重新認識偽狂犬病和撲偽佳（PR-Vac Plus）

農夫

重新認識偽狂犬病和撲偽佳（PR-Vac Plus）

劉志南   張立昌   （美國輝瑞動物保健品有限公司）     豬偽狂犬病（Pseudorabies, PR）是由偽狂犬病病毒（PRV）引起的豬和其它多種動物共患的急性和高死亡率的傳染病，豬可耐過急性感染而存活，成為病毒天然貯藏庫，而其它一些哺乳動物如牛、羊、狗感染常是致死性的。1902年在匈牙利由Aujeszky博士首次發現，故也稱Aujeszky’s disease（AD）。我國僅在1988-1995年間，廣東26個豬場發生，感染母豬19750頭，約占100多個集約化豬場母豬總數的30%。該病潛伏期為36小時-10天，一般3-6天。最重要傳播途徑是野毒感染的種豬引進，其次是通過鼠傳播，其它途徑包括空氣、鳥類、昆蟲、人、車輛等機械性攜帶。未免疫豬群，特征性的臨床癥狀，母豬和公豬表現繁殖障礙和呼吸道癥狀；哺乳仔豬表現為最急性，死亡率可高達100％；斷奶仔豬與哺乳仔豬相似，死亡率約為50％，主要表現為呼吸系統疾病癥狀，如果出現繼發感染，損失則會加劇，存活的仔豬日增重下降；育成育肥豬發病率可達100％，而死亡率約為2％，主要表現打噴嚏、流鼻涕、劇烈咳嗽、呼吸困難等呼吸道癥狀，成為豬群感染的病毒庫。特征性的病理變化在扁桃體、肝、脾、肺、淋巴結、腦等器官的壞死。    偽狂犬的控制包括兩個主要方面：生產管理和免疫。現就偽狂犬病的新視點及其控制與凈化技術等涉及的問題作如下解釋，以饗關系此問題的養豬生產者，并期望達到有效控制該病的目的。 1. 豬群流行或爆發偽狂犬，應如何使用輝瑞公司的撲偽佳（PR-Vac Plus）疫苗進行控制？     在我國，幾乎所有的規模化豬場都通過免疫手段控制偽狂犬病，如果仍流行或爆發偽狂犬病，則可說明生物安全不完善，或免疫保護不良。為了快速控制感染蔓延和減少生產損失，使用撲偽佳進行全群免疫，包括此后6周內出生的仔豬；4周后，種群再進行第2次免疫，包括所有公豬、母豬、后備種豬。請牢記：基礎免疫（兩次注射）對疫苗包括其它疫苗產生堅強保護至關重要。產前2周、已使用撲偽佳進行第2次免疫的母豬所產的仔豬，分別在10周齡（商品豬和選留種豬）和14周齡（僅選留種豬）免疫。臨床癥狀有望在完成基礎免疫后2周逐步改善、恢復，但死胎、木乃伊和弱仔，仍要持續一段時間。 2.在上述免疫程序中，為什么沒有使用滴鼻（IN）免疫？    如果豬群爆發偽狂犬病，作為緊急控制措施，3日齡的滴鼻免疫是一種選擇，因為母源抗體對免疫干擾輕微，保護產生時間快。但滴鼻不是緊急和常規控制措施的首選，因為：第一，滴鼻僅是局部的粘膜免疫，保護持續時間短，僅為3-4周。這樣，需要再次滴鼻免疫和后期的肌肉注射；第二，在偽狂犬疫苗普遍使用的今天，豬群爆發偽狂犬病的現象不多見；第三，即使爆發或流行偽狂犬病，采用肌肉注射的途徑，也會產生快速的保護（36小時），此結果雖然從免疫機理無從解釋，但從現場（上海、浙江等）實踐得到了證實；第四，在豬群良好的免疫狀態下，3日齡的滴鼻免疫是不必要的，也是一種資源的浪費（資金和人工），除非母源抗體保護不堅強（即母豬原來使用的偽狂犬疫苗保護不良），這也是歐美等國家不普遍采用滴鼻免疫的原因，因為如果使用同一疫苗既免疫母豬，又要推薦滴鼻免疫仔豬，則證明該疫苗產生的母源抗體不能給仔豬提供堅強的保護。因此，從養豬者的生產成本和控制的效果出發，如按推薦的程序，使用撲偽佳免疫種豬，即可給仔豬提供堅強而持久的保護，70日齡內的仔豬，不必作任何免疫，包括滴鼻。需要說明的是，撲偽佳毒株高度安全，可用于滴鼻免疫，但由于配以含油佐劑稀釋液，故不推薦此方法。 3.如何保證豬群遠離偽狂犬病的困擾？     作為偽狂犬病的綜合防制措施，主要包括兩個方面：第一，良好的生產管理和完善的生物安全體系。如豬場的選址和豬舍的布局（兩點或三點式）、生產流程（嚴格的全進全出－AIAO）、引進無PRV種豬或精液入場，上述三方面最重要。還有環境控制（溫濕度、通風、消毒），防止外界車輛、鳥類、野生動物、人的攜帶及飼料污染，定期監測和及時淘汰PRV陽性種豬等；第二，免疫。優質疫苗的選擇和合理的免疫程序，二者缺一不可。從某種意義上講，第一方面更應得到重視。 4.如何有效利用血清學監測方法？    血清學診斷，應用于豬群健康監測，有其快捷、準確等優勢，尤其是ELISA方法，特異性高、重復性好。但在我國眾多的監測實例中，在以ELISA檢測偽狂犬抗體時，以OD值或S/N值來判定免疫抗體水平的高低和免疫效果，從而指導豬場的疫苗選擇和免疫程序。此錯誤的認識，正在給豬場的免疫帶來極大的危害。事實上，如果以gE缺失的偽狂犬疫苗免疫豬只和使用鑒別診斷ELISA方法，S/N值的高低僅表示陰性或陽性（野毒感染），這是血清學檢測上的誤區。而對于檢測上的缺陷，不總能區分野毒抗體和疫苗抗體，這使檢測失去了真正意義；而且，檢測陽性，僅能表示感染（包括疫苗免疫），與現在存在的主要疾病問題無必然的因果關系；再有，如果不能將不同階段的豬分開，如基礎母豬和公豬、后備種豬、斷奶仔豬、育成育肥豬，就無法確知該病在豬群中的流行情況，包括病原循環在哪個日齡階段、傳播和感染時間等。因此，常規監測確定豬群有無偽狂犬野毒感染，30份血清樣本，分布在基礎母豬和公豬、10周齡和60-70Kg育成育肥豬，以gE-ELISA檢測。免疫效果的衡定可采用血清中和試驗（SN）方法，但要記住，偽狂犬病的免疫保護是以細胞免疫為主。 5.不同疫苗毒株，在應用過程中，是否會出現基因重組？     首先，用于疫苗生產的毒株，其毒力減弱，不單純是基因缺失的結果，還有可穩定遺傳的變異了的病毒結構蛋白；其次，從理論上講，基因缺失的偽狂犬病毒存在修復即重組的可能，但從世界范圍的應用實際結果看，目前尚無此報道；再次，用于生產疫苗的毒株均為致弱的毒株，不會在豬群中傳代。即使在個體中發生重組，危害也會很有限；最后，如果重組，其基因片斷也是來自野毒，說明豬群有野毒感染，而野毒感染帶來的危害遠比極小可能疫苗重組后的更嚴重。因此，使用標記基因（gE）缺失的偽狂犬弱毒疫苗是控制偽狂犬整個方案中最重要一環。 6.gE、gG、TK和rr基因的作用是什么？對疫苗的免疫原性和安全性有何影響？     gE（gI）為全球通用的標記基因，缺失后，會降低毒力；gG（gX）為編碼基因，對PRV病毒復制不是必須的，與毒力也無關系。缺失后，用于美國早期診斷，由于其鑒別診斷特異性的局限性，已不用此基因作為標記基因；TK（Thymidine kinase，胸腺嘧啶核苷激酶），與病毒毒力有關，控制PRV在神經組織內復制；rr（Repeat region）為重復基因，功能尚不完全清楚，有資料顯示與毒力有關。根據免疫機理，疫苗毒株與野毒在結構上越相似越有利于免疫系統產生特異性保護，在充分保證安全性的前提下，力求疫苗毒株的完整性，以提高疫苗的免疫原性。撲偽佳就是在此標準下開發研制的。 7. 既然育肥豬單純感染偽狂犬病毒后的死亡率不超過2％，為何還需要免疫？可否免疫0.5頭份？     眾所周知，在一個偽狂犬野毒感染的豬群，如果育成育肥豬沒有免疫，感染率可高達100％，但在無繼發感染的情況下，死亡率不會超過2％，這是不重視在此階段危害的一個重要原因。感染的育成育肥豬，臨床上主要是以呼吸系統疾病為主，表現咳嗽、打噴嚏、呼吸困難等，這些豬，日增重和飼料轉換率都會明顯降低，從而帶來嚴重的經濟損失。在美國，一頭感染的豬，損失約為12美元。另外，感染的育成育肥豬，也變成了病毒貯藏庫，猶如定時炸彈，隨時危害其它豬只。鑒于此種種原因，種豬場選留的后備種豬，分別在10周齡和14周齡免疫兩次；商品豬，在10周齡免疫一次。    疫苗的免疫原性和免疫劑量是成功免疫的基礎。由于不良的注射技術或主觀上故意減少劑量，均會造成免疫失敗。認識上的誤區，認為豬越小，免疫劑量越小。而事實上，豬只年齡越小，免疫系統發育越不健全，又有母源抗體對后天免疫的干擾，若不給予足夠劑量的疫苗抗原，難以有效地刺激機體免疫系統，產生良好的免疫保護。因此，0.5頭份的劑量不可取。 8. 撲偽佳的安全性如何？懷孕母豬可以免疫嗎？如何看待可能的副作用？      在我國對生物制品管理越來越嚴格、各項法規越來越完善的今天，得到農業部注冊本身就證明撲偽佳是安全的，這包括疫苗毒株（Buk）和佐劑（Amphigen—愛菲金），這是其一；其二，撲偽佳原始毒株分離于羅馬尼亞布加勒斯特（Bucharest），捷克的R. skoda和華盛頓州立大學Berger博士用雞胚致弱此病毒；最后，美國輝瑞公司1975年6月26日從普度（Purdue）大學獲得此毒株，并用于疫苗生產。通過近30年的應用實例，證明該疫苗具有高度安全性，包括對妊娠各階段的母豬和各日齡豬只。當然，有一點需明確的是：由于懷孕早期和后期的母豬對任何外來刺激均表現較強烈的不良反應，如短暫的體溫升高、采食量下降、甚至流產。撲偽佳毒株和愛菲金佐劑對免疫健康動物是高度安全的，無任何不良反應。但免疫臨床非健康豬只，或處于某些傳染性疾病的潛伏期、營養不良或有寄生蟲感染、運輸或環境應激、免疫抑制性藥物的應用，及未按標簽上說明進行疫苗接種等情況，可能會加劇上述不良反應。作為一個負責任的公司，對這種小概率事件，已明確提請使用者注意。況且，免疫本身就是機體的一個炎性過程，而免疫保護往往與機體的反應是密不可分的。這種反應包括機體的免疫應答及伴發的臨床副作用。即使如此，應在保證充分的免疫效果的前提下，盡可能降低因此而帶來的負面影響。此平衡往往由佐劑來掌控，即在提高免疫效果時，而些許放寬了可能的副作用。 9. 免疫反應和保護是如何建立的？    抗原遞呈細胞（APCs）如巨嗜細胞生存于動物的血流和免疫系統內；APCs與抗原接觸和加工，并在主要組織相容性復合物(MHC)分子的參與下，在APCs表面把抗原提呈給輔助性T細胞，從而啟動機體免疫反應；輔助性T細胞將疫苗抗原信息傳遞給動物免疫系統的殺傷性T細胞和B細胞； 10、愛菲金（Amphigen）也是含油佐劑，與其它油佐劑有區別嗎？與水劑比較，優勢為何？ 愛菲金（Amphigen）佐劑含有高度純化的天然乳化劑卵磷脂和少量油（4.5％），卵磷脂它是由與組織細胞膜成分相似的生物相容性物質磷脂和糖脂組成，油滴被無刺激的卵磷脂包裹，賦予該佐劑具油劑和水劑的雙重優點，獨特之處在于對抗原的吸附面積增加、通針性好、可減少注射部位不良反應和組織損傷，且兼有與水劑同樣安全的特性；有助于抗原的吸收和處理，抗原通過脂質體結合到油滴上，此油滴與動物細胞膜有很好的生物相容性。因此，有助于巨嗜細胞向注射部位游走，有利于抗原呈遞細胞(APCs)對抗原的處理，及加工過的抗原結合到主要組織相容性復合物(MHC)分子上，同時，可增強激活記憶細胞；與其它佐劑相比，更有效激活輔助性T細胞和免疫系統。實驗證明，撲偽佳可產生良好的體液免疫和細胞免疫。其它油佐劑，含油量介于10-20％，如果純化不良，極易引起注射部位的炎性反應，甚至壞死和全身的不良反應，而且，注射費力。水性佐劑，不會加強疫苗的免疫原性。 11.    目前，哺乳仔豬無明顯死亡和神經癥狀，剖檢無特征性的肉眼病變，為什么不能完全說明偽狂犬控制良好？    的確，偽狂犬特征性臨床表現是哺乳仔豬的高死亡率和神經癥狀，及壞死性病變。但在免疫的豬群，即使發生偽狂犬病，這些表現可能看不到，況且，現場中，又常常被PRRS、圓環病毒（PCV2）和其它肺炎類疾病所掩蓋，更有甚者，與附紅細胞體感染相混淆，又增加了對該病診斷的難度。其后果是忽略了對偽狂犬的控制，造成生產的嚴重損失而又把責任推在PRRS、PCV2等疾病身上。從大量的病理學診斷結果和采取的相應控制方案的成功，有力地說明上述觀點的真實性。因此，在你的豬群中，如果采取了大量的疾病控制措施而生產仍無明顯好轉，則應首先應考慮偽狂犬的控制效果，當然，還包括豬瘟。 12.    在比較各公司的偽狂犬疫苗后，發現撲偽佳的抗原含量僅為104.5 TCID50，能夠產生良好的免疫效果嗎？     首先需要明確的是，最低抗原量均需要經過大量的試驗來確定。各公司的偽狂犬疫苗因毒株不同，免疫原性差異也較大，最低的抗原含量也不同；其次，進口偽狂犬疫苗均需要當地獸醫主管部門如農業部和我國農業部的嚴格試驗和審批方可允許現場使用。輝瑞公司的撲偽佳也不例外，是在大量的試驗基礎上來確定的最低抗原含量，此含量已通過美國農業部和我國農業部批準并證明可產生最佳的免疫效果。而且，在近30年的應用和在美國偽狂犬病國家凈化方案中，撲偽佳發揮的作用也再次證實了該毒株具有的優異的免疫原性；最后，撲偽佳的抗原滴度，除與疫苗病毒株具有較高的免疫原性密切相關外，還與疫苗中使用了專利佐劑－愛菲金有關，愛菲金不但增加了吸附抗原的能力，而且吸附的抗原更易被抗原遞呈細胞（APC）識別、捕獲、加工處理，進而提高了T、B淋巴細胞對抗原的識別。因此，以疫苗中標識的抗原含量免疫豬只，能夠產生堅強的免疫保護，主動免疫保護可持續到豬出欄上市，包括高水平的血清中和抗體和良好的細胞免疫，能最大限度地降低PR引起的臨床癥狀和野毒排放時間、排放量。仔豬通過初乳可獲得8-12周的被動保護，切斷病毒的早期感染。減輕育成育肥豬的呼吸道癥狀，提高日增重，預防呼吸系統疾病綜合征（PRDC）的發生，減少該群體的散毒和整個豬群的感染壓力，為豬群偽狂犬的控制和凈化創造了先決條件。 13.    撲偽佳在美國國家偽狂犬凈化工程中，扮演的角色是什么？     自1976年11月3日偽狂犬病病毒布加勒斯特毒株被美國農業部批準用于生產疫苗，輝瑞公司使用此病毒株先后生產了PR-Vac和PR-Vac Plus（撲偽佳）兩種偽狂犬病弱毒疫苗，兩者只是稀釋液有所不同，撲偽佳使用了含愛菲金佐劑的稀釋液。經過近30年的使用，疫苗的安全性和效力得到了充分證實，在美國進行的豬偽狂犬病根除計劃中發揮了重要作用，這兩種疫苗至今在美洲、歐洲和亞洲仍有較大的市場份額。在豬偽狂犬病根除計劃的研究和實踐中，人們進一步認識到撲偽佳（含有佐劑）在豬偽狂犬病凈化中所表現的突出價值。試驗研究發現接種幾種偽狂犬病活疫苗都同樣能控制臨床病例的發生，但在抵御病毒再次感染的能力（免疫力的持續時間和病毒感染的劑量）和再次感染后排毒時間和排毒量上有明顯差異。撲偽佳抵御病毒再次感染的能力最好，再次感染后排毒時間最短，這在豬偽狂犬病免疫根除過程中是最重要的。 14.    撲偽佳是在哪個國家生產的？    作為世界第一大動物保健品公司，無論生產廠地設在何處，都是嚴格按照總部的生產規程進行產品生產的。每批產品都需經嚴格的檢驗，合格后方可出廠，因為對于輝瑞公司，信譽應是最重要的。 撲偽佳是在美國內布拉斯加林肯廠生產的。 15.    國產疫苗和進口疫苗能否搭配使用？    在我國有的豬場，種豬（母豬和公豬）使用進口偽狂犬疫苗免疫，而仔豬或育成豬則改用國產疫苗。此做法可以理解，其原因是為了降低生產成本。我們深入分析一下，種豬使用進口疫苗，是為了給種豬提供良好的保護，擔心國產疫苗無法達到此目的。既然對國產疫苗信心不足，就允許免疫其它豬只嗎？核算成本，如果使用國產疫苗，按推薦程序應免疫2次，計4ml，約3.0元。在與撲偽佳免疫效果接近的情況下，成本節約可忽略。故為了達到最佳的免疫保護效果，不建議采用此方式。 16.    根據我國偽狂犬病發生的實際情況，作為偽狂犬病控制的重要措施，推薦的凈化或控制免疫程序是什么？   一個完善的偽狂犬防制方案，應根據具體豬群的感染情況來制定。就免疫控制或凈化程序，應考慮生產布局、生產流程、現有的免疫程序和控制效果（gE抗體陽性率）、仔豬母源抗體的消失時間等因素。推薦的偽狂犬病凈化和控制程序如下： 日齡/階段 凈化程序 控制程序 仔豬 無母源抗體 3周齡免疫1次，4周后再免 3周齡免疫1次 有母源抗體 10周齡免疫1次，4周后再免 10周齡免疫1次 后備母豬 及公豬 自己選留 2次，間隔4周，首免在10周齡；第3次免疫在28周齡，以后同基礎母豬 外購 到場1周內首免，4周后再免。以后同種豬程序 基礎母豬 選擇一* 2次，間隔4周，首免在產前8周；以后胎次，產前8-3周免疫1次 選擇二** 基礎免疫（2次注射、間隔4周）后，3次/年 基礎公豬 基礎免疫（2次注射、間隔4周）后，3次/年

[ 本帖最后由 農夫 于 2008-7-12 13:51 編輯 ]

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