抗氧化酶的測定方法

cuiyming

抗氧化酶（SOD、CAT、GXP）能否用放射免疫法測定啊？哪位老師解答一下！！ 謝謝！！

李業明

這個我真不懂！請專業老師指點一下吧！

fansssss

這個用一般的分光光度計比色法就解決了，為啥要用放免呢，我們通常買南京建成的試劑盒來測的。

xmzhao

血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定：
通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子自由基（O
2.-），后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下呈現紫紅色，用可見分光
光度計測其吸光度。當被測樣品中含SOD時，則對超氧陰離子自由基有專
一性的抑制作用，使形成的亞硝酸鹽減少，比色時測定管的吸光度值低于
對照管的吸光度值，通過公式計算可求出被測樣品中的SOD活力。高等動
物細胞內只有兩種SOD即銅鋅－SOD（CuZn-SOD）與錳－SOD（Mn-SOD），
二者相加等于總SOD（T-SOD）。本試驗測定的即為血清與乳清中的總SOD
活力。
試劑組成與配制
試劑一：液體10ml×1瓶（天冷時或放冰箱會有部分結晶析出，需熱
水浴溶解后再用），用時加熱蒸餾水稀釋至100ml。
試劑二：液體7ml×1瓶，4－10℃保存。
試劑三：液體7ml×1瓶，4－10℃保存。
試劑四：液體0.5ml×1支，4℃保存，不可冷凍；4號稀釋液7ml×1
瓶，4℃保存；用時二者按1：14稀釋，可以一次稀釋，也可以分次稀釋。
配好的4號試劑4℃保存，不可冷凍。配好的可保存2－3個月。注：所
用吸嘴必須為專用且消毒處理過。
試劑五：粉劑×1支，用時加70-80℃蒸餾水75ml溶解后備用，若加
熱過程中水分蒸發減少，此時必須用蒸餾水補充至75ml，配好后的試劑
避光4℃冷藏。
試劑六：粉劑1支，用時加雙蒸水75ml溶解后備用，配好后的試劑
避光4℃冷藏保存。
顯色劑的配制：按照5號試劑：6號試劑：冰醋酸＝3：3：2的體積
比配成顯色劑，4℃避光冷藏。
操作步驟
按表1-3-1進行
表1-3-1（Table1-3-1）SOD的測定過程
試劑測定管對照管
試劑一（ml）1.0 1.0
樣品（ml）a*
蒸餾水（ml）a*
試劑二（ml）0.1 0.1
試劑三（ml）0.1 0.1
試劑四（ml）0.1 0.1
用旋渦搖勻器充分混勻，置37℃恒溫水浴40分鐘
顯色劑（ml）2 2
勻，室溫放置10分鐘，于波長550nm處，1cm光徑比色杯，蒸餾水調
比色。
注：其中a*為樣品的取樣量，血清取50μl。
結果計算
SOD活力（U/ml）＝（對照管OD值－測定管OD值）/對照管OD值×
2×反應體系的稀釋倍數×樣品測定前的稀釋倍數



碩士論文中的方法，希望有用！