地錦草對老齡小鼠不同組織SOD和MDA的影響

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地錦草對老齡小鼠不同組織SOD和MDA的影響 宮新城，陳福星，宋春麗，周平平，趙麗娟，鐘秀會 河北農業大學中獸醫學院， 河北定州 073000

摘要采用給小鼠內服地錦草水煎劑的方法，研究了地錦草對老齡小鼠不同組織超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的影響，發現血清、肝中SOD的活性明顯高于對照組（P<0.05），脾、腎、心組織中SOD的活性明顯高于對照組，差異極顯著（P<0.01）；且地錦草水煎液可以使小鼠肝、心、脾中MDA的含量明顯降低， 差異極顯著（P<0.01）。可見地錦草能夠提高老齡小鼠的血清、心臟、肝臟、脾臟、腎臟的抗氧化能力。 關鍵詞：地錦草；超氧化物歧化酶；丙二醛 地錦草（Euphorbia humifusa Willd.）系大戟科植物，為常用中藥材，具有清熱解毒、涼血止血、利濕通乳等功效[1，2]，近10年來,人們對地錦草的化學組成及其生物學活性的研究取得了重大進展。李寶山等測定了地錦草總黃酮(TFEH)在體外對自由基的清除率和抑制率，結果表明,TFEH具有很強的清除和抑制自由基的作用[3]。本文以老齡小鼠為研究對象，觀察了地錦草對小鼠不同器官的抗氧化作用。 1 材料與方法 1.1 試驗材料 1.1.1供試中草藥地錦草 購自河北省定州市中藥大藥房，經鑒定為真品后備用。 1.1.2供試動物 昆明系小鼠20只，30周齡，雌雄各半，購自河北醫科大學試驗動物中心，常規飼養3天，觀察無異常備用。 1.1.3主要試劑 超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒、丙二醛（MDA）測定試劑盒（附標準蛋白）均購自南京建成生物工程研究所。 1.1.4主要儀器 UV-9100型紫外分光光度計 購自北京瑞利分析儀器公司 1.2試驗方法 1.2.1分組及處理 將20只小鼠隨機分成兩組，即對照組和試驗組，每組10只.試驗組每天灌服0.5毫升地錦草水煎液，對照組每天灌服等量的生理鹽水，連續灌服7天. 用眼科鑷摘除眼球收集血液，分離血清；同時解剖小白鼠，分別取其肝臟、脾臟、心臟和腎臟。 1.2.2組織勻漿的制備 取200mg左右的組織塊在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙試干，用移液器量取9倍于組織塊質量的預冷勻漿介質(0.86%的生理鹽水)用移液器取總量的2/3于燒杯中，用眼科剪盡快剪碎組織塊. 將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質沖洗殘留在燒杯中的組織碎塊，一起倒入勻漿管中進行勻漿， 用勻漿管在冰水中勻漿15min，普通離心機3500rpm離心15min，取上清夜備用。 1.2.3超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的測定 嚴格按照SOD和MDA試劑盒操作說明進行測定。 2結果 2.1 地錦草水煎液對小鼠超氧化物歧化酶（SOD）的影響 由試驗結果可以看出，給老齡小鼠灌服地錦草水煎劑后，小鼠血清、肝中超氧化物歧化酶（SOD）的活性明顯高于對照組，差異顯著（P<0.05）；而脾、腎、心等組織中超氧化物歧化酶（SOD）的活性變化更明顯，試驗組明顯高于對照組，差異極顯著（P<0.01），詳見表1。 表1地錦草對小鼠SOD活力的影響 組別 血清 （Ｕ/ml） 肝 （Ｕ/mg） 脾 （Ｕ/mg） 腎 （Ｕ/mg） 心 （Ｕ/mg） 對照組 32.68±18.67 92.60±16.72 19.47±16.78 24.48±16.52 20.52±7.52 試驗組 48.77±12.34* 110.4±13.35* 36.97±11.42** 46.03±10.22** 39.83±13.28** 注：*表示與對照組比較差異顯著（P<0.05） ** 表示與對照組比較差異極顯著（P<0.01） Ｕ/ml 表示每毫升血清所含的活力單位 Ｕ/mg表示每毫克蛋白所對應的活力單位 2.2 地錦草水煎液對小鼠MDA的影響 由試驗結果可以看出，地錦草對小鼠血清中丙二醛的含量沒有影響，地錦草水煎液試驗組和生理鹽水對照組間比較，差異不顯著（P>0.05）；而對腎中丙二醛的含量有明顯的作用，可以降低其含量，差異顯著（P<0.05）；地錦草水煎液試驗組小鼠肝、心、脾中MDA的含量更是明顯降低，和生理鹽水對照組間比較，差異極顯著（P<0.01）。詳見表2。 表2 地錦草水煎液對小鼠各組織丙二醛（MDA）含量的影響 組別 血清 （nmol/ml） 肝 （nmol /mg） 脾 （nmol /mg） 腎 （nmol /mg） 心 （nmol /mg） 對照組 12.53±3.58 47.42±8.17 50.39±8.33 33.52±2.62 76.06±14.96 試驗組 12.11±2.43 32.51±4.34** 36.01±11.91** 28.46±7.43* 47.07±10.71** 注：*表示與生理鹽水對照組比較，差異顯著（P<0.05） ** 表示與生理鹽水對照組比較，差異極顯著（P<0.01） nmol/ml表示每毫升血清所含MDA的量 nmol/mg表示每毫克蛋白所對應的MDA的量 3討論 3.1地錦草對小鼠體內SOD活性的影響 SOD是體內催化歧化反應的一種抗氧化保護酶，此酶廣泛的存在于各種生物中。SOD對機體的氧化和抗氧化平衡起著重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基（O2-）保護細胞免受損傷。而超氧陰離子自由基（O2-）是機體細胞在受到刺激作用后產生的含氧的自由基，由于其外層電子不配對，故其化學性質十分活潑，極易對生物大分子發生氧化反應，改變或破壞生物大分子結構的完整性而引起多種疾病[4，5]。因而SOD活力的高低與衰老、腫瘤、炎癥、自身免疫病、血液病、心血管病、腎臟病、消化系統病、輻射藥物作用有密切關系。如能找到理想的抗氧化藥物對此類病的治療將非常有益。皮文霞等認為糖尿病的發生是由于體內氧自由基的積蓄過多，山茱萸環烯醚萜總苷可以通過提高SOD活性起到治療作用[6]。本試驗旨在測定地錦草對小鼠SOD活力的影響和MDA含量的變化來檢測地錦草的抗氧化能力，為其臨床應用提供科學依據。試驗結果表明地錦草能顯著提高小鼠血清、心、肝、脾、腎中SOD的活性，和生理鹽水對照組相比，差異顯著（P<0.05），且脾、腎、心三項和對照組相比，差異極顯著（P<0.01）。說明地錦草能顯著增強對超氧陰離子自由基（O2-）的清除能力，保護細胞免受損傷。李寶山等也報道地錦草在體外實驗中具有很強的清除和抑制自由基的作用，抗氧化的強度：地錦草>藍盆花>蕊芭>廣棗>多葉棘豆，并且認為地錦草等的消腫、止血、傷口愈合等藥理作用可能與其清除自由基的作用有關[7]。還有報道認為地錦草抗氧化的主要成分是黃酮類，且對O2-的作用大于·OH-，對MDA的生成也有一定的作用[3]。曹瑞珍等報道地錦草還可以通過提高體內過氧化氫酶的活性進一步將由SOD歧化·O2-產生的H2O2轉變為H2O和O2，避免毒性更大的·OH-的產生，減輕和阻斷脂質過氧化作用的一級引發，保護機體免受有機氫過氧化物的侵害，延緩細胞的衰老，從而防止自由基引發的疾病[8]。也有人認為自由基在DNA的損傷過程中起著非常重要的作用，尤其是OH-引起的DNA氧化損傷更令人關注[9]，而DNA的氧化損傷是引起衰老、癌癥等疾病的重要原因之一[10，11 ] 而地錦草中的黃酮類、脂肪酸、鞣質等可以通過抗氧化作用使DNA免受氧化損傷[12]。 3.7地錦草對小鼠體內MDA的影響 丙二醛（MDA）是機體通過酶系統和非酶系統產生氧自由基，而氧自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發脂質過氧化作用，并因此生成的脂質過氧化物。生物膜是生命系統中最容易發生脂質過氧化的場所，生物膜主要是由磷脂組成的，而多不飽和脂肪酸又是磷脂的主要組分。當生物膜的脂質發生過氧化作用后，其流動性必然發生改變，嚴重時，其生物活性喪失，如能量轉換，物質運送，信息傳遞，細胞分裂和融合等都不能正常發揮[4]。脂質過氧化作用的最后產物主要是丙二醛（MDA），因此丙二醛的量常被用作做脂質過氧化的量度。并且丙二醛還可以與蛋白質分子的氨基發生作用導致多肽鏈的鏈內交聯和鏈間交聯，還能與蛋白質的巰基反應，修飾了的蛋白質和酶將失去他們的生物活性，導致代謝異常，甚至死亡[4，5]．同時也可以引起膜蛋白共價交聯與聚合，使膜蛋白處于永久性締合狀態，嚴重限制了膜蛋白在膜平面上的運動性，也可以導致膜功能的異常。因而對于抗氧化試驗測定丙二醛的含量將非常有意義，其含量常可以反應機體內脂質過氧化的程度，間接的反應出細胞損傷的程度。本試驗旨在測定地錦草對小鼠MDA的影響，以了解地錦草保護細胞受損傷的程度．從試驗結果看，地錦草能顯著抑制MDA的產生，尤其是在肝、脾、心的組織中，明顯低于對照組，差異極顯著（P<0.01）．說明地錦草具有明顯的抗氧化能力，使小鼠的細胞膜免受損傷，其中一個主要的原因可能就是SOD活力顯著提高，大大增強了清除和抑制氧自由基的能力，從而使MDA的產生減少。可見地錦草如能應用于臨床治療由于過氧化損傷引起的各種疾病，將有很大的應用前景。