并觀察MMT和BS是否具有協(xié)同作用，以期為其在產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。

　　1 材料與方法
　　1.1 試驗材料

　　MMT由美國安牧然國際公司提供，其主要成分為：鈣基MMT含量>70%，其中鈣含量為0.5%~1.5%；無定形水合二氧化硅含量 > 15%；其他礦物(如斜發(fā)沸石、伊利石、高嶺石和黃鐵礦等)含量 < 15%。BS(BS-C3102)由上海牧冠企業(yè)發(fā)展有限公司提供，活菌數(shù)≥1×109 CFU/g。

　　1.2 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理

　　本試驗于2017年7月21日至2017年10月7日在湖南生安賽特農(nóng)牧科技有限公司進(jìn)行。采用2×2雙因子隨機(jī)設(shè)計，選擇360只29周齡健康的羅曼粉殼蛋雞，隨機(jī)分成4組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)15只，分別飼喂基礎(chǔ)飼糧(對照組)、基礎(chǔ)飼糧+0.5 g/kg MMT(MMT組)、基礎(chǔ)飼糧+5×108 CFU/kg BS(BS組)、基礎(chǔ)飼糧+0.5 g/kg MMT+5×108 CFU/kg BS(MMT+BS組)。預(yù)試期7 d，正試期70 d。預(yù)試期各組產(chǎn)蛋雞統(tǒng)一飼喂基礎(chǔ)飼糧，每天對雞群進(jìn)行觀察，并及時調(diào)整雞群，使各組間產(chǎn)蛋雞的平均日采食量[(116.61±0.45) g，P=0.603]、產(chǎn)蛋率[(95.72±0.48)%，P=0.955]和平均蛋重[(59.90±0.21) g，P=0.689]差異不顯著。試驗用基礎(chǔ)飼糧參考《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表 1。在基礎(chǔ)飼糧配制好后，準(zhǔn)確稱取所需的MMT和BS添加到基礎(chǔ)飼糧中，逐級充分混勻(先將MMT或BS混勻于小份飼糧中，然后逐步拌于大份飼糧中)，在配制MMT+BS組試驗飼糧時，先將所需的MMT和BS充分混勻后再逐級混勻于基礎(chǔ)飼糧中。配制好的試驗飼糧，按照組別裝于帶蓋的塑料大桶中，并儲存于飼料貯藏室。正試期間，每隔3~4 d配制1次試驗飼糧。

　　

　　產(chǎn)蛋雞采用上、中、下3層階梯式籠養(yǎng)，每籠3只，每5籠1個重復(fù)，各組的試驗雞保證分布在上、中、下層的數(shù)量相等。每日喂料2次，撿蛋2次，上午、下午各勻料2次。各組產(chǎn)蛋雞飼養(yǎng)管理條件相同，試驗第1~5周雞舍溫度、相對濕度分別為(27.06±2.27) ℃、(77.39±6.13)%；試驗第6~10周雞舍溫度、相對濕度分別為(24.03±2.40) ℃、(77.07±6.21)%。產(chǎn)蛋雞自由采食、飲水，每日光照時間為16 h，自然光照和人工光照相結(jié)合。每日清掃雞舍1次，每周對雞舍噴霧消毒2次，每隔3 d清糞1次。

　　1.3 樣品采集

　　試驗第70天清晨，以重復(fù)為單位隨機(jī)選取2只產(chǎn)蛋雞，采血前禁食12 h，自由飲水。通過翅下靜脈采集5 mL左右血液于肝素抗凝管中，于3 000 r/min離心10 min制備血漿，置于-20 ℃冰箱保存。采血結(jié)束后，立即飼喂試驗雞只，當(dāng)天下午從每個重復(fù)隨機(jī)選取1只雞，頸部放血后剖開腹腔，取適量盲腸內(nèi)容物置于1.5 mL的高壓滅菌離心管中，并迅速放置液氮中保存，然后放入-80 ℃冰箱凍存。

　　1.4 檢測指標(biāo)與方法
　　1.4.1 盲腸微生物分析

　　細(xì)菌DNA提取及檢測：分別從每組的6份盲腸內(nèi)容物樣品中隨機(jī)選取5份，稱取每份盲腸內(nèi)容物樣品(200±10) mg置于2 mL離心管中，采用糞便基因組DNA提取試劑盒(DP328，天根生化科技有限公司)提取細(xì)菌DNA。用超微量分光光度計(NanoDrop ND-2000 UV，賽默飛)檢測DNA濃度，0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測純度，之后將合格的DNA樣品送上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司測序分析。

　　Illumina MiSeq高通量測序：利用Illumina MiSeq平臺進(jìn)行Barcoded Illumina Miseq測序，對樣品16S rRNA的V4區(qū)建立文庫并上機(jī)測序。具體操作如下，選擇16S rDNA的V4區(qū)作為目的擴(kuò)增區(qū)域，用引物對515F/806R目的片段進(jìn)行擴(kuò)增。根據(jù)PCR產(chǎn)物濃度進(jìn)行等量混樣，充分混勻后使用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物。目標(biāo)條帶用DNA切膠回收試劑盒進(jìn)行回收，得純化樣本，并用BioTek酶標(biāo)儀測定各樣本濃度并定量。每個樣品DNA等量混合，采用標(biāo)準(zhǔn)的Illumina TruSeq DNA文庫制備流程構(gòu)建所需的宏基因組上機(jī)文庫，最后在Illumina Miseq分析平臺上進(jìn)行Barcoded Illumina Miseq測序，采用PE250測序策略。

　　數(shù)據(jù)處理與分析：對經(jīng)過雙端(pair-end)測序的數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)量控制，截斷或舍棄低質(zhì)量序列(50個連續(xù)堿基平均質(zhì)量 > Q30，接頭污染、含有N和低復(fù)雜度的reads)。用軟件Flash v1.2.11連接通過質(zhì)量控制的序列，舍棄無法連接的序列。利用軟件USEARCH 7.0.1090去掉純化后數(shù)據(jù)的嵌合體，應(yīng)用Qiime 1.8.0分析軟件合并去掉嵌合體的數(shù)據(jù)，并將數(shù)據(jù)按照Ulust算法將序列相似性≥97%的操作分類單元(operational taxonomic units, OTU)進(jìn)行聚類。選取每個類最長的序列為代表序列，通過RDP-classifier v2.2軟件將OTU代表序列與數(shù)據(jù)庫有比對進(jìn)行物種注釋，得到每個OTU的分類學(xué)信息。通過軟件Mothur 1.31.2對生成的OTU信息進(jìn)行細(xì)菌群落多樣性和豐富度分析。

　　1.4.2 血漿指標(biāo)測定

　　使用北京華英生物技術(shù)研究所生產(chǎn)的試劑盒測定血漿二胺氧化酶(DAO)活性和內(nèi)毒素、D-乳酸含量，相應(yīng)試劑盒的貨號分別為HY-60106、HY-70055、HY-60026。

　　1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

　　盲腸微生物測序數(shù)據(jù)采用SAS 9.2統(tǒng)計軟件中Kruskal-Wallis檢驗，血漿DAO活性和內(nèi)毒素、D-乳酸含量采用一般線性模型(GLM)程序進(jìn)行2×2因子分析，差異顯著者用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以平均值和集合標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示，用P < 0.05表示差異顯著，0.05≤P < 0.10表示有提高或降低的趨勢。

　　2 結(jié)果

　　2.1 飼糧添加MMT和BS對產(chǎn)蛋雞盲腸菌群測序數(shù)據(jù)和Alpha多樣性的影響

　　由表 2可知，BS組測序獲得的有效序列顯著多于其他各組(P < 0.05)，試驗組測序獲得的優(yōu)質(zhì)序列較對照組均有一定增加(P > 0.05)。各組測序覆蓋率均在99.30%以上，說明測序深度已經(jīng)基本覆蓋到樣品中的所有物種。各組間Ace指數(shù)、Chao1指數(shù)、香農(nóng)指數(shù)和辛普森指數(shù)均無顯著差異(P > 0.05)。

　

　　2.2 飼糧添加MMT和BS對產(chǎn)蛋雞盲腸菌群Beta多樣性的影響

　　Beta多樣性分析可以比較不同樣品間在物種多樣性方面存在的差異大小。如圖 1所示，經(jīng)主坐標(biāo)分析(principal coordinates analysis, PCoA)方法分析，結(jié)果顯示對照組、MMT組和BS組菌群結(jié)構(gòu)分布相對緊湊，相似度較高，而MMT+BS組菌群結(jié)構(gòu)分布相對零散，相似度低，群落構(gòu)成差異較大。

　

　　2.3 飼糧添加MMT和BS對產(chǎn)蛋雞盲腸菌群結(jié)構(gòu)和物種豐度的影響

　　由表 3可知，在門水平上，各組中擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門和梭桿菌門均為優(yōu)勢菌門，其中擬桿菌門和厚壁菌門相對含量分別為45.42%~59.12%和34.86%~43.41%。統(tǒng)計結(jié)果表明：各組間相對含量大于0.15%的菌門相對含量均無顯著差異(P > 0.05)。與對照組相比，MMT組梭桿菌門相對含量有降低的趨勢(P=0.072)，MMT+BS組迷蹤菌門相對含量有降低的趨勢(P=0.053)。

　

　　由表 4可知，在相對含量大于1%的菌屬中，各組間優(yōu)勢菌屬存在一定差異，且擬桿菌屬的相對含量最高，其序列占測序總量的32.25%。統(tǒng)計結(jié)果表明：與對照組相比，試驗組巨單胞菌屬和乳桿菌屬相對含量均有不同程度的提高，其中，BS組和MMT+BS組巨單胞菌屬相對含量較對照組顯著提高(P < 0.05)，BS組乳桿菌屬相對含量顯著高于對照組和MMT組(P < 0.05)；試驗組梭桿菌屬和梭菌屬相對含量均有降低，其中，MMT組梭桿菌屬相對含量較對照組有降低的趨勢(P=0.072)，MMT+BS組梭菌屬相對含量顯著低于對照組(P < 0.05)。此外，MMT組普雷沃氏菌科Ga6A1群相對含量顯著高于BS組(P < 0.05)；MMT+BS組丁酸弧菌屬相對含量較BS組顯著提高(P < 0.05)，理研菌科RC9群相對含量較BS組有降低的趨勢(P=0.075)。

　　2.4 飼糧添加MMT和BS對產(chǎn)蛋雞血漿DAO活性、D-乳酸和內(nèi)毒素含量的影響

　　由表 5可知，主效應(yīng)分析表明，飼糧中添加MMT對產(chǎn)蛋雞血漿DAO活性、D-乳酸和內(nèi)毒素含量均無顯著影響(P > 0.05)；添加BS顯著降低了血漿DAO活性和內(nèi)毒素含量(P < 0.05)，有降低血漿D-乳酸含量的趨勢(P=0.051)；MMT和BS互作對血漿DAO活性、D-乳酸和內(nèi)毒素含量均無顯著影響(P > 0.05)。BS組血漿內(nèi)毒素含量顯著低于對照組和MMT組(P < 0.05)，血漿D-乳酸含量較對照組有降低的趨勢(P=0.085)。

　　3 討論
　　3.1 飼糧添加MMT和BS對產(chǎn)蛋雞盲腸菌群多樣性的影響

　　本研究采用高通量測序技術(shù)對產(chǎn)蛋雞20個盲腸內(nèi)容物樣品進(jìn)行了測序，BS組樣品測序獲得的有效序列顯著多于其他各組，試驗組的優(yōu)質(zhì)序列較對照組均有一定增加。對菌群進(jìn)行多樣性分析發(fā)現(xiàn)，試驗組和對照組樣品間Alpha多樣性指數(shù)均無顯著差異；另外，經(jīng)PCoA方法分析Beta多樣性發(fā)現(xiàn)，MMT+BS組菌群結(jié)構(gòu)分布相對零散，相似度較低，提示樣品中群落構(gòu)成差異較大。本課題組前期的研究表明，添加0.6 g/kg MMT在一定程度上提高了產(chǎn)蛋雞盲腸菌群的豐富度和Alpha多樣性[12]，提示MMT對產(chǎn)蛋雞腸道菌群多樣性的影響與其添加水平有關(guān)。Guo等[8]報道，添加BS提高了產(chǎn)蛋雞盲腸的香農(nóng)指數(shù)和Chao1指數(shù)；本試驗中，BS組香農(nóng)指數(shù)和Chao1指數(shù)較對照組有一定提高，提示添加BS對產(chǎn)蛋雞盲腸微生物多樣性的影響是正面的。

　　3.2 飼糧添加MMT和BS對產(chǎn)蛋雞盲腸菌群結(jié)構(gòu)和物種豐度的影響

　　MMT、BS及其聯(lián)用對產(chǎn)蛋雞盲腸優(yōu)勢菌門的相對含量沒有產(chǎn)生顯著影響，與前人的報道[8, 12]一致；而Li等[13]研究指出，添加BS顯著提高了肉仔雞盲腸擬桿菌門和變形菌門相對含量，降低了厚壁菌門相對含量，與本試驗的結(jié)果不一致，可能與開始飼喂BS時雞的年齡有關(guān)，即健康成年雞腸道中已形成較穩(wěn)定的微生態(tài)環(huán)境，添加BS(腸道非定植菌)很難引起腸道內(nèi)主要微生物發(fā)生大的變化。本試驗發(fā)現(xiàn)，試驗組梭桿菌門相對含量較對照組均有一定程度降低。研究表明，梭桿菌門相對含量提高與消化道疾病有關(guān)[14]，且此菌門的一些成員不利于機(jī)體脂質(zhì)代謝[15]，提示梭桿菌門相對含量的降低可能對產(chǎn)蛋雞有一定益處。此外，試驗組迷蹤菌門相對含量有不同程度降低，本課題組前期的研究也發(fā)現(xiàn)MMT降低了產(chǎn)蛋雞盲腸迷蹤菌門相對含量[12]。梁惠等[16]報道，酒精性肝損傷大鼠糞便迷蹤菌門相對含量明顯提高，并指出此菌門相對含量升高可能與腸道損傷有關(guān)。本試驗中，MMT+BS組迷蹤菌門相對含量最低，且較對照組有降低的趨勢，提示二者聯(lián)用可能有利于改善產(chǎn)蛋雞盲腸菌群。

　　在屬水平上，MMT、BS及其聯(lián)用對盲腸優(yōu)勢菌屬相對含量沒有產(chǎn)生顯著影響。與對照組相比，BS組乳桿菌屬相對含量顯著提高，BS組和MMT+BS組巨單胞菌屬相對含量顯著提高。Guo等[8]報道，BS增加了產(chǎn)蛋雞盲腸乳桿菌屬的相對豐度；Forte等[17]也指出，BS和嗜酸乳桿菌促進(jìn)了產(chǎn)蛋雞腸道乳桿菌屬的增殖，本試驗的結(jié)果與以上學(xué)者的報道基本一致。乳桿菌屬是腸道有益菌群，其利用葡萄糖發(fā)酵后能產(chǎn)生乳酸和乙酸等。巨單胞菌屬化能有機(jī)營養(yǎng)型微生物，發(fā)酵各種碳水化合物生成乳酸、乙酸和丁酸等，它們能夠降低腸道pH，間接抑制外來病原菌的入侵。同時，丁酸還可為宿主腸上皮細(xì)胞生長提供能量，有利于維持腸道屏障功能[18]。本試驗中，MMT組梭桿菌屬相對含量較對照組有降低的趨勢，MMT+BS組梭菌屬相對含量顯著低于對照組，與前人的報道[8, 17]基本一致。梭桿菌屬和梭菌屬均是腸道有害菌群，梭桿菌屬包含壞死梭桿菌和核梭桿菌等多種致病菌，對動物和人類均具有毒害作用；苗慧芳等[19]報道，結(jié)直腸癌患者糞便梭桿菌屬豐度明顯高于健康人，提示此菌屬數(shù)量增加可能與腸道疾病有關(guān)。有學(xué)者證明，梭菌屬的一些菌能夠產(chǎn)生α-毒素，與壞死性腸炎的發(fā)生有關(guān)[20]。此外，本研究表明，MMT顯著提高了普雷沃氏菌科Ga6A1群相對含量，普雷沃氏菌與短鏈脂肪酸的合成有關(guān)，而短鏈脂肪酸的缺乏減弱了其對腸道屏障的保護(hù)作用；Shen等[21]報道，非酒精性脂肪肝患者糞便中普雷沃氏菌相對含量在科和屬水平出現(xiàn)顯著下降，因此，普雷沃氏菌通常被認(rèn)為是有益菌。丁酸弧菌屬化能有機(jī)營養(yǎng)型微生物，可發(fā)酵底物廣且發(fā)酵產(chǎn)物豐富，其發(fā)酵葡萄糖的主要產(chǎn)物是丁酸和乳酸[22]，本試驗中，MMT和BS降低了丁酸弧菌屬的相對含量，但二者聯(lián)用可使此菌的相對含量升高。此外，本試驗發(fā)現(xiàn)，試驗組另枝菌屬相對含量較對照組均有一定提高。據(jù)報道，此菌是一種耐膽鹽的微生物，能產(chǎn)生溶纖維蛋白酵素，發(fā)酵碳水化合物生成乙酸、丙酸，并可高效表達(dá)木糖異構(gòu)酶[23]。

　　本課題組最近的研究表明，飼糧添加0.5 g/kg MMT、5×108 CFU/kg BS及其聯(lián)用均提高了產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋率、日產(chǎn)蛋重，且二者聯(lián)用降低了料蛋比[11]。綜上，MMT和BS在一定程度上提高了盲腸部分有益菌屬相對含量，降低了部分有害菌屬相對含量，說明二者可改善產(chǎn)蛋雞盲腸菌群，可能對提高產(chǎn)蛋性能有一定作用。鑒于MMT和BS聯(lián)用提高了巨單胞菌屬、丁酸弧菌屬和乳桿菌屬相對含量，降低了梭菌屬和梭桿菌屬相對含量，提示二者聯(lián)用對優(yōu)化腸道菌群可能具有協(xié)同作用，進(jìn)而有益于提高產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能。本研究的結(jié)果與Cao等[10]的報道基本一致，可能是在MMT的保護(hù)作用下，BS的益生功效增強(qiáng)[11]。綜合分析，MMT和BS聯(lián)用對提高產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能和盲腸菌群的效果優(yōu)于二者單獨(dú)使用。

　　3.3 飼糧添加MMT和BS對產(chǎn)蛋雞腸道通透性的影響

　　當(dāng)動物腸黏膜屏障受損時，腸道通透性增大，血液中內(nèi)毒素和D-乳酸含量增加，DAO活性提高。本試驗中，添加MMT不影響產(chǎn)蛋雞血漿DAO活性、內(nèi)毒素和D-乳酸含量。孟艷莉[24]研究指出，添加MMT顯著降低了斷奶仔豬血漿D-乳酸含量和DAO活性；此外，Lei等[25]報道，肉牛飼糧中添加MMT，其血漿、瘤胃液、腸道食糜和糞便中內(nèi)毒素水平均顯著降低。本試驗的結(jié)果與以上學(xué)者的研究結(jié)果不一致，其可能原因有以下幾方面：1)動物的生理狀況。仔豬斷奶后，腸黏膜屏障在一定程度上受損，使腸道通透性增加，故此時在飼糧中添加MMT，有利于發(fā)揮其功效；而本試驗蛋雞處于產(chǎn)蛋高峰期階段，其腸道發(fā)育成熟，且產(chǎn)蛋雞處于正常的生產(chǎn)條件下，腸黏膜屏障相對完整，進(jìn)而添加MMT難以對上述指標(biāo)產(chǎn)生顯著影響。2)飼糧因素。肉牛飼糧中添加一定比例的草料會降低瘤胃pH和影響體內(nèi)微生態(tài)環(huán)境，容易造成瘤胃酸中毒和產(chǎn)生大量的內(nèi)毒素[26]，而MMT具有吸附內(nèi)毒素的作用，因而添加MMT顯著降低了內(nèi)毒素含量。3)MMT的添加水平。上述肉牛和斷奶仔豬試驗中MMT的添加水平分別為2、3 g/kg，而本試驗MMT的添加水平為0.5 g/kg，可能該水平下的MMT對產(chǎn)蛋雞腸道通透性不產(chǎn)生顯著影響。

　　目前，關(guān)于BS對家禽腸道通透性影響的研究很少。本研究表明，BS顯著降低了血漿DAO活性和內(nèi)毒素含量，且有降低血漿D-乳酸含量的趨勢，提示BS能增強(qiáng)產(chǎn)蛋雞腸道屏障功能，降低腸道通透性，推測對提高產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能起一定作用[11]。這可能與BS一定程度上降低了腸道有害菌數(shù)量、優(yōu)化腸道菌群有關(guān)，已知一些細(xì)菌能夠產(chǎn)生內(nèi)毒素，腸道內(nèi)毒素含量降低，一方面，能夠進(jìn)入血液循環(huán)的內(nèi)毒素減少；另一方面，腸道有害菌和內(nèi)毒素減少，腸黏膜受損的幾率降低，機(jī)體維持正常的屏障功能和腸道通透性，進(jìn)而內(nèi)毒素、DAO和D-乳酸釋放減少或難以穿過腸道屏障進(jìn)入血液。此外，本試驗中，MMT和BS對血漿DAO活性和內(nèi)毒素、D-乳酸含量不產(chǎn)生顯著交互作用。Cao等[10]報道，MMT和嗜酸乳桿菌聯(lián)用對提高腸上皮細(xì)胞跨膜電阻值和降低熒光素異硫氰酸酯葡聚糖4 ku滲透率的作用略優(yōu)于二者單獨(dú)添加，但沒有表現(xiàn)出明顯優(yōu)勢，與本試驗的結(jié)果基本一致。

　　4 結(jié)論

　　① 飼糧添加MMT有降低盲腸梭桿菌門和梭桿菌屬相對含量的趨勢，對腸道通透性沒有顯著影響；添加BS提高了盲腸巨單胞菌屬和乳桿菌屬的相對含量，降低了腸道通透性。


　　② MMT和BS聯(lián)用降低了盲腸迷蹤菌門和梭菌屬的相對含量，提高了巨單胞菌屬相對含量，提示二者對調(diào)節(jié)產(chǎn)蛋雞腸道菌群可能具有協(xié)同作用。


　　③ 腸道中這些菌群豐度的變化與腸道健康相關(guān)，可能對提高產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能有作用。

　　參考文獻(xiàn)：略
　　作者：曲湘勇, 陳繼發(fā)*, 匡佑華, 康克浪, 唐圣果, 賀長青
　　來源：動物營養(yǎng)學(xué)報