微生態(tài)制劑對大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌體外拮抗試驗

華牧偉業(yè)

　　摘要 利用黑龍江省微生物研究所生產(chǎn)菌種乳酸菌和芽孢桿菌，由哈爾濱中科生物工程所生產(chǎn)的微生態(tài)活菌　　中藥發(fā)酵制劑-桿痢肽，體外觀察對大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌的抑制效果；同時給1 日齡健康羅曼商品代雛雞服用桿痢肽，然后人工感染大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌，觀察保護率。結(jié)果表明，桿痢肽對大腸桿菌和沙門氏菌的抑菌率分別為98.28%和95.91%；對人工感染大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌的保護率分別為90%和83.3%。
　　關(guān)鍵詞 微生態(tài)、中藥、益生素、發(fā)酵、活菌、桿痢肽、大腸桿菌、沙門氏菌、抑菌率、 保護率。
　　大腸桿菌和沙門氏菌導(dǎo)致的消化道疾病對養(yǎng)禽業(yè)危害嚴重，由于這兩種菌的血清型眾多，給疫苗防治帶來了困難，抗生素濫用又引起耐藥菌株的不斷增加，腸道菌群的失調(diào)，給治療帶來了更大的困難，同時還造成藥物的殘留危害人類健康。乳酸菌是動物消化道中的優(yōu)勢菌群，產(chǎn)生的有機酸（如乳酸、丁酸、醋酸等）、雙乙酰、過氧化氫、細菌代謝產(chǎn)物等化合物對導(dǎo)致消化道疾病的腐敗菌和病原菌具有抑制作用，而成為動物微生態(tài)制劑的主要組成菌種。該試驗利用哈爾濱中科生物工程有限公司生產(chǎn)的乳酸桿菌和芽孢桿菌制備的活菌中藥微生態(tài)制劑對雞白痢沙門氏菌和致病性大腸桿菌在體外進行攻擊，觀察其抑制效果；同時人工感染大腸桿菌和沙門氏菌觀察桿痢肽對雞的保護效果。
　　1 材料與方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 實驗菌株雞白痢沙門氏菌（C79-13）和大腸桿菌O78 由 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物與免疫學(xué)實驗室惠贈；乳酸菌和芽孢桿菌由哈爾濱中科生物工程有限公司生產(chǎn)。
　　1.1.2 實驗動物 1日齡健康羅曼商品代雛雞購于臨沂種雞場。
　　1.1.3 培養(yǎng)基MRS（Manna,Rogosa,Shape）肉湯培養(yǎng)基的配置分別稱取胰蛋白胨5 g，牛肉浸膏10g，酵母浸膏5 g，葡萄糖10 g，檸檬酸三銨1 g，醋酸鈉2.5 g，硫酸鎂0.05 g，硫酸錳0.025 g，磷酸氫二鈉1 g，吐溫-80 0.5 g，用蒸餾水定ml。用1 mol/L 的NaOH 和Hcl 調(diào)節(jié)至pH=7 左右，分裝，121℃滅菌15 min。營養(yǎng)瓊脂、大腸埃希菌選擇培養(yǎng)基（麥康凱培養(yǎng)基）、營養(yǎng)肉湯購自杭州微生物試劑公司。
　　1.2 方法
　　1.2.1 桿痢肽的制備：將芽孢桿菌、乳酸桿菌分別接入MRS 培養(yǎng)基中厭氧活化培養(yǎng)，作為菌種，然后擴大培養(yǎng)，并將菌液濃度調(diào)至108個/ml，兩種菌液等量混合再加入發(fā)酵中藥提取物即得復(fù)合菌中藥發(fā)酵制劑-桿痢肽。
　　1.2.2 抑菌試驗大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌分別接入營養(yǎng)肉湯和四硫磺酸鈉肉湯活化培養(yǎng)，將菌液濃度調(diào)配成108 個/ml，分別取菌濃度為108個/ml 的乳酸桿菌、芽孢桿菌、大腸桿菌和沙門氏菌1 ml 與20 ml 的MRS 培養(yǎng)液混合，37℃燭缸中培養(yǎng)48 h，用無菌生理鹽水作梯度稀釋后，涂布在營養(yǎng)瓊脂和各種選擇性培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)至菌落出現(xiàn)，計數(shù)各菌菌落數(shù)，同時分別以滅菌生理鹽水替代沙門氏菌和大腸桿菌菌液作陰性對照，以滅菌生理鹽水替代芽孢桿菌和乳酸桿菌作陽性對照。計菌落數(shù)，計算出對雞白痢沙門氏菌和大腸桿菌的抑制率。
　　抑制率 （致病菌陽性對照生長菌落數(shù)-混合菌生長菌落數(shù)）/致病菌陽性對照生長菌落數(shù)×100%
　　1.3 桿痢肽對人工感染大腸桿菌、沙門氏菌雛雞的預(yù)防試驗ZGw中國飼料行業(yè)信息網(wǎng)-立足飼料，服務(wù)畜牧
　　1 日齡羅曼商品代雛雞120 只（均為健雛，經(jīng)糞便檢查無大腸桿菌）公母各半，隨機分成4 組，每組30 只，分別標記為A、B、C、D 組，分籠飼養(yǎng)；A、B 組從1 日齡起按每只每天0.5 ml 的量在飲水中加入桿痢肽，C、D 組雞分別以滅菌生理鹽水替代；4 日齡時，A、C 組雞每只灌服4×108
　　個菌的沙門氏菌菌液，B、D 組雞每只灌服4×108個菌的雞大腸桿菌菌液，每天1 次，連攻2 d，攻毒后每天觀察，記錄每組雞的發(fā)病和死亡情況。1周后，試驗組A、B 組飲水中桿痢肽調(diào)整到每只每天1 ml，同樣要求3 h 飲完，試驗期為30 d。
　　2 結(jié)果
　　2.1  桿痢肽培養(yǎng)物體外對大腸桿菌和沙門氏菌的拮抗試驗結(jié)果（表1）
　　表1  桿痢肽對沙門氏菌和大腸桿菌的抑菌結(jié)果
　

菌種		陽性對照 菌落個數(shù)	陰性對照 菌落個數(shù)	混合菌培養(yǎng)菌落個數(shù)	抑菌率（%）
桿痢肽	沙門氏桿菌	0	3.6×10^10	6.7×10^9
	大腸桿菌	0	9.6×10^10	3.4×10^9
沙門氏菌		1.1×10^11	0	4.5×10^9	95.91
大腸桿菌		5.7×10^11	0	9.8×10^9	98.28

　　2.2 復(fù)合菌制劑對人工感染大腸桿菌和沙門氏菌的預(yù)防試驗結(jié)果（表2）
　　表2  桿痢肽對人工感染大腸桿菌

組別	攻毒雞數(shù)/只	陽性雞數(shù)/只	陽性率%	保護率%
A	30	5	16.7	83.3
B	30	3	10	90
C	30	20	100	0
D	30	20	100	0

　　3 討論
　　大腸桿菌病和雞白痢病是常見的雞消化道傳染病，目前此病在各種類型的養(yǎng)雞場均有不同程度的發(fā)生，對于禽類消化道疾病的治療仍以抗生素為主，但若抗生素使用不當，不僅達不到治療效果，反而導(dǎo)致體內(nèi)正常菌群失調(diào)或耐藥菌株的產(chǎn)生，近年來，生物制劑，特別是微生態(tài)制劑的深入研究與應(yīng)用，頗受人們的重視。本研究就以桿痢肽對大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌抑制作用等方面進行了深討，研究結(jié)果表明，由哈爾濱中科生物工程有限公司生產(chǎn)的復(fù)合菌中藥發(fā)酵制劑-桿痢肽，對大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌有明顯的抑制作用，抑制率分別達到95%以上；人工感染大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌的預(yù)防試驗表明，使用乳酸桿菌和芽孢桿菌組成的桿痢肽能夠抵抗大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌的感染，維護雞體的微生態(tài)平衡，其保護率分別達到80%以上。該菌劑便于口服進入腸道，可用于防治雞大腸桿菌和雞白痢沙門氏菌病，本實驗為開發(fā)拮抗作用強，調(diào)整菌群失調(diào)作用好，兼有提高機體免疫力的多功能微生態(tài)制劑提供了一定的依據(jù)。

王學(xué)寶

用賜美健給客戶的種雞場凈化沙門氏菌和大腸桿菌已經(jīng)多年了，非常有效！其他的很多益生菌也應(yīng)該有類似的效果，只要產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定耐儲存，能進入食道之后迅速激活，耐胃酸過胃后在腸道定植，繁殖速度快，分泌類殺菌素及左旋乳酸，抑制有害菌的繁殖，就一定有效果。

牧原養(yǎng)殖設(shè)備

大腸桿菌病和雞白痢病是常見的雞消化道傳染病，目前此病在各種類型的養(yǎng)雞場均有不同程度的發(fā)生