桔梗乙醇提取物的急性及蓄積性毒性試驗

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　　桔梗乙醇提取物的急性及蓄積性毒性試驗

　　金錫九 張敏 張亞麗

　　(延邊大學農學院動物科學系，吉林省龍井市 133400)

　　摘要：本試驗用昆明種小白鼠對桔梗提取物進行了急性及蓄積性毒性試驗。經過試驗結果如下：急性試驗LD50>30360mg/Kg,蓄積性試驗所測指標實驗組與對照組無明顯差異。說明桔梗提取物對小白鼠無急性和蓄積性作用。
　　關鍵詞 桔梗提取物;小白鼠;急性試驗;蓄積性試驗
　　Platycodon grandiflorum alcohol extracts the thing impatient disposition and accumulates the toxicity experiment
　　Jin xijiu zhangmin zhang yali
　　(Zoology Department of Yanbian University , Longjing , Jilin Province 133400))
　　Abstract:This experiment withdrew the thing with the Kunming mice to the platicodon grandiflorum to carry on has been more systematic acute and the accumulation toxicity text. after the test result to be as follows：The acute tries LD50>30360mg/Kg，the accumulation toxicity text measured indicators experimental group and the control group there was no difference. Note Campanulaceae extract on mice without acute and accumulation role.
　　Keywords ：The platicodon grandiflorum withdraws the thing; mice; acute toxicity test, the accumulation toxicity text.
　　桔梗是吉林省有名的中草藥材之一，長白山區分布著非常豐富的桔梗種質資源，該地區具有發展桔梗的得天獨厚的地理優勢和資源優勢[1]。
　　桔梗含桔梗皂苷、桔梗酸、桔梗糖、菊糖等[2]。中醫臨床上桔梗主要用于寒熱虛實引起的咳嗽、痰喘[3]，近年來，作為藥食同源的傳統中藥，也用于免疫調節、抗炎、抗潰瘍、抗腫瘤、降血壓、降血脂、擴張血管、鎮痛、鎮靜、解熱、降血壓、降血糖、抗過敏等。藥理實驗表明桔梗有較多的生理活性，具有較大的研發價值[4。5]。為了研究桔梗提取物作為飼料添加劑并長期應用于畜禽產業中是否會引起毒害反應，因此特就桔梗提取物進行本項毒理試驗。希望通過本項試驗可以了解桔梗提取物的安全性，以及對家畜的限量標準，為合理的利用該添加劑提供理論依據。
　　1材料與方法
　　1.1 試驗材料
　　試驗動物 昆明種小白鼠由延邊大學醫學院實驗動物科提供。
　　受試物 桔梗提取物由延邊大學農學院動物營養實驗室提供。桔梗由延邊大學農學院農學系提供，系3年生，清洗干凈后，切片、低溫烘干。
　　1. 2 試驗動物的飼養標準
　　飼料為全價營養飼料，試驗組的飼料成份是在標準日糧的基礎上添加不同比例的桔梗提取物。飼養溫度22-25℃，濕度40%-60%，自然采光。基礎飼料成分見表1。
　　表1 小白鼠全價營養飼料配方

成 分	玉 米	豆 粕	芝麻粕	白 面	大 米	高 梁	麥 麩	草 粉	魚 粉	花 生	奶 粉	雞 蛋	骨 粉	食 鹽	礦物質	維 生 素
含量（%）	25	23	5	15	5	4	4	3	5	5	5	1.5	2	0.5	0.5	0.5

　　1.3實驗方法：
　　1.3.1桔梗提取物乙醇提取方法
　　取桔梗5kg洗凈烘干，將烘干的桔梗加入95%乙醇溶劑浸泡24小時，乙醇應將桔梗沒過30-40cm為宜，將乙醇用四層紗布放在漏斗中過濾，將過濾出的含有桔梗成分的浸提物倒入索氏提取器中進行回流，水浴鍋溫度為乙醇沸點80攝氏度，回流3次，將乙醇進行回收，將剩余的含有桔梗成分的液體進行水浴加熱，制成膏狀物取出放入冰箱內儲存待用。
　　1.3.2急性毒性試驗
　　取20～22g小白鼠，共設6組，每組10只，雌雄各半，按10000mg/Kg、13200mg/Kg、17420mg/Kg、23000mg/Kg、30360mg/Kg體重服毒，另設對照組。實驗組添加劑在7天內灌胃給藥，對照組灌服蒸餾水。小鼠禁食8小時(不禁水)后進行投毒給藥后3-4小時復食，給藥停止后連續觀察7天，并觀察小鼠精神、食欲、飲水、活動并記錄小白鼠的中毒情況、死亡時間和死亡數目。
　　1.3.3蓄積毒性試驗
　　取20～22g小白鼠，共設5組，每組10只，雌雄各半，按200mg/Kg、400mg/Kg、800mg/Kg、1600mg/Kg體重服毒，另設對照組。實驗組添加劑混入飼料中飼喂，對照組喂正常的無添加劑的飼料連續飼喂20天， 在給藥期間觀察小白鼠的精神、食欲、飲水及死亡情況和有無異常反應，給藥停止后觀察7天內小白鼠的死亡情況及體重和有無異常反應的一般變化。同時測量指標如下：
　　(1)一般性指標 記錄小鼠采食量，每周稱量小鼠體重。計算平均體增重、平均飼料采食總量、平均日飼料采食量、飼料料重比(F/G)。
　　平 均 體 增 重 = 實 驗 末 重 - 始重
　　平均飼料采食總量=試驗初的飼料量-試驗末的剩料量
　　平均日飼料采食量=總的飼料消耗量/試驗天數
　　飼料料重比(F/G)=平均日飼料采食量/平均日增重。
　　(2)臟器系數 取心、肝、脾、肺、腎稱重，計算臟器體重比值。
　　1.4數據統計
　　用SPSS11.5進行單因素方差分析，采用多個試驗組和一個對照組間的兩兩比較方法統計。試驗結果表示為平均值±標準差。
　　2 結果
　　2.1 急性毒性試驗
　　按10000mg/Kg、13200mg/Kg、17420mg/Kg、23000mg/Kg、30360mg/Kg劑量混飼后，7天后觀察，各劑量組小白鼠的精神、食欲、飲水等情況和對照組比較均無異常，未出現死亡及其它異常行為，按照毒理學評價標準，當LD50>15000mg /Kg時屬于實際無毒性物質，可不必測定半數致死量(LD50)。本試驗結果LD50>30360mg/Kg表明桔梗提取物作為中草藥添加劑屬于實際無毒類物質[6、7]。
　　2.2 蓄積性毒性試驗
　　按200mg/Kg、400mg/Kg、800mg/Kg、1600mg/Kg劑量混飼，連續飼喂20天，在給藥期間及7天觀察期內，各試驗組小白鼠未出現死亡，精神、飲食和飲水無異常同時也未出現其它異常行為，結果表明桔梗提取物無蓄積毒性作用。
　　2.2.1一般性指標測定
　　平均體增重、平均飼料采食總量、平均日飼料采食量見表2.
　　表2不同劑量的藥物對小白鼠生長的影響

項目	對照組	試驗組
劑量mg/kg	0	200	400	800	1600
觀察頭數（只）	10	10	10	10	10
供試天數（天）	20	20	20	20	20
平均始重（g）	18.46±1.92	18.62±1.32	18.75±1.78	18.44±1.71	18.62±1.53
平均末重（g）	38.64±2.29	37.56±3.20	37.98±2.57	38.82±1.13	38.38±5.10
耗料（g）	128.40± 8.1	130.07±2.49	130.40±6.19	130.17±5.70	134.63±6.94
凈增重（g）	20.18±0.26	18.94±1.96	19.23±2.86	20.38±0.20	19.76±1.68

　　注：與對照組比較，*P<0.05 ** P<0.01
　　由表2可知，經20天給藥后，各劑量組小白鼠的平均增加體重及每只耗料與對照組相比較差異不顯著(P>0.05)。
　　2.2.2 臟器系數的測定
　　在飼料中以200mg/Kg、400mg/Kg、800mg/Kg、1600mg/Kg劑量加入桔梗提取物飼喂小鼠20天，撲殺受試鼠，取主要臟器稱重，測定臟器系數。結果見表3。
　　表3 桔梗提取物對小鼠臟體比的影響

組別	心/體	肝/體	脾/體	肺/體	腎/體
對照組	0.439±0.055	4.307±0.148	0.345±0.047	0.570±0.071	1.034±0.066
200mg/Kg	0.443±0.054	4.398±0.313	0.351±0.075	0.609±0.075	1.139±0.110
400mg/Kg	0.451±0.041	4.627±0.409	0.341±0.113	0.618±0.081	1.142±0.054
800mg/Kg	0.408±0.044	4.540±0.349	0.350±0.088	0.693±0.22	1.033±0.126
1600mg/Kg	0.440±0.043	4.475±0.409	0.335±0.109	0.632±0.103	1.140±0.104

　　注：在不同組間不同字母表示差異顯著,大寫字母為P<0.01,小寫字母為P<0.05
　　由表3可知，給予受試物20天后，各試驗組與對照組之間臟器系數差異不顯著(P>0.05)，各試驗組間差異也不顯著(P>0.05)。
　　3 結論
　　3.1急性毒性試驗
　　當LD50>30360mg/Kg時小白鼠仍未出現死亡及其它異常行為，表明桔梗提取物屬于實際無毒類物質。
　　3.2蓄積試驗
　　20天給藥后，各試驗組和對照組的小白鼠均無異常表現和死亡，同時試驗組凈增重、耗料量及臟器系數的測定與對照組均無明顯差異。表明桔梗提取物無蓄積作用。
　　綜上所述，桔梗提取物屬于無毒性物質，如將其作為飼料添加劑應用于畜牧業生產中，便可以取代抗生素，在畜牧業生產中有著廣泛的應用前景。
　　參考文獻
　　[1] 鞏麗麗，石俊英. 桔梗近年來的研究進展[D]. 時珍國醫國藥，2006 17(3)：封3～封4
　　[2] 付文衛，竇德強，裴月湖.桔梗的化學成分和生物活性研究進展[J].沈陽藥科大學學報 2006 23(3)：184-191.
　　[3] 余椿生.桔梗[J].《食品與藥品A》2006(5)：75.
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　　[5] 宋楊，齊云.桔梗的藥理研究進展[J].中國藥房 2006，17(2)：140.
　　[6] 農業部 《新獸藥一般毒性試驗技術要求》[S]
　　[7] 袁伯佼,治喬 .藥臨床前安全性評價與實踐[M].醫學科學出版社,1997:11

海綿

今天學術性的不少