豬寄生蟲病診斷方法

曹志誠

豬寄生蟲病診斷方法

（一） 糞便蟲卵檢查法
1．直接涂片檢查法  是簡便和常用的方法，但檢查時所用的糞便數量少，故檢出率較低。本法是先在載玻片上滴一滴甘油與水的混合液，再用牙簽或火柴棍挑起少量糞便加入其中，混勻，夾去較大的糞渣，最后使玻片上留有一層均勻的糞液，其濃度的要求是將此玻片放于書上，能通過糞便液膜模糊地看出其下的字為合適。在糞便上覆以蓋玻片，置顯微鏡下檢查。檢查時應順序地查遍蓋玻片下所有部分。  
2．水洗沉淀法  取糞便5克，加清水100毫升以上，攪勻成糞液，通過40~60目銅篩過濾，濾液收集于燒杯中，靜置沉淀20分鐘，傾去上清液，保留沉渣，再加清水混勻，再沉淀，如此反復操作直到上層液體透明后，吸取沉渣檢查。  
3．漂浮法    先往青霉素空瓶中加入適量飽和鹽水，再往瓶內加入糞便1克，混勻，篩濾，濾液注入另一瓶中，補加飽和鹽水溶液使瓶口充滿，上覆以蓋玻片，并使液面與蓋玻片接觸，其間不留氣泡，直立20分鐘后，取下蓋玻片檢查。此法適用于檢查比重比飽鹽水溶液輕的蟲卵，如一般線蟲卵和球蟲卵囊等。
（二） 常見蟲卵的一般特征

   1．豬蛔蟲卵  蟲卵短橢圓，棕黃色，大小為56~87微米×46~57微米，殼厚，外表有凹凸不平的蛋白質膜，剛排出的蟲卵含一未分裂的卵黃細胞，未受精卵呈現長橢圓形，殼較薄。

  2．結節線蟲卵  橢圓形，淡灰色，卵殼薄而光滑，內含8~16個球形的胚細胞。大小為45~55微米×26~36微米。
3．豬鞭蟲卵  呈淡褐色，具有厚而光滑的外膜，兩極呈栓塞狀，形如腰臌，內有一胚細胞。蟲卵大小為52~61微米×27~30微米。
4．蘭氏類圓線蟲卵  呈橢圓形，淡灰色，卵殼薄而光滑，卵內含有成形的幼蟲，幼蟲呈U字形。大小為45~55微米×26~30微米。
5．布氏姜片蟲卵  呈淡黃色，卵殼薄，其一端有不明顯的卵蓋，卵黃均勻地散布于卵殼內。大小為130~140微米×80~85微米。
6．球蟲卵囊  呈卵園或橢圓形，淡灰色，殼薄而光滑，內有顆粒狀的原生質團塊。其大小因種類不同而不同，大的為24.6~31.9微米×23.2~24.0微米，小的為11.2~16.0微米×9.6~12.8微米。
（三）豬疥螨的實驗室檢查方法
    1．病料的采取
    疥螨寄生于豬的皮內，因此應刮取皮屑，置于顯微鏡下，尋找蟲體。刮取皮屑的方法很重要，應選擇患病皮膚與健康皮膚交界處，這里的螨較多，往往在耳殼內容易尋找。先在要刮取的皮膚處滴加少許50%的甘油水溶液，然后用將邊緣磨銳的不銹鋼小勺耒刮取皮屑，直到皮膚輕微出血。將刮下的皮屑置入試管或塑料袋內，帶回供檢查。
2．檢查方法
    （1）顯微鏡下直接檢查法  將刮下的皮屑置載玻片上，加入少量50%甘油水溶液，覆以另一張載玻片。搓壓載玻片使病料散開，分開載玻片，置顯微鏡下檢查。此法適合于檢查皮屑中蟲體較多的病料。

（2）蟲體濃集法 為了在較多的病料中，檢出其中較少的蟲體，提高檢出率，可采用濃集法。此法先取較多的病料，置于試管中，加入10%NaOH溶液，在灑精燈上煮沸數分鐘，使皮屑溶解，蟲體自皮屑中分離出來。然后其自然沉淀或以每分鐘2 000轉/分鐘的速度離心20分鐘，吸取沉渣鏡檢。
（四）豬附紅細胞體的實驗室檢查方法
可用來作為診斷的最重要的臨床癥狀是：貧血，對外界反應遲鈍，發熱高達40℃或更高。其它示病癥狀是：耳廓邊緣變色，皮膚變態反應。
查找病原是確認該病的主要方法，新鮮血液加等量生理鹽水稀釋后置顯微鏡下觀察，可見蟲體呈球形，逗點形，桿狀或顆粒狀。由于蟲體附著在紅細胞表面有張力作用，紅細胞在視野內上下震動或左右運動，紅細胞形態也發生了變化，呈菠蘿狀、鋸齒狀、星狀等不規則形狀。血液姬姆薩染色后，蟲體可染成紫紅色，但該種染色方法的缺點是姬姆薩色素沉著，容易形成假像。血清經吖啶橙染色在熒光顯微鏡下可見各種形狀的附紅細胞體單體。但這一技術的復雜性使其只適宜實驗室診斷。該染色情況下，附紅細胞體呈淺至深桔黃色。
血清診斷方法包括IHA試驗、補體結合試驗或ELISA方法，但抗體的產生與病原數量的增多（而不是與感染發生的時間）有暫時的相關性。這意味著抗體的產生呈波浪形。即使數次急性發作后，抗體滴度也只能在2-3個月內維持較高水平，之后便會下降到閾值以下，這表明假陰性是常見的。所有血清學方法只適合于群體診斷。
PCR診斷已經成功地用于豬附紅細胞體病。不過，該方法不能區別帶蟲豬和發病豬。
動物試驗也是確認豬附紅細胞體病的方法之一。常用的試驗動物是小白鼠，用小豬作試驗動物時則需摘除脾臟。懷疑為豬附紅細胞體病的豬在切除脾臟后觀察3-20天，若是帶蟲豬則會出現急性附紅細胞體的癥狀，此時可通過查找血涂片中的蟲體進行診斷
豬附紅細胞體病的診斷方法
豬附紅細胞體病的診斷方法主要有以下幾種：
1、 懸滴法   
新鮮血液加等量生理鹽水稀釋后吸取數滴置載玻片上，加蓋蓋玻片，置顯微鏡下觀察，可見蟲體呈球形，逗點形，桿狀或顆粒狀。由于蟲體附著在紅細胞表面有張力作用，紅細胞在視野內上下震動或左右運動，紅細胞形態也發生了變化，呈菠蘿狀、鋸齒狀、星狀等不規則形狀。
該方法也適用于抗凝血液。抗凝血液存放1-2天一般并不影響檢測結果。
2、 直接涂片法  
取新鮮或抗凝血少許置載玻片上推成薄層，然后在顯微鏡下直接觀察。可看到附紅細胞體呈球形，逗點形，桿狀或顆粒狀。寄生有附紅細胞體的紅細胞呈菠蘿狀、鋸齒狀、星狀等不規則形狀。該方法的優點是簡單、快速。不足之處一是對推片的技術有一定要求，紅細胞必需推成薄層；二是容易和其他導致紅細胞變形的情況混淆。
3、染色檢查
血液涂片經姬姆薩染色后，蟲體可染成紫紅色，但該種染色方法的缺點是姬姆薩色素沉著，容易形成假像。血清經吖啶橙染色在熒光顯微鏡下可見各種形狀的附紅細胞體單體。但這一技術的復雜性使其只適宜實驗室診斷。該染色情況下，附紅細胞體呈淺至深桔黃色。
4、血清學診斷
包括IHA試驗、補體結合試驗或ELISA方法，但抗體的產生與病原數量的增多（而不是與感染發生的時間）有暫時的相關性。這意味著抗體的產生呈波浪形。即使數次急性發作后，抗體滴度也只能在2-3個月內維持較高水平，之后便會下降到閾值以下，這表明假陰性是常見的。所有血清學方法只適合于群體診斷。
5、PCR診斷
國外已有PCR技術用于豬附紅細胞體病診斷的報道。不過，該方法不能區分帶蟲豬和發病豬。
6、動物試驗
常用的試驗動物是小白鼠，用小豬作試驗動物時則需摘除脾臟。懷疑為豬附紅細胞體病的豬在切除脾臟后觀察3-20天，若是帶蟲豬則會出現急性附紅細胞體的癥狀，此時可通過查找血涂片中的蟲體進行診斷。