精子分離性別控制技術的研究

牧童

  如何能很迅速地一次分離足夠正常人工授精的精子數目，而且不損及其精子活力和型態，更不影響其授精後的生育能力，此為往後分離精子必須改進努力的目標。

一、前    言

        各種動物因性別之不同而其生理解剖上亦有所差異，因此在飼養上和市場的價格上的經濟收益差異也很大。在理論上動物公母之性比例約在 1：1，所以在自然狀況下之性比例也只有公母各半的機率。

        近二十年來有關動物性別的控制技術已有相當程度的進展，其中如利用體外授精，核移置和細胞融合技術之發展已可獲得正常懷孕和分娩仔豬的報告，因體外授精、核移置和細胞融合技術之發展則大量增加了胚胎的來源，則胚胎之性別控制上可應用細胞學的方法或胚胎顯微分切來檢定性染色體，在胚胎分裂發育至適合於移置時給予性別鑒定始再行移置，但是，因使用染色體以檢定性別的檢出率低，檢定的時間長，往往也因胚胎難免受損而使移置後其受胎率降低。

        其他性別鑒定的方法如 H Y 抗原已證實可應用在牛、綿羊和豬等家畜，使用此項技術在胚胎性別鑒定的準確率分別為 77 88% 和 82 89%，正確性相當高。此項技術應用在牛胚胎或單胎動物胚胎上有其實質上的經濟效果，但如應用在豬胚胎，因其性別準確率不如單胎動物，所以其經濟效益上無法與單胎動物相抗衡。

        在性別控制技術上另一種方法是精子中具有 X 和 Y 染色體的分離。在人類和實驗動物方面已有相當程度的成功率，但是利用這些技術應用在家畜的精子分離，則因參與的動物頭數不多或未能重復試驗致使缺乏說服力。近幾年來使用精子來控制性別比較有理論根據的學者有美國農業部的 Dr. Johnson 等人，( 1989；1991 )。他們以測定脫氧核甘酸 ( DNA ) 含量多寡的方法來判定其性別。其過程為將精子置入流動測定儀 ( Folw  Cytometer ) 分離含有 X 染色體和 Y 染色體的精子。并已將分離的兔和豬精子經由輸卵管授精法獲得生產特定性別之動物，此方法也是迄今為止分離精子性別比較精準的方法。

二、胚胎性別鑒定方法

        (1)細胞學鑒定方法

        此方法為抽取胚胎內的細胞經過適當的培養後在辨別 X 或 Y 染色體。因此方法抽取胚胎內的細胞時有損及胚胎之存活，致使經移置後其成功率很低。

        (2)性核染質 ( Sex   chromatin ) 性別鑒定方法

        從 5.75 天囊胚期胚胎抽取 200 ~ 300 個滋養外胚層細胞 ( Strophectodermal  cells )，將細胞固定和染色後鑒定 Barr  body 的存在與否來判定其性別。用此方法鑒定性別有很高的精準率，但是胚胎的存活率卻很低 ( 16.5% )。

        (3)後期胚胎組織切片性別鑒定

        將 12 ~ 14 天之孵化囊胚期胚胎抽取 0.5 mm2 之滋養外胚層細胞，組織切片細胞給予適當培養後，使用核型鑒定方法來判定其性別，經移置其受胎率很低 ( 38% )。

        (4)早期胚胎組織切片性別鑒定方法

        將 6 ~ 8 天孵化前之胚胎抽取少許滋養外胚層細胞組織切片，經適當培養後，再用核型鑒定方法來判定其性染色體。因此方法鑒定性別有 59% 的胚可以判定性別，但其分娩後仔畜性別之正確率僅 33%。

       (5)半切胚的方法鑒定性別

        將 6 ~ 7 天的胚胎分切成兩半，經體外適當的培養後，使用核型鑒定方法來判定性染色體。以此方法鑒定性別有 60% 之半切胚可被鑒定性別。

        (6) X Linked 酵素的偵測方法

        以雌胚 比雄胚生產較多之 X Linked 酵素的特性來判別 X 或 Y 胚之方法。用此方法有 64% 之準確率。

       (7)使用免疫之方法選擇胚之性別 ( H Y  antigen )

        H Y 抗原為雄胚特有之蛋白質，經螢光染色後可以進行性別鑒定。由於方法不需要抽離細胞，而且在螢光照射下的時間也很短 ( 無傷害 )，經移置後其受胎率不受影響。此方法鑒定性別可達 80% 的準確率。

       (8) Y 染色體特別基因探針

        利用雄性特有之 Y 染色體基因探針可檢測出 57% 之細胞組織，其性別檢測的準確率可高達 95%。因此方法必須抽取細胞檢測，胚受損率高，致使影響移置後的受胎率很大。近年來國外正嘗試利用 Polymeric  Chain  Reaction ( PRC ) 技術企圖盡量減低對胚胎的傷害程度以便提高移置的受胎率。但此方法必須與儀器配合，故想見其花費的費用極為昂貴。

三、精子性別鑒定方法

        (1)牛血清白蛋白 ( BSA ) 液相分層分離法

        因人類 X 和 Y 精子的大小和比重上有差異，所以經此方法可以分離試驗動物和人類 X 和 Y 精子。1982 年 Beernnink  and  Ericsson 曾經使用此技術成功地分離人 X 和 Y 精子。但是利用此技術分離牛的 X 和 Y 精子，并將分離之精子給予授精、分娩，出生之仔畜性別則無明顯的差異。

        (2)免疫方法

        利用雄性動物細胞表面持有特別之蛋白質 ( H Y 抗原 )。并以免疫之方法生產 H Y 抗體血清，在配合螢光染色技術可以辨別 X 和 Y 精子。利用此技術分離鼠和兔子 X 和 Y 精子則可獲得相當程度的性別改變 ( 母鼠 54.6%；母兔 63% )。

       (3) Flow  Cytometric 儀分離方法

        利用 Flow  Cytometric 儀測定哺乳動物精子 DNA 含量已有報告 ( Garner  et  al.,  1983 ; Johnson  et  al.,  1985 ; Johnson  et  al.,  1987 )。而且 Pinkel  et  al.,  1982 年亦曾發現 X 精子 DNA 含量多過 Y 精子 4%。

        在早期使用 Flow   Cytometric 儀分離 X 和 Y 精子前必須將精子的尾巴細胞質和細胞膜棄掉，所以分離出來的 X 和 Y 精子是死的，以致無法作為授精之用。但是近兩年來美國農業部生理專家強生博士等研究人員已可將已經分離而且有活力的活精子使用輸卵管授精法給予授精母兔和母豬，并成功生產活的仔畜 ( 表 1、2 )。

表 1   兔子預選 X 和 Y 精子以及經由輸卵管授精仔兔之性比例
精 子 處 理 別	頭            數		出 生 仔 兔 頭 數 和 百 分 率
	授 精 數	分 娩 數	預             選		生            產
			公 (%)	母 (%)	公 (%)	母 (%)
Y 精子 X 精子 混合 X 和 Y 精子<--mstheme-->	16 14 17	5 3 5	81 14 50	19 86 50	17 (81) 1 (6) 6 (43)	4 (19) 15 (94) 8 (57)
合            計	47	13	---	---	24 (47)	27 (53)
資料來源：Johnson  et  al.,  1989.   Biology  of  Reproduction  41：199-203   * ：每邊輸卵管注入 3×105 之精子

表 2  預選豬 X 和 Y 精子以及經由輸卵管授精後仔豬之性比例
精 子 處 理 別	授精頭數／ 分 娩 頭 數	仔 豬 生 產 頭 數	平均每窩 產仔頭數
				預     選		生    產
				公 (%)	母 (%)	公 (%)	母 (%)

Y 精子      X 精子     不分離 染色     不分離 不染色	8／4 10／5 11／5 7／5	37 34 40 46	9.3 6.8 8.0 9.2	77 20 50 50	23 80 50 50	68 26 43 52	32 74 57 48
資料來源：Johnson  et  al.,  1989.    Biology  of   Reproduction  41：199 - 203        *：每邊輸卵管注入 3×105 之精子

　

四、結    語

        動物子代性別的控制，迄今仍為生殖生理學家和動物研究人員欲努力的目標。雖然有眾多報告宣稱已獲得了某種程度的成功。甚至於申請過專利 ( 人 )。但據了解迄今在動物方面仍然沒有一種可隨心所欲或一致的方法先預知出生前的性別。

        因出生前能預先知道動物性別有下列的好處：(1)可以加速遺傳改進。(2)提高生產效益和增加經濟效益。(3)畜群飼養管理簡易。在前述的胚胎性別鑒定方法中，雖然有數種方法可預先測定胚胎之性別，而且其精確度也很高，但是，因其胚胎經抽取細胞或分切，使胚胎的存活率降低，經移置後也影響其受胎率，花費的成本極高。所以此技術也只限於非外科取胚選胚的單胎動物。

        近幾年來發展分離 X 和 Y 精子技術已近成熟階段尤其利用 Flow  Cytometric 儀分離經去尾和細胞膜的 X 和 Y 精子成功以後。迄 1989；1991 年美國農業部動物生理學家強生博士更利用 Flow  Cytometric 儀分離仍有活力的精子，而且將分離仍有活力的 X 和 Y 精子經由母體輸卵管授精成功地產下 94% 母仔兔和 81% 公仔兔以及 74% 母仔豬和 68% 公仔豬。

        雖然利用 Flow   Cytometric 儀可分離 X 和 Y 精子，因在分離之過程中損傷精子程度極高，分離的速度也嫌太慢，尤其對多胎動物需眾多數目的精子來授精仍嫌不足。所以如何能很迅速地一次分離足夠正常人工授精的精子數目，而且不損及其精子活力和型態，更不影響其授精後的生育能力，此為往後分離精子必須改進努力的目標。

文章來源：福建種豬信息網

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EB+P4+陰道栓對荷斯坦青年牛超數排卵效果的影響

摘要：采用苯甲酸鈉雌二醇(estradiol benzoate, EB)+孕激素(progesterone, P4)+陰道栓方法對荷斯坦青年牛進行人為誘導卵泡波處理，比較不同劑量的P4和不同陰道栓誘導新的卵泡波的發生，以及對同期發情效果和超排效果的影響。實驗結果表明，海棉栓組PGF2α處理后到奶牛發情的時間間隔為48.3h，孕酮緩釋陰道栓組為39h，兩組差異極顯著（P<0.05）；海棉栓組的頭均獲胚數顯著高于孕酮緩釋陰道栓組（13.2：8.7枚，P<0.05），頭均可用胚數顯著高于孕酮緩釋陰道栓組(5.7：3.3枚，P<0.05)；外源注射50和100 mgP4都能夠成功地誘導新的卵泡波的發生，在同期發情效果和超排效果上沒有顯著差異( P>0.05 )。
關鍵詞：EB；P4；陰道栓；超數排卵
引言：
利用奶牛卵泡波的原理，采用物理或化學方法對供體奶牛的卵泡波進行同期化處理，可以提高奶牛的同期發情和超數排卵效果。Lammoglia et al（1998）報道，使用雌激素+孕激素+陰道栓有效地促進新的卵泡波的發生，提高排卵前的LH峰值，從而提高同期發情效果和超排效果。Martinez et al.（2000）使用EB+P4+CIDR（新西蘭）取得較好的同期發情效果和較高的妊娠率；Martinez et al.（2001）使用EB+P4誘導新的卵泡波的發生，取得較好的同期發情效果。Gabriel et al (2006) 報道了使用DIB(阿根廷生產的陰道栓)陰道栓+2.5mgEB+50mgP4進行同期發情處理,使用Folltropin-V 進行超排處理，取得較好的超排效果。
目前，國內奶牛的同期發情和超排處理主要使用海棉陰道栓，由于該陰道栓埋置后容易與陰道發生黏連，陰道壁的刺激性比國外生產的CIDR、DIB強一些，容易阻塞陰道分泌物的排出，造成陰道內較多的炎性分泌物，引起奶牛超排過程中的損傷，影響超排效果。因此，本研究比較不同的陰道栓和不同的孕激素劑量對奶牛同期發情和超數排卵效果的影響，從而進一步提高奶牛的超排效果。

1.材料和方法
1.1實驗材料
1.1.1實驗動物
供體牛選用北京奶牛中心良種場飼養的體質健康、性周期正常、無生殖疾患，具有優良高產基因的71頭13～15月齡荷斯坦青年母牛用于實驗。
1.1.2器械和主要藥品
開膣器，輸精槍，外套膜，外套管，三通管，沖卵管(日本鈴木式)、集卵杯(日本)、體視顯微鏡等沖胚、檢胚器材。
促卵泡素（FSH），加拿大產Folltropin-V，規格：20mg/mL，生產批號：DIN 00867357；前列腺素（PGF2α），上海計劃生育研究所生產的氯前列烯醇，規格：0.2mg/支，生產批號：040428；雌激素，南京動物激素廠生產的苯甲酸鈉雌二醇（EB），4mg/支，生產批號：030102；孕激素（P4），南京動物激素廠生產的黃體酮， 50mg/支，生產批號：040621；陰道海綿栓由浙江臺州東牧動物藥業有限公司生產，生產批號：031225；孕酮緩釋陰道栓由上海計劃生育研究所生產，生產批號：20050905；沖卵液、胚胎保存液及冷凍液由本實驗室配制。
1.2方法
1.2.1實驗設計
實驗于2005年11月份在北京奶牛中心良種場進行，分為兩種不同的陰道栓埋植組（海綿栓/ 孕酮緩釋陰道栓）和兩種不同濃度的孕激素處理組（50 mg/100 mg）,采用陰道栓埋植方法進行人為誘導新的卵泡波超排處理。
1.2.2超排處理
在青年奶牛發情周期的任意一天（發情當天除外），進行陰道栓埋植（海綿栓組和孕酮緩釋陰道栓組）處理，并肌肉注射EB（2mg），P4（100 mg/50 mg）。放栓當天為0 d，第4 d開始超排處理，采用加拿大進口Folltropin-V，遞減法連續4d肌肉注射FSH 320 mg；超排處理的第3 d上午肌肉注射氯前列烯醇2支(0.4 mg),下午撤出陰道栓。
1.2.3發情觀察、輸精和采卵
在注射PGF2α 后36 h開始觀察發情，每4 h觀察一次發情，每次觀察30 min。以供體母牛接受爬跨并站立不動為發情判定標準，另外伴隨母牛全身出汗等特征，做好發情開始和發情持續期的記錄。于供體牛發情后8~12 h進行第一次輸精，間隔12 h第2次輸精。7 d后應用非手術法回收胚胎。對回收的胚胎進行鏡檢，質量鑒定并分級，合格的A、B級胚胎冷凍保存。統計回收胚胎的總數、可用胚胎數、變性胚胎數和未受精卵數。
1.3統計分析
試驗數據采用Excel生物統計學軟件進行統計分析，PGF2α處理后的發情時間間隔對比，頭均獲胚數，頭均可用胚數等顯著性檢驗均采用t-檢驗。

2.結果和分析
2.1不同陰道栓和P4對同期發情效果的影響
由表1看出，試驗組中的71頭荷斯坦青年奶牛在PGF2α處理后全部表現發情，發情率達到100%，這說明應用陰道栓+PGF2α方法誘導奶牛同期發情可以使超排牛同期發情率達到100%。不同的試驗組奶牛的發情開始時間和持續時間存在顯著差異（P<0.05）：海綿栓組在PGF2α處理后48.3 h左右開始表現發情，且發情集中程度較高；孕酮緩釋陰道栓組在PGF2α處理后39 h左右表現發情，發情相對集中(圖1)。但是，每個試驗組中不同濃度的P4處理對發情開始時間和持續時間并沒有顯著影響（P>0.05）。





表1 兩種陰道栓的同期發情效果
table 1 the effect of estrus synchronization between two vaginal-bolt
項 目 the item        組別 group        孕激素劑量 doses of progesterone(P4,mg)        平均值 average
                50        100       
奶牛頭數 cattle number        BI        20        16        —
        PRD        19        19        —
發情率 estrus rate (%)        BI        100        100        100
        PRD        100        100        100
發情時間c  estrus time (h)        BI        47.9a        48.9a        48.3
        PRD        38.2b        39.8b        39.0
注：a ,b 不同表示不同組間差異顯著，P<0.05;c表示PGF2α處理后到奶牛發情的時間間隔，BI表示海棉栓組，PRD表示緩釋陰道拴組。note: different letters(a and b) within a row mean a significant difference for animals(P<0.05)；c means intervals from PGF2α  treatment to estrus(h) ,BI stands for the group of  sponge blot(BI), PRD stands for the group of progestin release device (PRD)










圖1 PG處理后的發情時間和發情率
fig.1 the time and rate of oestrus after PGF2α treatment
注：A，50 mgP4海綿栓組；B，100 mgP4海綿栓組；C，50 mgP4孕酮緩釋陰道栓組；D，100 mgP4孕酮緩釋陰道栓組, a ,b 不同表示不同組間差異顯著，P<0.05。note: A, the sponge blot group of 50 mgP4; B, the sponge blot group of 100 mgP4;
C, the progestin release device group of 50 mgP4; D, the progestin release device group of 100 mgP4

發情同期性與陰道栓孕酮釋放穩定性有關，穩定性越好，發情同期性越高。對比兩種不同陰道栓的發情效果，說明兩種陰道栓的孕酮釋放相對穩定，發情同期性高。但是，孕酮緩釋陰道栓組比海綿栓組提前發情10h左右，這可能是由于孕酮緩釋陰道栓釋放孕酮含量低，造成撤拴后孕激素濃度提前降低到基準水平，卵泡迅速生長，并比海棉栓組提前達到排卵卵泡，雌激素濃度迅速上升，從而提前發情。
Taft et al (1996) 報道，孕激素在行使功能時候，通過直接途徑（作用于卵巢，芳香化酶作用）和間接途徑（作用于LH）來實現。超排期間，應用陰道栓來人為提高奶牛血漿中孕激素水平，從而抑制優勢卵泡的發育，解除優勢卵泡對從屬卵泡的抑制作用，使更多卵泡發育為優勢卵泡。但是，處理時不同的孕激素濃度會導致不同的同期發情效果，Richardson et al (2002) 用三種不同的方法進行同期發情（P4+PGF2α組，GnRH+PGF2α組，GnRH+P4+PGF2α組），結果GnRH+PGF2α組最先發情，提前12h左右。該試驗通過比較發情前期不同孕激素水平得出，孕激素處理組在撤拴當天血漿中的孕激素濃度要高于對照組，而雌激素濃度要低于對照組。較小卵泡的奶牛從撤拴到發情開始的間隔時間要長于有較大卵泡的奶牛。卵泡生長速率與LH峰頻率有關，當孕激素濃度處于低水平時，LH峰頻率加強，卵泡就有較高的生長速率。Utt et al (2003) 報道，第一個卵泡波卵泡的生長速率快于第二個優勢卵泡波，主要是因為第一個卵泡波的孕激素濃度低的原因，第一個卵泡波處于早期黃體期間，而第二個卵泡波處于中期黃體期間。本試驗中，由于國產孕酮緩釋裝置釋放孕酮含量低，造成撤拴后孕激素濃度提前降低到基準水平，卵泡迅速生長，并比對照組提前達到排卵卵泡，雌激素濃度迅速上升，從而提前發情。
2.2不同陰道栓和不同的P4劑量對超排效果的影響

表2 兩種陰道栓的超排結果
table 2 the superovulatory results of the two vaginal-bolt
項 目the item        組別 group        孕激素劑量 doses of progesterone(P4,mg)        平均值 average
                50        100       
奶牛頭數 cattle number        BI        20        15        —
        PRD        19        17        —
獲胚數 embryo number        BI        272        189        —
        PRD        167        146        —
胚/ 頭 average embryo number        BI        13.6a        12.6a        13.2a
        PRD        8.8b        8.6b        8.7b
受 精 卵 / 頭average fertilized embryo        BI        11.4a        10.1a        10.8a
        PRD        4.5b        4.9b        4.7b
可 用 胚 / 頭average useable embryos        BI        5.6a        5.9a        5.7a
        PRD        3.4b        3.1b        3.3b
注：a ,b 不同表示不同組間差異顯著，P<0.05;BI表示海棉栓組，PRD表示緩釋陰道拴組。note: different letters(a and b) within a row mean a significant difference for animals；BI stands for the group of  sponge blot(BI), PRD stands for the group of progestin release device (PRD)

由表2可看出，海綿栓組（50mgP4/100mgP4）和孕酮緩釋陰道栓組（50mgP4/100mgP4）頭均獲胚數分別為13.6、12.6、8.8和8.6枚，每個實驗組中不同孕激素水平的頭均獲胚數沒有顯著差別（P>0.05），兩個實驗組之間的差異極顯著（13.2：8.7枚，P<0.05）。海綿栓組（50mgP4/100mgP4）和孕酮緩釋陰道栓組（50mgP4/100mgP4）頭均受精卵數分別為11.4、10.1、4.5和4.9枚，每個試驗組中不同孕激素水平的頭均受精卵數沒有顯著差別（P>0.05），兩個實驗組之間的差異極顯著（10.8：4.7枚，P<0.05）。同樣，海綿栓組（50mgP4/100mgP4）和孕酮緩釋陰道栓組（50mgP4/100mgP4）的頭均可用胚數分別為5.6、5.9、3.4和3.1枚，每個試驗組中不同孕激素水平的頭均可用胚數沒有顯著差別（P>0.05），兩個實驗組之間的差異極顯著（5.7：3.3枚，P<0.05）。   
應用國產海綿栓組的超排效果明顯高于國產孕酮緩釋陰道栓組，孕酮緩釋陰道栓組的超排結果在獲胚數，頭均受精卵數和頭均可用胚數上要顯著低于國產海綿栓組（P<0.05），這主要與國產孕酮陰道栓的孕激素釋放量有關。由于孕酮緩釋陰道栓的孕激素釋放量較小，使得供體奶牛的體內孕激素水平較低，不能抑制優勢卵泡的生長，優勢卵泡的生長產生大量雌激素，導致奶牛提前發情；并且，優勢卵泡的生長抑制了其它從屬卵泡的生長，使得從屬卵泡不能充分發育，在發情后不能排卵，從而減少了頭均獲胚數和頭均可用胚數。
Savio et al.(1993)報道，持久卵泡的出現會降低受精率，持久卵泡會導致早期胚胎發育畸形率提高和無精卵的出現。持久卵泡的出現可以改變卵泡中雌激素水平，使其濃度升高，這樣就改變了卵子的成熟和輸卵管功能，從而降低超排效果。Austin et al (1999) 研究發現，在撤拴時雌激素水平高的提前發情。優勢卵泡持續期越長，雌激素水平越高，越容易提前發情。但是，當優勢卵泡持續期2-4天時，發情不同步，不能達到一個很好的發情效果。高水平的外源孕激素可以減少持久卵泡的發生和降低雌激素的分泌水平。Wehrman et al (1993) 研究表明，持久卵泡的出現可以使青年牛提前發情10h左右。本試驗中，由于國產孕酮緩釋裝置釋放孕酮含量較低，不能充分抑制優勢卵泡的生長，產生持久卵泡，使得優勢卵泡分泌大量的雌激素，抑制其它從屬卵泡的生長，同時提前發情，導致其它從屬卵泡的生長時間較短，不能達到排卵卵泡，降低了超排的頭均獲胚數，頭均受精卵數和頭均可用胚數，影響了超排效果。
苯甲酸鈉雌二醇（EB）和孕激素（P4）的聯合使用可以誘導奶牛新的卵泡波的出現，這在大量研究中都有報道。Caccia and B6 (1998) 報道，使用2.5mgEB+50mgP4+CIDR可以在3-4天內成功誘導新的卵泡波的發生， B6 et al (2002) 使用2.5mgEB+50mgP4成功地對奶牛進行超排，超排效果與傳統的8-12天自然發情后進行超排的效果沒有顯著差異。Mapletoft et al. (1999) 使用5mgE-17β+100mgP4對奶牛進行超排并取得理想的超排效果。本試驗采用兩種不同孕激素水平（50mg，100mg）來誘導新的卵泡波。本實驗中，兩種孕激素水平對超排牛的同期發情效果和超排效果都沒有顯著差異（P<0.05），這說明50mg的孕酮肌肉注射和苯甲酸鈉雌二醇（EB）聯合使用就可以成功誘導新的卵泡波的發生，達到較好的超排效果。

參考文獻：
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Caccia, M, and G.A.Bo’. Follicle wave emergence following treatment of CIDR-B-implanted beef heifers with estradiol ben-zoate and progesterone. Theriogenology 1998, 49:341.
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Effect of EB+P4+Vaginal-bolt on Superovulation of Holstein Heifers
Duan Bao-ning1,2 , Xue Jian-hua3, Zhang Xin-hui3,Wu Sheng-quan3, Sun Feng-jun3, Sang Run-zi1,2
1. Animal Science and Technology College of the Agriculture University of Hebei.2.The Research Centre of Cattle and Sheep Embryonic Technique of Hebei, Baoding of Hebei,071001.3.The embryo department of Beijing Dairy Cattle Center.
Abstract: The Follicular wave of Holstein heifers was induced by estradiol benzoate (EB), progesterone (P4) and vaginal-bolt in order to study the effect of P4 with different doses and different types of vaginal-bolt on inducing of new follicular wave, estrus synchronization and superovulatory results. The results showed that the interval of the sponge blot (BI) group from PGF2α treatment to estrus was 48.3h, and that of the progestin release device (PRD) group was 39h, there were significant differences between the two groups (P>0.05). The average number of obtained embryo for BI group (13.2) was significantly higher than that (8.7) of PRD group (P < 0.05), and the average number of useable embryo of BI group (5.7) was also significantly higher than that (3.3) of PRD group (P < 0.05). The P4 injection dosage of 50 and 100 mg could induce new follicular wave efficiently, and there was no significant difference on estrus synchronization and superovulatory results between the BI and PRD groups (P > 0.05).
Key word: EB; P4; vaginal-bolt; Superovulation

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