復(fù)方丹參注射液與鹽酸甜菜堿抗心肌缺氧的實(shí)驗(yàn)研究

wlei908

【摘要】  目的 觀察復(fù)方丹參注射液與鹽酸甜菜堿合用對(duì)心肌缺氧小鼠耐缺氧作用的影響，并比較兩藥單用的效果，為研究新藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 采用腹腔注射異丙腎上腺素造成心肌耗氧量增加小鼠模型，記錄不同時(shí)間點(diǎn)的累計(jì)耗氧量和小鼠的存活時(shí)間。結(jié)果 復(fù)方丹參注射液與鹽酸甜菜堿合用組5、10 min小鼠累計(jì)耗氧量明顯降低，且存活時(shí)間延長，與單用藥物組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；丹參注射液組與鹽酸甜菜堿組相比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 復(fù)方丹參注射液與鹽酸甜菜堿聯(lián)用對(duì)改善心肌缺氧效果顯著，療效優(yōu)于單用組。

【關(guān)鍵詞】  復(fù)方丹參注射液 鹽酸甜菜堿 心肌缺氧

　　The anti?myocardial hypoxic effects of compound solvia miltiorrhiza injection and betaine hydrochloride

　　CHEN Mei?hua， WU Yue?peng， CHEN Wei， MENG Qiang， GAO Yun?sheng

　　（School of Pharmacy, Taishan Medical College，Taian 271000，China;Affiliated Hospital of Taishan Medical College, Taian 271000，China；Pharmaceutical Undergraduate of 2003 Grade, Taishan Medical College，Taian 271000，China）

　　Abstract： Objective： To study the effect of tolerance hypoxia of hypoxic cardiomyocyte mice by combined application of compound solvia miltiorrhiza injection and betaine hydrochloride, to compare the effect of the two drugs with that used alone, and to establish a laboratory foundation in developing new drugs.  Methods: Mice models of myocardium anoxia increase were induced by injected isoprenaline. Then put mice into the obturated vases and record the accumulative oxygen consumption of different time and the survival time of mice. Rusults：Compared with that in mice received compound solvia miltiorrhiza injection or betaine hydrochloride alone, the accumulative oxygen consumption of 5 and 10 minutes were reduced obviously and the survivial time were prolonged in mice received compound solvia miltiorrhiza injection and betaine hydrochloride. There were no significant difference between compound solvia miltiorrhiza injection group and betaine hydrochloride group. Conclusion：Compound application of compound solvia miltiorrhiza injection and betaine hydrochloride has a notable result in anti?hypoxic cardiomyocyte, moreover the effects are better than the single drug.
   
　　Key words: compound solvia miltiorrhiza injection;  betaine hydrochloride; hypoxic cardiomyocyte

　　丹參是一種主治心血管系統(tǒng)疾病的常用中藥，中醫(yī)理論認(rèn)為丹參具有祛瘀止痛、清心除煩的作用。復(fù)方丹參注射液(compound solvia miltiorrhiza injection)是由丹參和降香經(jīng)過先進(jìn)的工藝提取制成，主要成分為原兒茶醛及原兒茶酸。復(fù)方丹參注射液在治療冠心病方面有肯定的療效，通過擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加心肌供血供氧，也通過鈣拮抗和抗氧化作用減輕心肌損傷，還用于治療高血壓和其他老年心腦血管疾病［1］。甜菜堿(betaine)化學(xué)名為三甲銨乙內(nèi)酯，屬季銨型生物堿，是廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)的天然維生素物質(zhì)，40年代初，研究人員發(fā)現(xiàn)甜菜堿對(duì)動(dòng)物體內(nèi)的甲基代謝有顯著的營養(yǎng)調(diào)控作用，甜菜堿作為甲基供體，與膽堿、蛋氨酸共同參與生化反應(yīng)，參與蛋白質(zhì)的合成。鹽酸甜菜堿可用于治療胃酸缺乏、動(dòng)脈粥樣硬化及肝臟疾病等，并具有擴(kuò)張血管、降低外周血管阻力、降壓、抗脂肪肝和抗腫瘤等多種藥理作用［2］。實(shí)驗(yàn)證明，鹽酸甜菜堿(betaine hydrochloride,BTH)可增強(qiáng)心肌耗氧量增加小鼠的耐缺氧能力。本實(shí)驗(yàn)通過腹腔注射異丙腎上腺素造成小鼠心肌耗氧量增加，觀察不同時(shí)間點(diǎn)的累計(jì)耗氧量及小鼠的存活時(shí)間，比較復(fù)方丹參注射液組、鹽酸甜菜堿組和二者聯(lián)用組耗氧量及存活時(shí)間有無差別，為發(fā)現(xiàn)甜菜堿的藥用價(jià)值和研究開發(fā)心血管藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

　　1  材料和方法

　　1.1  實(shí)驗(yàn)材料

　　1.1.1  藥品及試劑  復(fù)方丹參注射液（上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：041130）；鹽酸甜菜堿由泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院合成，配制成2%溶液供實(shí)驗(yàn)用；0.05%鹽酸異丙腎上腺素注射液（ISO，上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：030706）；0.9%氯化鈉注射液（NS，山東省泰安制藥廠，批號(hào)：05020202）。

　　1.1.2  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物  昆明種小鼠（清潔型），體重18～22 g，由泰山醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

　　1.1.3  儀器  小鼠耗氧量動(dòng)態(tài)變化測定裝置，泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院制備。

　　1.2  實(shí)驗(yàn)方法

　　1.2.1  動(dòng)物分組與給藥方法  將實(shí)驗(yàn)小鼠按性別和體重隨機(jī)分為5組：①生理鹽水對(duì)照組；②模型對(duì)照組；③2%鹽酸甜菜堿組；④復(fù)方丹參注射液組；⑤2%鹽酸甜菜堿與復(fù)方丹參注射液聯(lián)用組。其中，①組小鼠腹腔注射（ip）NS 20 ml/kg，其余四組均ip鹽酸異丙腎上腺素20 mg/kg。10 min后，③組小鼠ip 2%鹽酸甜菜堿20 ml/kg，④組小鼠ip復(fù)方丹參注射液20 ml/kg，⑤組小鼠ip 2%鹽酸甜菜堿20 ml/kg和復(fù)方丹參注射液20 ml/kg，其余兩組ip NS 20 ml/kg。

　　1.2.2  實(shí)驗(yàn)測定裝置  安裝小鼠耗氧量動(dòng)態(tài)變化測定裝置［3］，調(diào)整液面至定量管“0”刻度，備用。

　　1.2.3  實(shí)驗(yàn)觀察方法  小鼠第二次ip后10 min，將小鼠放入盛有鈉石灰的廣口瓶內(nèi)，使裝置密閉。立刻記錄實(shí)驗(yàn)開始時(shí)間，密切觀察小鼠的反應(yīng)。小鼠吸入O2，呼出CO2，CO2被鈉石灰吸收，裝置內(nèi)氣體壓力降低，燒杯內(nèi)的水在定量管內(nèi)上升。分別觀察和記錄實(shí)驗(yàn)開始后5、10 min時(shí)液面上升高度，作為小鼠的累計(jì)耗氧量；記錄各鼠從裝置密閉至呼吸停止的時(shí)間，為小鼠缺氧存活時(shí)間。

　　1.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
   
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行方差分析。

　　2  結(jié)果

　　2.1  對(duì)心肌耗氧量增加小鼠存活時(shí)間的影響
   
　　復(fù)方丹參注射液和鹽酸甜菜堿單用組小鼠缺氧存活時(shí)間較模型對(duì)照組延長，延長率分別為35.54%和27.27%，與模型對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而單用組二者相比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；聯(lián)用組缺氧存活時(shí)間與鹽酸甜菜堿組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05），與等劑量丹參注射液組相比，差別有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)果見表1、圖1。
2.2  對(duì)心肌耗氧量增加小鼠累計(jì)耗氧量的影響
   
　　小鼠放入密閉裝置后5 min、10 min定量管中液面上升的高度為5 min、10 min的累計(jì)耗氧量。結(jié)果表明，2%鹽酸甜菜堿和復(fù)方丹參注射液在20 ml/kg時(shí)可降低小鼠5 min、10 min的累計(jì)耗氧量，兩藥聯(lián)用組耗氧量明顯降低，療效優(yōu)于單用組（P<0.05）。見表2、圖2。

　　表1  復(fù)方丹參注射液和鹽酸甜菜堿對(duì)小鼠存活時(shí)間的影響（略）

　　注：1. F=7.827  P=0.000；2. a.與NS對(duì)照組比較 P<0.05， b.與模型對(duì)照組比較 P<0.05，c.與BTH組比較 P<0.05，d.與丹參注射液組比較 P<0.01
　　
　　表2  復(fù)方丹參注射液和鹽酸甜菜堿對(duì)小鼠累計(jì)耗氧量的影響（略）

　　注：1. 5min  F=4.639  P=0.003， 10min  F=4.821  P=0.003；2. a.與NS對(duì)照組比較 P<0.05，b.與模型對(duì)照組比較 P<0.05，c. 與BTH組比較 P<0.05，d.與丹參注射液組比較 P<0.05

　　圖1  各組小鼠缺氧時(shí)間的比較（略）

　　圖2  各組小鼠累計(jì)耗氧量的比較（略）

　　3  討論
   
　　丹參在臨床上主治心血管系統(tǒng)疾病，近年來研究顯示，丹參具有清除氧自由基、保護(hù)線粒體改善能量代謝、減輕鈣超載調(diào)節(jié)鈣穩(wěn)定作用。實(shí)驗(yàn)證明鹽酸甜菜堿可增強(qiáng)心肌缺氧小鼠的耐缺氧作用［5］，故本實(shí)驗(yàn)觀察復(fù)方丹參注射液和鹽酸甜菜堿對(duì)心肌缺氧小鼠的耐缺氧作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型對(duì)照組5min、10min累計(jì)耗氧量分別較正常對(duì)照組升高70.95%和56.51%，二者相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明異丙腎上腺素引起心肌耗氧量增加小鼠模型制備成功。實(shí)驗(yàn)所使用的小鼠耗氧量變化動(dòng)態(tài)測定裝置，可同時(shí)觀察小鼠的存活時(shí)間、不同時(shí)間的累計(jì)耗氧量及不同時(shí)間段的耗氧量，能夠客觀反映小鼠的耐缺氧能力。結(jié)果顯示：復(fù)方丹參注射液單用組，小鼠的存活時(shí)間較模型對(duì)照組延長，5 min、10 min累計(jì)耗氧量也較模型對(duì)照組降低，證實(shí)了復(fù)方丹參注射液在改善心肌缺氧方面的作用。提示丹參可通過抗氧化作用保護(hù)線粒體、鈣拮抗作用及擴(kuò)張血管等作用增加心肌供血供氧，也可能通過拮抗兒茶酚胺類遞質(zhì)降低耗氧量，發(fā)揮對(duì)心臟的保護(hù)作用，藥理實(shí)驗(yàn)和臨床結(jié)果是一致的。
        
　　甜菜堿是合成蛋氨酸、肉堿、肌酸、磷脂、腎上腺素等多種具有重要生理功能的物質(zhì)所必需的，甜菜堿參與甲基化反應(yīng)，可作為機(jī)體內(nèi)胱氨酸向蛋氨酸轉(zhuǎn)變的甲基供體，替代蛋氨酸的供甲基效能。研究表明，甜菜堿對(duì)呼吸酶具有保護(hù)作用，Pollard［6］等觀察到，甜菜堿對(duì)牛肝谷氨酸脫氫酶、豬心MDH、豬心谷—草轉(zhuǎn)氨酶活性有保護(hù)作用，推測甜菜堿對(duì)缺氧心肌具有保護(hù)作用可能是影響三羧酸循環(huán)中的某些酶活性實(shí)現(xiàn)的，但目前甜菜堿對(duì)酶的生理功能保護(hù)機(jī)制并不清楚，可能是甜菜堿包圍酶形成一層外殼，使酶免于其他因素引起其構(gòu)象、聚合—解聚等變化［7］。
   
　　本實(shí)驗(yàn)中復(fù)方丹參注射液和鹽酸甜菜堿單用組相比，累計(jì)耗氧量和存活時(shí)間均無差別，說明二者在改善心肌能量代謝方面沒有顯著的藥效差別。而二者聯(lián)用組，小鼠缺氧存活時(shí)間較單用組延長，5 min、10 min累計(jì)耗氧量也較單用組降低，提示兩藥聯(lián)用在改善心肌缺氧方面具有協(xié)同作用，具體機(jī)制尚不清楚。通過我們的實(shí)驗(yàn)，可以推測甜菜堿在改善心肌能量代謝方面有作用，有望開發(fā)成為治療心血管疾病的一種新藥，但需要做大量的研究，進(jìn)一步闡述其抗心肌缺氧的作用機(jī)制。

牛莫王

治療五號(hào)病心肌炎怎樣？？？

yangxue

甜菜堿的作用還真是廣泛，不知效果是否真的這么好。