藥敏實驗的病原菌如何培養？

wangyanzhensuo

請大家幫幫忙！我對病原菌的培養不會！請幫助！:huahua:

⒉冄⑧號

是臨床上做藥敏嗎 直接那動物細菌多的地方涂到平皿上就可以了

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用瓊脂培養基平皿培養！

l24029789

培養基會做吧? 最簡單的辦法就是留肝 用肝在培養基上涂一層,之后放好藥敏片,放入恒溫箱,過6小時→OK

l24029789 于 2009-10-9 18:30 補充以下內容

如果你需要培養基的配方 可以留言

anfu123

啥方？可以分享分享嗎？

風1119

體外抗菌藥物敏感試驗
一、抑菌試驗
試驗方法主要有定性測定的紙片瓊脂擴散法（disk agar diffusion tesk, Kirby-bauer tesk）、定量測定的稀釋法（dilution tist）和E試驗法（E-test）。
(一) 紙片瓊脂擴散法
1.基本原理   
將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后不斷地向紙片周圍區域擴散，形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內待檢菌的生長被抑制，從而產生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映檢測菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負相關，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
2.試驗方法
⑴ 培養基的制備
普通營養瓊脂培養基：可去生化試劑店購買。做不同細菌的藥敏試驗可選擇不同的培養基。
⑵ 藥敏片的制備
① 藥敏片的制備
取新華1號定性濾紙，用打孔機打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經15磅15-20分鐘高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數天，使完全干燥。
    ② 抗菌藥紙片制作
在上述含有50片紙片的青霉素瓶內加入藥液0.25毫升，并翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動紙片時不能將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內過夜，干燥后即密蓋，如有條件可真空干燥。切勿受潮，置陰暗干燥處存放，有效期3-6個月。
    ⑶ 試驗方法
① 于純培養平板上，挑取相同的菌落4～5個（圖12-1a）。
② 接種于3～5ml水解酪蛋白（Mueller-Hinton,MH）肉湯中，經35℃培養6～8h(圖12-1b)。
③ 用無菌生理鹽水或MH肉湯校正菌液濁液，使其與標準比濁管的濃度相同(圖12-1c）。校正過的菌液（一般為0.5麥氏單位）在15min內接種完。
④ 用無菌棉拭蘸取校正過的菌液，在試管壁上擠壓幾次，壓去多余的菌液，涂布整個MH平板表面，反復數次，每次旋轉平板60°(圖12-1d)，使整個平板涂均勻。
⑤ 涂布菌液的平板于室溫中干燥3～5min后，用紙片分配器或無菌鑷子取藥敏紙片，貼于平板表面，并用鑷子輕壓一下紙片，使其貼平。每張紙片的間距不小于24mm，紙片的中心距平板的邊緣不小于15mm，90mm直徑的平板宜貼6張藥敏紙片(圖12-1e)。（6）將貼好紙片的平板置35℃培養18～24h后，用標尺量取抑菌圈直徑(圖12-1f)。
3.結果判斷　
根據抑菌圈的大小（不同抗生素其抑菌圈大小的標準不一致），判斷為敏感（S）、耐藥（R）或中度敏感（I）。某些細菌可蔓延生長至某種抗生素的抑菌圈內，如磺胺抑菌圈內可能有微量的細菌生長，可忽略不計，應以外圈為準。
   
(a)                                             (b)                          (c)
   
(d)                                  (e)                             (f)
圖12-1　　Kirby-Bauer法試驗程序
（a）挑取菌落（b）轉種肉湯（c）比濁（d）涂布平板上（e）放置藥敏紙片（f）量取抑菌圈大小
（二）試管稀釋法
即最低（或最小）抑菌濃度（minimal inhibitory concentration,MIC）的測定。
1.基本原理　
在肉湯中將抗菌藥物進行一系列（對倍）稀釋后，定量接種待檢菌，35℃培養24h后觀察，抑制待檢菌肉眼可見生長的最低藥物濃度，即為該藥物對待檢菌的最低抑菌濃度。
2.試驗方法　
取無菌試管26支，排成兩排。另取3支試管，分別作為肉湯對照管、待檢菌生長對照管和質控菌生長對照管。每管加入MH肉湯2ml，在第1管加入經MH肉湯稀釋的藥物原液（256mg/L）2ml混勻，然后吸取2ml至管2管，混勻后再吸取2ml至第3管。如此連續對倍稀釋至第13管，并從第13管中吸取2ml棄去。此時各管含藥濃度依次為128、64、32、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg/L。第1排試管每管加入待檢菌菌液（1×107菌落形成單位（CFU）/ml）0.1ml，第2排試管每管加入標準菌菌液（1×107菌落形單位(CFU)/ml）0.1ml，最終接種菌量約為5×105 CFU/ml。置35℃培養箱中培養18～24h。觀察有無細菌生長。
3.結果判斷　
藥物最低濃度管無細菌生長者（對照管細菌生長良好），即為待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）。(圖　12-2)

圖12-2  MIC測定的試驗結果
左起第四管為藥物最低濃度而無細菌生長，即待檢菌的MIC。
（三）E試驗法
1.基本原理　
該方法結合擴散法和稀釋法的原理和特點，操作簡便如擴散法，但可以同稀釋法一樣直接定量測出藥物對待檢菌的MIC。其試條為商品化塑料試條，長50mm,寬5mm，內含干化、穩定、濃度由高至低呈指數梯度分布的某種抗菌藥物。可用于各種常見菌、微需氧菌、分枝桿菌、厭氧菌和真菌等的藥敏試驗。酵母菌和霉菌的藥敏試驗是一項新的技術，由于影響因素較多，直接藥敏試驗為困難，E試驗法由于結果準確、穩定，受到認同。
2.試驗方法　
菌液、平板接種等同紙片瓊脂擴散法（厭氧菌、隱球菌和其他菌懸液濃度為1個麥氏單位，其他細菌為0.5個麥氏單位）。將E-test試條輕放在接種、干燥后的瓊脂平板上（90mm平板放置1～2條），置一定條件下培養：厭氧菌置厭氧環境培養48h，微需菌置5%～10%二氧化碳環境培養24～48h，隱球菌培養48～72h，其他細菌培養24h。
3.結果判斷　
培養后圍繞著試條可形成一個卵圓形的抑菌圈，抑菌圈與試條的橫向相交處的讀數刻度，即是該抗菌藥物對待檢菌的MIC。(圖12-3，圖12-4)

圖12-3　　E試驗示意圖

圖12-4 E試驗法的試驗結果
（a）常見菌的試驗結果（b）苛養菌的試驗結果（c）厭氧菌的試驗結果（d）酵母菌的試驗結果（e）真菌的試驗結果

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一般用營養瓊脂培養就可以。