乙醚提取法（基準方法）己烷提取快速法

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　　GB/T 5535.1—1998

　　前 言

　　本標準是依據國際標準ISO 3596-1：1988《動植物油脂——不皂化物測定——第1部分：己醚提取法（第一方法）》對GB 5535—1985《植物油脂檢驗 不皂化物測定法》進行修訂的。在技術內容上與該國際標準等效，編寫規則及表述上按照GB/T 1.1—1993《標準化工作導則 第1單元：標準的起草與表述規則 第1部分：標準編寫的基本規定》的要求進行編寫的。

　　本標準由中華人民共和國國內貿易部提出。

　　本標準起草單位：國內貿易部谷物油脂化學研究所。

　　本標準主要起草人：郝希成、劉靜、應珊紅。

　　ISO前言

　　ISO（國際標準化組織）是由各國標準化團體（ISO成員團體）組成的世界性聯合會。制定國際標準的工作通常由ISO的技術委員會進行。各成員團體若對某技術委員會已確立的標準項目感興趣均有權參加該委員會的工作。與ISO聯系的各國際組織（官方的或非官方的）也可參加有關工作。在電工技術標準化方面，ISO與國際電工委員會（IEC）保持密切合作關系。

　　被技術委員會采用的國際標準草案由ISO委員會接受作為國際標準前需提交各成員團體通過。國際標準需取得至少75%參加表決的成員團體的通過，才能批準為正式ISO標準。

　　國際標準ISO 3596-1是由ISO/TC34農產食品技術委員會制定的，ISO 3596的總題目是《動物和植物脂肪和油——不皂化物測定》，由下列部分組成：

　　第1部分：乙醚提取法（基準方法）

　　第2部分：己烷提取快速法

　　ISO 3596的本部分的附錄A僅供參考。

　　國家質量技術監督局 1998—05—08 批準 1998—12—01 實施

　　GB/T 5535.1—1998

　　中華人民共和國國家標準

　　動植物油脂 不皂化物測定

　　第1部分：乙醚提取快速法

　　Animal and vegetable fats and oils—

　　Determination of unsaponifiable matter—

　　Part 1:Method using diethyl ether extraction (Reference method)

　　GB/T 5535.1—1998

　　eqv ISO 3596-1:1988

　　代替 GB 5535-85

　　1 范圍

　　本標準規定了用己醚提取測定動植物油脂不皂化物含量的第一方法。

　　本標準適用于所有油脂。不適用于蠟。而且對于高不皂化物含量的油脂僅能得到近似結果，如：海產動物油脂。

　　當氣候條件或環境不允許使用乙醚時可用己烷法。

　　2 引用標準

　　下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。在標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。

　　GB/T 15687—1995 油脂試樣制備（eqv ISO 661：1989）

　　3 定義

　　本標準采用下列定義。

　　不皂化物：在本標準規定的操作條件下，試樣用氫氧化鉀皂化后的全部生成物用一種特定的溶劑提取，蒸發溶劑、干燥后的殘留物。用質量百分含量表示。

　　注：不皂化物包括天然類脂物，如：甾醇、高分子脂肪醇及萜烯類化合物等。除此以外任何在103℃的溫度下被溶劑提取的不揮發的有機雜質（如礦物油）也可能存在。

　　4 原理

　　油脂與氫氧化鉀乙醇溶液在煮沸回流情況下進行皂化，用乙醚從肥皂液中提取不皂化物，蒸發溶劑并對殘留物干燥后稱重。

　　5 試劑

　　本標準所列試劑均為分析純，水為蒸餾水。

　　5．1 乙醚（HG 3-1002）：不含過氧化物和殘留物。

　　5．2 丙酮。

　　國家質量技術監督局 1998—05—08 批準 1998—12—01 實施

　　GB/T 5535.1—1998

　　5．3 氫氧化鉀（GB 2306）乙醇溶液：c(KOH)≈1 mol/L。

　　在50 mL水中溶解60 g氫氧化鉀然后用95%（V/V）乙醇稀釋至1000 mL。溶液應為無色或淺黃色。

　　5．3．1 氫氧化鉀乙醇溶液：c(KOH)≈0.5 mol/L。

　　5．4 氫氧化鉀標準溶液：c(KOH) ≈0.1 mol/L（用95%乙醇配制）

　　使用前必須知道溶液的準確濃度，并應經校正。使用最少五天前配制的溶液，移清液于棕色玻璃瓶中貯存，用橡皮塞塞緊。溶液應為無色或淺黃色。

　　5．5 酚酞（GB 10729）指示劑溶液：10 g/L的95%乙醇溶液。

　　6 儀器

　　6．1 圓底燒瓶：帶標準磨口的250 mL圓底燒瓶。

　　6．2 回流冷凝管：與燒瓶（6.1）磨口配套。

　　6．3 500 mL分液漏斗，最好使用聚四氟乙烯活塞和塞子。

　　6．4 水浴鍋

　　6．5 可保持（103±2）℃的電烘箱或真空干燥儀器，如旋轉蒸發器等相似儀器。

　　7 試樣制備

　　按GB/T 15687進行。

　　8 分析步驟

　　8．1 試樣

　　稱約5 g試樣（精確至0.01 g）放入250 mL燒瓶中（6.1）。

　　8．2 皂化

　　加50 mL氫氧化鉀溶液（5.3）和一些沸石。燒瓶與回流冷凝管(6.2)聯接好后煮沸回流1 h。停止加熱，從回流管項部加入100 mL水并旋搖。

　　8．3 不皂化物的提取

　　冷卻后轉移溶液到500 mL分液漏斗（6.3），用100 mL乙醚（5.1）分幾次洗涮燒瓶和沸石，將這些沖洗液倒入分液漏斗。蓋好塞子，用力搖1 min，倒轉分液漏斗小心打開活塞，間歇地釋放內壓。靜置分層后，盡量將下層皂液放入第二只分液漏斗中。

　　注：如果形成乳化液，可加少量乙醇或濃氫氧化鉀或氯化鈉破乳。

　　將乙醇肥皂水溶液提取兩次以上，每次用100 mL乙醚，并使用相同方法。收集三次乙醚提取液放入裝有40 mL水的分液漏斗中。

　　8．4 醚提取液的洗滌

　　輕輕轉動裝有40 mL水和提取液的混合液的分液漏斗。

　　注：劇烈搖動在此階段會形成乳化液。

　　完全分層后棄去下面水層。每次用40 mL水洗滌醚溶液兩次以上，并劇烈震搖，分層后棄去下面水層，排出洗滌液時需留2 mL，然后沿其軸線旋轉分液漏斗，等幾分鐘水層繼續收集。棄去水層，當醚溶液到達活塞口時關閉活塞。

　　先用40 mL氫氧化鉀溶液（5.3.1）后用40 mL水連續洗滌溶液兩次。最后按上法用40 mL水洗滌兩次以上。

　　繼續用水洗滌，直到加入一滴酚酞溶液（5.5）的洗滌液不再呈粉紅色為止。

　　8．5 蒸發溶劑

　　國家質量技術監督局 1998—05—08 批準 1998—12—01 實施

　　GB/T 5535.1—1998

　　通過分液漏斗的上口每次少量的將醚溶液定量轉移至預先在（103±2）℃的烘箱(6.5)中干燥，冷卻后稱重，稱準至0.1 mg的250 mL燒瓶（6.1）中。在沸水浴（6.4）上蒸餾回收溶劑。

　　加入5 mL丙酮，在緩緩的空氣流下，將揮發性溶劑完全蒸發。

　　8．6 殘留物的干燥和測定

　　殘留物在（103±2）℃的烘箱中干燥殘留物15 min，燒瓶水平放置。在干燥器中冷卻，并稱重準確至0.1 mg。

　　按上法重復干燥直至兩次稱重質量不超過1.5 mg。如果三次干燥后還不恒重，則不皂化物可能被污染，需重新進行測定。

　　當以游離脂肪酸的含量來校正殘留物的重量時，將稱重后的殘留物溶于4 mL乙醚中，然后加入20 mL預先中和到對酚酞指示液（5.3）呈淡粉色的乙醇。用氫氧化鉀溶液（5.4）滴定到相同的最終顏色。

　　用油酸計算游離脂肪酸的質量，并以此校正殘留物的質量（見第9章）。

　　8．7 測定次數

　　同一試樣需進行兩次測定。

　　8．8 空白試驗

　　用相同步驟及相同量的所有試劑，但不加試樣。如果殘留物超過1.5 mg，需對試劑和方法進行改進。

　　9 結果計算

　　不皂化物含量用樣品的質量百分含量表示，并按式（1）進行計算：

　　()100%0321×??=mmmm不皂化物 ………………（1）

　　式中：m0——試樣的質量，g；

　　m1——殘留物的質量，g；

　　m2——空白的殘留物質量，g；

　　m3——游離脂肪酸的質量，等于0.28Vc,g；

　　V——標準氫氧化鉀乙醇溶液的體積，mL；

　　c——氫氧化鉀乙醇標準溶液的準確濃度，mol/L。

　　用兩次測定的算術平均值作為結果。

　　10 試驗報告

　　試驗報告應規定得到結果的使用方法。還要對使用本標準沒有規定的任何方法以及任何可能影響結果的所有操作細節進行描述。

　　試驗報告應該包括樣品鑒定所需的完整資料。

　　國家質量技術監督局 1998—05—08 批準 1998—12—01 實施

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萃取實驗