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樓主: fangke3546
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請高手分析飼用植酸酶活性的檢測結果總是很低的原因。

[復制鏈接]
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發表于 2008-7-5 17:17:11 | 只看該作者
酶制劑檢測,導致誤差最大的因素就是底物和稀釋倍數。制定植酸酶行業標準的時候,對測定顯色的吸光值線性范圍規定得很大,這對測定未知樣時,會造成很大困惑。可以看看這篇
http://www.jmyingheng.com/   >技術交流>生物技術>《酶制劑檢測的非定義性因素的影響》一文。
  c 指的是回歸方程,這里一般是指一元方程y=ax+b。怎么由標準曲線求回歸方程恐怕你要查看書了。檢測方法以濃度對吸光值做圖,得到的c的單位就是umol/ml,以物質的量對吸光值做圖,得到的c的單位就是umol。

如果懷疑試劑有問題,就全部重配重買。
這些只能自己檢查-----pH增加pH精密試紙對照校正緩沖液、底物溶液。pH電計用標準液,看看配對了沒有?顯色劑配對了沒有?分光光度計有無偏差?植酸鈉底物是否有效?同時注意底物必須現配現用,不能使用超過12小時的底物溶液。
其他的可以把做標準曲線的測定值發來本站郵箱,就可知道回歸方程是多少。
    最好找已知酶活的樣品,做平行測定,可以知道是試劑問題,還是酶本身失活了。

[ 本帖最后由 tgz5637 于 2008-7-5 17:46 編輯 ]
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發表于 2008-7-7 09:19:17 | 只看該作者

回復 9樓 fangke3546 的帖子

回歸方程數值偏低,表明做標準曲線時,同一梯度標準樣液的測定吸光度值偏大;
查查什么原因導致吸光值偏大?顯色劑配制錯誤,分光度計平時是否常用,測其他產品有無問題?標準曲線至少5個數據點的相關性,要求達到 r=0.999。
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發表于 2008-7-7 22:59:19 | 只看該作者
很好的學習機會啊,我本來也要做這個實驗的,剛申請了藥品的,現在不用做了,由別人去做了,很有些遺憾哦.
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發表于 2008-7-16 11:37:18 | 只看該作者

木聚糖酶檢測

底物1%燕麥木聚糖經冰凍保存后取出,會產生沉淀,請問還能繼續使用嗎?
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 樓主| 發表于 2008-7-18 20:57:27 | 只看該作者
tgz5637能講講標準曲線的問題嗎
我做出來的系數這么與你的相差那么大啊,我的在18左右
另外我想問一下,牛血清白蛋白組分幾對檢測好一些?
謝謝
16
發表于 2008-7-19 15:56:09 | 只看該作者
直接把標準曲線數據貼上來看看

關于標準曲線請看這個網址。http://www.esnips.com/nsdoc/5426 ... f0a/?action=forceDL
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發表于 2008-7-29 10:14:27 | 只看該作者

回復 5樓 tgz5637 的帖子

您的確是高手。受教了,非常感謝!
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發表于 2008-10-21 23:58:57 | 只看該作者
我想請問一下測植酸酶時標準曲線怎么繪制?怎樣來確定它的濃度范圍?酶樣的稀釋倍數又該如何確定?為什么最后都要使樣液保持在某一個濃度左右?謝謝!
19
發表于 2008-10-22 00:15:19 | 只看該作者
領教了!請問有沒有市場上幾大植酸酶公司產品的植酸酶活性的檢測數據(不是廠家提供的數據)?在此先謝謝了!
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發表于 2008-10-22 07:43:37 | 只看該作者
酶制劑活性測定通常有“測不準”原理,剛開始做的時候酶活總是不穩定,不過時間長了以后便會趨于穩定
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