3種消毒藥對(duì)鏈球菌病的殺滅效果試驗(yàn)

獸藥指南 · 發(fā)表于 2009-5-11 17:08:29

豬鏈球菌病是由多種溶血性鏈球菌引起的豬的一種多型性疫病，本病在我國(guó)各地都有發(fā)生，目前也成為規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)最常見的疾病之一。
   針對(duì)當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)現(xiàn)狀，本文就消毒切斷傳染病傳播途徑方面，進(jìn)行了3種消毒藥對(duì)鏈球菌殺滅效力的實(shí)驗(yàn)，一方面是為了向廣大獸醫(yī)工作者推薦一種高效快捷的消毒藥，另一方面，希望能對(duì)鏈球菌病的防治工作起到一定的作用。
一、材料和方法
   （一）材料
   消毒藥碘酸、聚維酮碘、消毒威，其中碘酸、聚維酮碘為液體消毒劑，前者為深棕色液體、后者為紅棕色液體，主要成分為碘；消毒威為白色粉末、主要成分為二氯異氰酸鈉粉。
   菌株  豬鏈球菌C55138
   培養(yǎng)基 TSA-胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂，TSB-胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯
   中和劑 1%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）；1.5%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）；3%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）在800毫升蒸餾水中溶解8克NaCl、0.2克KCl、1.44克Na2HPO4,和0.24克Na2HPO4，用HCl調(diào)節(jié)溶液PH值至7.4加水定容至1升，在151bf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鐘，保存于室溫。
   （二）方法
   PBS配制方法：在800毫升蒸餾水中溶解8克NaCl、0.2克KCl、1.44克Na2HPO4和0.24克Na2HPO4，用HCl調(diào)節(jié)溶液PH值至7.4，加水定容至1升，在151bf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鐘，保存于室溫。
   中和劑篩選試驗(yàn)  試驗(yàn)菌為豬鏈球菌，參考常用消毒藥中和劑的選擇，用不同濃度的PBS作為中和劑，觀察其對(duì)3種消毒藥殺菌效果的中和作用。
   定性殺菌試驗(yàn)  3種消毒劑對(duì)鏈球菌的殺滅效果試驗(yàn)具體操作如下：
      將菌液進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，然后加入0.03M磷酸鹽緩沖液稀釋，倍比稀釋9管，第10管不加消毒藥作為對(duì)照組；
   將中號(hào)試管10支排列于試管架上，寫好標(biāo)簽；
   每管加無(wú)菌蒸餾水5毫升，放20℃水浴中；
   用蒸餾水對(duì)消毒劑進(jìn)行遞進(jìn)稀釋，倍比稀釋9管，第10管不加消毒藥作為對(duì)照。
   以每半分鐘加一管的速度加菌液5毫升于每管內(nèi)，混合。
   加菌液后5、10、15、30、60分鐘時(shí)，每管各取0.5毫升加入4.5毫升液體培養(yǎng)基內(nèi)。
   將接種細(xì)菌的培養(yǎng)基管置37℃培養(yǎng)24小時(shí)，如發(fā)生渾濁即表示有細(xì)菌生長(zhǎng)。然后將其移植到固體培養(yǎng)基上，觀察菌落形態(tài)，或進(jìn)行涂片染色鏡檢，以判斷生長(zhǎng)的是否是實(shí)驗(yàn)菌，以排除污染。若肉湯不渾濁，繼續(xù)培養(yǎng)7天，依然不渾濁方可判為無(wú)菌生長(zhǎng)。
   有機(jī)物影響試驗(yàn)  試驗(yàn)菌株為鏈球菌菌株，有機(jī)物為小牛血清，設(shè)置不含小牛血清、含25%小牛血清以及含50%小牛血清組，做載體定量殺菌試驗(yàn)。具體操作如下：
   將菌液進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，然后加入0.03M磷酸鹽緩沖液稀釋，使試管菌液濃度含量為106~107個(gè)/毫升；
   吸取0.5毫升消毒劑溶液于4.5毫升測(cè)試濃度消毒劑溶液內(nèi)；
   置20℃水浴中作用5分鐘；
   立即吸取上述菌液混合液1.0毫升，加入9.0毫升中和液混勻，中和10分鐘后進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)。
二、結(jié)果
   中和劑試驗(yàn)結(jié)果  在對(duì)消毒威實(shí)驗(yàn)中，用含2%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）作為中和劑能完全中和所加消毒劑試驗(yàn)濃度的殺菌作用；在對(duì)聚維酮碘的實(shí)驗(yàn)中，用含2%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）作為中和劑能完全中和所加消毒劑試驗(yàn)濃度的殺菌作用；在對(duì)碘酸的實(shí)驗(yàn)中，用含2%吐溫-80磷酸鹽緩沖液（PBS）作為中和劑能完全中和所加消毒劑試驗(yàn)濃度的殺菌作用。
   定性試驗(yàn)結(jié)果  定性分析試驗(yàn)中，以50倍遞進(jìn)稀釋消毒劑，做定性實(shí)驗(yàn)。聚維酮碘、碘酸在50倍下未出現(xiàn)沉淀，故改變方案，在200倍下進(jìn)行，得到如下結(jié)果：
表1聚維酮碘對(duì)鏈球菌的定性試驗(yàn)
   消毒威實(shí)驗(yàn)中，于第8管發(fā)現(xiàn)混濁，故其對(duì)鏈球菌的最低有效殺菌濃度（MIC）為1/6400；
   聚維酮碘實(shí)驗(yàn)中，于第7管發(fā)生渾濁，故其對(duì)鏈球菌的最低有效殺菌濃度（MIC）為1/12800；
   碘酸實(shí)驗(yàn)中，于第8管發(fā)生渾濁，故其對(duì)鏈球菌的最低有效殺菌濃度（MIC）為1/25600。
   有機(jī)物影響試驗(yàn) 見下表2：在不同的組別中加入相同的消毒液和菌株，分別在3、5、10、15分鐘以后觀察對(duì)細(xì)菌的殺滅效果，結(jié)果見下表：
表2有機(jī)物對(duì)聚維酮碘的殺滅效果影響
   備注：小牛血清對(duì)碘酸、消毒威的殺菌效果影響與上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似，故在此不另行列表。
   試驗(yàn)結(jié)果表明，以上3種消毒藥對(duì)含25%、50%的小牛血清的鏈球菌作用5分鐘，殺滅率分別為99.94%、99.87%、而不加血清的鏈球菌殺滅率為99.98%。含50%的小牛血清對(duì)殺菌效果有輕度影響；含25%的小牛血清對(duì)殺菌效果無(wú)影響。
三、討論
   1.聚維酮碘、碘酸主要成分碘是活性很強(qiáng)的元素，有較強(qiáng)的滲透性能，可直接鹵化菌體蛋白質(zhì)，產(chǎn)生沉淀，使微生物死亡，本品主要針對(duì)病毒、病菌的結(jié)構(gòu)特征，使其蛋白質(zhì)變性而滅活；消毒威主要成分氯遇水可產(chǎn)生次氯酸，而次氯酸不穩(wěn)定分解釋放出活性氯和原態(tài)氧，呈現(xiàn)殺菌作用。
   2.消毒威、聚維酮碘、碘酸三種消毒劑分別在稀釋1/6400、1/12800、1/25600倍數(shù)下作用10分鐘，對(duì)鏈球菌的消毒效力與殺滅效力均已達(dá)到《技術(shù)規(guī)范》所規(guī)定的要求，從應(yīng)用消毒的角度來(lái)看，經(jīng)本次測(cè)試，這三種消毒藥對(duì)鏈球菌病有較好的防治效果。
   3.試驗(yàn)證明，鏈球菌對(duì)本次試驗(yàn)所用的消毒劑比較敏感，在稀釋倍數(shù)相當(dāng)高的情況下，這三種消毒劑都對(duì)鏈球菌有良好的殺滅抑制作用，且安全穩(wěn)定、作用時(shí)間長(zhǎng)，受有機(jī)物、PH值影響較小，無(wú)腐蝕、無(wú)刺激性，對(duì)人和動(dòng)物傷害低于一般水平，為穩(wěn)定、高效的消毒劑。適用于常規(guī)以及撲疫期間的消毒，適當(dāng)控制用量可以做到有效的殺滅病毒、病菌，同時(shí)又能節(jié)約成本。
   4.消毒的效果好壞很大程度上取決于消毒藥的好壞，而現(xiàn)在存于市面上的消毒藥良莠不齊，多數(shù)消毒藥對(duì)細(xì)菌、病毒的殺滅效果不理想，一定程度上造成了傳染病的流行暴發(fā)。