豬口蹄疫鑒別診斷

小曉

　　豬口蹄疫的臨診癥狀主要是口、鼻、蹄、乳頭等部位出現水皰。發皰初期或之前，豬表現跛行。一般情況下主要靠這些臨診癥狀可初步診斷，但表現類似癥狀的還有豬水皰病、豬水皰疹（SVE）、水皰性口炎（VS）.因此，最終確診要靠實驗室診斷。

　　豬口蹄疫病原學診斷
　　1.病毒分離鑒定 病毒分離鑒定的首選病料是未破裂或剛破裂的水皰皮（液）,對新發病死亡的動物可采取脊髓、扁桃體、淋巴結組織等。將病料懸液凍融2次，4℃過夜（至少4h）浸毒。以3000r/min離心15min,除菌后取上清接種細胞。或加1/3體積氯仿混合搖振數分鐘，以3000r/min離心15min,取上清液裝入試管中，加棉塞，4℃過夜，氯仿揮發后，接種單層細胞。每份樣品接種2～4瓶細胞，另設對照2～4瓶。37℃靜止培養48～72h.每天觀察記錄，對照細胞形態應基本正常或少有衰老。接種了樣品的細胞如出現FMD病毒典型病變（CPE）,要及時取出并置-30℃凍存。無CPE的細胞瓶要觀察至72h,其后置于-30℃凍存作為第1代細胞/病毒液再盲傳，至少盲傳3代。凡出現CPE的樣品判定為陽性，無CPE的為陰性。為了進一步確定分離病毒的血清型，將出現CPE的細胞/病毒液用間接夾心ELISA等檢測方法定型。

　　2.補體結合試驗（CFT） CFT是根據抗原-抗體系統和溶血系統反應時均有補體參與的原理設計的，以溶血系統作為指示劑，限量補體測定病毒抗原。當病毒抗原與血清抗體發生特異反應形成復合物時，加入的補體因結合于該復合物而被消耗，溶血系統中沒有游離補體將不發生溶血，試驗顯示陽性。

　　3.病毒中和試驗（VNT） 口蹄疫病毒血清型劃分的依據是型間無交叉免疫保護性，VNT是型別鑒定的重要方法之一，其檢測結果可靠，缺點是動用活毒，且用時較長，只能在專門的實驗室中進行，無法推行于普通實驗室。

　　4.反向間接血凝試驗 FMD反向間接血凝試驗是將口蹄疫病毒抗體以化學方法偶聯于醛化的綿羊紅細胞上，當貼附于血細胞上的抗體與游離的抗原相遇時，形成抗原抗體凝集網絡，綿羊紅細胞也隨之凝集，出現肉眼可見的紅細胞凝集現象。反向間接血凝試驗可作為FMD病毒抗原型別鑒定的初步方法，該方法簡便、快捷，適合于田間使用。目前該法僅在前蘇聯國家和我國使用，西方國家很少應用，也未列入國際推薦方法。

　　5.反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR） PCR具備實驗診斷所要求的最重要的3個要素：①敏感，可將原樣品放大上百萬倍，使原本少得難以探察到的（Pg級）樣本擴增到能在紫外燈下肉眼可見；②特異，核酸片段與引物間的序列互補，使反應呈高度特異；③操作簡單快速。RT-PCR檢測的目標物是FMD病毒的RNA,通常以病毒材料為被檢樣品，可對各種動物組織和細胞來源的病毒材料進行檢測，擴增到的PCR片段測定核苷酸序列后，可以確定所屬的基因型和基因亞型，進而追蹤疫源。

　　6.間接夾心ELISA 國際口蹄疫參考試驗室建議，檢測口蹄疫病毒血清型應優先采用間接夾心ELISA,OIE和FAO也一致推薦使用該方法定型診斷。

　　豬口蹄疫抗體檢測
　　通過檢測動物體液中（主要是血清）特異性抗體，可對FMD病毒感染與免疫狀況做出診斷，通常采用病毒中和試驗和ELISA方法，這兩種方法也是國際貿易中指定方法。FMD病毒抗體檢測可用于以下幾個目的：①診斷急性感染，用同一試驗檢測急性期和康復期豬血清樣品，血清抗體陰轉陽或抗體滴度急劇上升表示發生了感染，但診斷的前提是豬無疫苗接種史；②證實豬未被感染，用于國際貿易；③在流行病學調查中檢測感染情況；④支持疫病撲滅計劃和后期檢測；⑤接種疫苗后效價測定。值得提示的是免疫豬有時抗體滴度很低，甚至檢測不到抗體，但攻毒后仍能保護。
　　豬口蹄疫新診斷技術進展
　　FMD診斷檢測技術正在不斷地改進和創新，已從血清學診斷技術領域擴展到了分子生物學診斷技術領域。這些新技術的最大優點體現在簡便、快速、精確、靈敏以及高通量化。

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實驗室加臨床癥狀鑒別診斷

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