綿羊肺腺瘤病特異性PCR及套式PCR診斷方法的建立

junrluo

綿羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis, OPA )又名“驅趕病”（Jaagsiekte），是引起綿羊肺臟腫瘤的一種接觸性傳染病，也發生于山羊。主要病征為患羊咳嗽、呼吸困難、消瘦、大量漿液性鼻漏、Ⅱ型肺泡上皮細胞和無纖毛細支氣管上皮細胞腫瘤性增生[1,2,3]。OPA 與人的細支氣管-肺泡癌( bronchiolo-alveolar carcinoma, BAC) 在臨床癥狀、病理組織學特征及超微病變方面極為相似，為人類這一常見癌癥提供了研究模型[4]。
     本病1825年首次發現于南非。綿羊感染率40％～80％，發病率2％～30％，出現明顯臨床癥狀的羊病死率為100%[5]。1958年鄧普輝教授首次報道了我國屠宰羊群中的11個OPA病例[6]，以后，新疆、內蒙古、青海等省區陸續有本病的報道[7]。現在，多數養羊業發達的國家和地區都有該病的發生和流行，該病嚴重威脅和影響著世界各國養羊業的發展。
     綿羊肺腺瘤病病毒（Jaagsiekte retrovirus, JSRV）為β反轉錄病毒。基因組為線性單股正鏈RNA，全長7.4kb，編碼相互重疊的gag、pro、pol、env基因[8]，JSRV感染羊后，形成整合有外源性前病毒DNA(exJSRV)的肺腫瘤細胞。有趣的是，健康羊基因組攜有15～20拷貝，與JSRV密切相關的內源性病毒DNA（enJSRV）。enJSRV是幾百萬年前，JSRV形成前病毒DNA整合入羊生殖細胞，在羊與病毒漫長的共進化過程中固定下來，隨宿主細胞基因組遺傳復制并發揮一定的生理功能[9]。健康羊體內，enJSRV表達的蛋白與JSRV 病毒粒子的蛋白高度一致，能與JSRV的受體結合，競爭性阻斷JSRV的感染，并導致免疫耐受，使得感染羊無針對JSRV的循環性抗體。然而，患羊肺組織﹑淋巴網狀內皮系統及外周血單核細胞均有前病毒DNA及JSRV的轉錄產物[4]。目前，我國對本病依賴于常規病理學診斷方法，尚無快速、特異、靈敏的實驗室診斷方法。本實驗針對病原或前病毒進行實驗設計，通過對比enJSRV與exJSRV的序列差異，設計了兩套引物，成功排除了高拷貝數enJSRV的干擾，在國內首次建立了針對exJSRV長末端重復序列（long terminal repeat, LTR）的特異性PCR及套式PCR診斷方法[10]，可用于不同條件下的診斷檢測，對我國綿羊肺腺瘤病的診斷、流行病學調查及監控種羊的進口具有重要價值。

guangyaoxinyu

太高科技了。