剖析黃芪多糖佐劑

小華佗 · 發表于 2009-10-13 15:33:11

本帖最后由小華佗于 2009-10-13 15:34 編輯

分別將黃芪多糖提取物、白油-吐溫、氫氧化鋁作為佐劑制備金黃色葡萄球菌滅活苗混合免疫家兔和奶牛,觀察家兔免疫前后血清抗體滴度變化以及攻毒后白細胞數目變化和淋巴細胞百分比變化.對奶牛免疫后測其血清抗體和乳汁中體細胞數變化,結果注射疫苗后乳汁中體細胞數都有所下降黃芪多糖組較其它組下降較快,幅度較大黃芪多糖和抗原混合物免疫動物后未見不良反應,且抗原免疫血清抗體比氫氧化鋁和白油-吐溫佐劑組的抗體滴度增加快,幅度顯著增高且抗體維持一個較高水平,而攻毒后家兔白細胞數和淋巴細胞數也較氫氧化鋁和白油-吐溫佐劑組增加較多.因此黃芪多糖是一種有效的佐劑. 為此有以下幾組實驗很好的證明了黃芪多糖作為佐劑的廣泛應用，那么它的作用具體體現在哪里呢？下面我們就綜合上述，來對它來個大“解剖”！
   一、將1日齡健康羅曼雛80只隨機分為4組,每組20只。分別于1日齡皮下注射生理鹽水以及不同劑量的黃芪多糖 ,連續7d,于7、14、21、28、35、42、49、56日齡采血,檢測AI和ND抗體效價,探討黃芪多糖的免疫佐劑效果。試驗結果表明,各組黃芪多糖均能提高AI-HI和ND-HI抗體效價,其中中劑量組抗體高峰期持續時間長,免疫后期有較高延長抗體存在的趨勢,具有較好的免疫輔助效果。二、14日齡雛雞200只,隨機均分為10組,在用新城疫弱毒苗免疫的同時,6個試驗組分別肌肉注射高、低劑量3種修飾的硫酸化黃芪多糖（sAPS)sAPS40、sAPS50和sAPS60,2個多糖對照組注射高、低劑量未修飾的黃芪多糖 (APS),無佐劑對照組注射等量生理鹽水,每天1次,連續3 d.分別于免疫后7、14、21、28 d翅靜脈采血測定血清抗體效價;于免疫后14、21、28、35 d心臟采血測定T淋巴細胞增殖.結果表明,3種修飾多糖均能顯著提高血清抗體效價、促進T淋巴細胞增殖,作用強于未修飾多糖,并有一定的量效和時效關系,高劑量提高血清抗體效價、低劑量促進T淋巴細胞增殖的效果較好,綜合評價以sAPS60最好,可以作為新型免疫增強劑的候選藥。一、黃芪多糖、人參皂甙Rb1對豬口蹄疫疫苗的佐劑效果及相關機理研究本試驗目的旨在以兩種補氣中藥成分為代表，對中藥成分作為疫苗佐劑機制進行研究。進行本試驗期望得到一種新型的、經濟的豬口蹄疫疫苗的佐劑，提高現有疫苗的保護力，降低現有疫苗的副作用，降低豬口蹄疫的發病率，減少勞動費用，即這種佐劑能刺激機體產生較強的體液免疫和細胞免疫反應，同時，通過對佐劑作用機制的探索，將給新的佐劑開發提供一些試驗方法，具有良好的研究意義。試驗以常用補氣中藥黃芪和人參的主要有效成分——黃芪多糖和人參皂甙Rb1為代表，首先黃芪多糖和人參皂甙Rb1直接與口蹄疫疫苗混勻，通過肌肉注射免疫小鼠和豬，觀察口蹄疫抗體效價的變化。試驗結果：小鼠一免15d抗體效價與對照組差異不顯著HAlog2＜7(p＞0.05)，二免后的小鼠抗體效價HAlog＞7與對照組比較差異極顯著(p＜0.01)；黃芪多糖 (0.5mg/只)+疫苗組、黃芪多糖 (0.1mg/只)+疫苗組和人參皂甙Rb1(0.01mg/只)+疫苗組與對照組差異極顯著(p＜0.01)，黃芪多糖 (0.05mg/只)+疫苗組和人參皂甙Rb1(0.002mg/只)+疫苗組與對照組差異顯著(p＜0.05)。經過免疫的豬一免后抗體效價都沒有達到保護免疫效價(HAlog2＜7)，二免15d抗體效價遠遠高于一免的抗體效價(HAlog2＞7)，二免30d抗體效價比二免15d有些下降，但是高于只經過一免的抗體效價(HAlog2＞7)。總之黃芪多糖和人參皂甙Rb1均能提高小鼠和豬只的口蹄疫抗體效價，并且隨著兩種成分濃度的增加對抗體效價的影響也隨之增強。隨后進行大鼠腸黏膜微血管內皮細胞的培養。通過對內皮細胞第Ⅷ因子相關抗原和硝酸銀鑒定，證明培養的微血管內皮細胞第Ⅷ因子相關抗原染色為陽性，AgNO3染色后，黑色的硝酸銀顆粒沉積在血管內皮細胞邊緣即細胞間隙中，呈棕黃色，細胞間以鋸齒狀結構連接，體現血管內皮細胞呈現典型的多邊形。最后黃芪多糖、人參皂甙Rb1和口蹄疫疫苗同時作用細胞，繼續培養一段時間觀察內皮細胞NO、IL-6和TNF-α分泌量的變化。試驗結果：口蹄疫疫苗(0.1μL/mL)單獨作用于腸黏膜微血管內皮細胞，微血管內皮細胞分泌的NO、IL-6和TNF-α極顯著的高于對照組(p＜0.01)；黃芪多糖 (450μg/mL)和人參皂甙Rb1(40μg/mL)分別與口蹄疫疫苗(0.1μL/mL)聯合作用細胞，微血管內皮細胞分泌NO、IL-6和TNF-α比單獨疫苗作用減少，比對照組分泌量高(p＜0.05或p＜0.01)。結果表明：黃芪多糖和人參皂甙Rb1均能起到疫苗佐劑的作用，提高口蹄疫疫苗的抗體效價和保護微血管內皮細胞免受損傷的作用。
   二、黃芪多糖佐劑及其在I型鴨疫里氏桿菌滅活疫苗中的應用本發明涉及一種疫苗免疫佐劑和疫苗，具體地說是一種黃芪多糖佐劑及其在I型鴨疫里氏桿菌滅活疫苗中的應用。該疫苗佐劑為黃芪多糖溶液，黃芪多糖溶液濃度為30mg/ml。本發明I型鴨疫里氏桿菌黃芪多糖滅活疫苗，它由作為疫苗的鴨疫里氏桿菌RA-1滅活菌液和作為佐劑的黃芪多糖溶液混合而成。本發明提高了傳統滅活苗的免疫效果，有效地防控鴨傳染性漿膜炎，也為新型免疫佐劑的研究提供依據。本發明疫苗具有良好的安全性和免疫原性，能有效預防鴨傳染性漿膜炎的發生。
   三、黃芪多糖佐劑.........（待續）