玉米蛋白粉葉黃素檢測方法（簡潔版）

銀潴

:oye: 好的頂一下喔


試劑：
①     提取劑：正已烷—丙酮—無水乙醇—甲苯（10+7+6+7）
②     40%氫氧化鉀甲醇液：40g氫氧化鉀溶于甲醇中，冷卻后用甲醇定容至100ml
③     10%硫酸鈉溶液：10g無水硫酸鈉溶于100ml蒸餾水。
④     標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：
以蘇丹Ⅰ{即1—（苯偶氮）—2—萘酚}作為標(biāo)準(zhǔn)
⒈貯備液（1.0毫摩爾mM）：蘇丹Ⅰ用熱無水乙醇重結(jié)晶標(biāo)準(zhǔn)品，在70℃真空干燥箱中干燥結(jié)晶至恒重。稱0.1241g的結(jié)晶體溶于500ml丙酮—異丙醇（1+1）中。）可放置1個(gè)月時(shí)間）
⒉工作液（0.04毫摩爾mM）：2ml貯備液以丙酮—異丙醇（1+1）稀釋至50ml棕色容量瓶中，暗處保存（一般使用2-3天，以后并須重新配置）
⒊重結(jié)晶步驟：將1g重的蘇丹Ⅰ放入250ml燒杯，加40ml無水乙醇，并在水浴中加熱至75℃，不斷攪拌。應(yīng)在燒杯口放入表面皿以防止過多蒸發(fā)，當(dāng)所有固體接近完全溶解時(shí)（有時(shí)會有一點(diǎn)不容的雜志）應(yīng)用真空過濾除去雜質(zhì)。熱得濾出液應(yīng)在室溫慢慢冷卻。此時(shí)不要攪拌濾除液，因?yàn)檫@將產(chǎn)生小結(jié)晶。一待結(jié)晶產(chǎn)生后，再次進(jìn)行過濾。結(jié)晶體盡量多，最后用小鏟轉(zhuǎn)移至干燥玻片上，并至于在70℃真空干燥箱，結(jié)晶完全干燥后貯藏于干燥器中。

步驟：
取樣粉碎至40目
1、取1.5g~2g玉米蛋白粉于100ml棕色容量瓶中，加1ml蒸餾水，加30ml提取劑，塞蓋子旋搖1min（不可用力過大，防止樣品粘在內(nèi)壁不能浸提。
2、冷皂化—讓混合物置暗處16h（過夜），加2ml40%氫氧化鉀甲醇液，旋搖1min，再暗置1h，然后加30ml正已烷，旋搖1min，以10%硫酸鈉溶液定容，震蕩2min，暗置1h。
3、取上清液5ml-10ml于25ml容量瓶中，用正已烷定容（控制該溶液吸光度在0.25-0.75之間），以正已烷為空白對照，立即在474nm處測吸光值。

迅速測定溶液的吸光度值以減少異物和自動(dòng)氧化帶來的損失。首先以標(biāo)準(zhǔn)工作液在469-479間以1nm間隔測量，以丙醇+異丙醇1：1為空白對照，檢查校正分光光度計(jì)。若最大吸收不是474，則重校儀器。當(dāng)儀器在474nm下有最大吸光度時(shí)，工作液讀書應(yīng)為0.561（474）和0.460（436）。若儀器有偏差，應(yīng)需要校正計(jì)算值。
計(jì)算：
                        樣品吸光度*1000*0.561/蘇丹Ⅰ工作液實(shí)際吸光度
總?cè)~黃素（mg/kg）=
                                     樣重*5[或10ml（含量低）]
                                                     236*1*                          50*25
                  
即：

總?cè)~黃素（mg/kg）=50*25*樣品吸光度*1000*0.561/蘇丹Ⅰ工作液實(shí)際吸光度

                                                 236*1*樣重*5[或10ml(含量低)]


式中：
25——最終稀釋體積的毫升數(shù)，mL(25mL)
1——為以厘米的光程（即比色皿的光徑）
0.561——為標(biāo)準(zhǔn)工作液在20°C標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光值
50——上層清液體積，mL
236——總?cè)~黃素在正已烷溶液中的吸光系數(shù)