檢測益生素的幾種辦法

中ke小飯

益生菌不僅有很多種類（如芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌），其檢測方法也是非常之多。對不同的益生素，需要選擇適當(dāng)?shù)姆椒▉頇z測、計(jì)數(shù)。

目前常用的檢測是顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和平板計(jì)數(shù)法兩種，顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的最大優(yōu)點(diǎn)就是快速，而且此方法可以通用，即不同的益生菌種類都可以用同一方法檢測其數(shù)量；但其也有諸多缺點(diǎn)，如不能區(qū)分死菌和活菌，也不能區(qū)分形狀類似的不同益生菌，故其只能作為一種粗略、簡單的方法。而平板計(jì)數(shù)法卻可以克服顯微鏡計(jì)數(shù)法的缺點(diǎn)，但其對操作人員素質(zhì)及操作能力要求都比較高，需要比較專業(yè)人員來操作。
針對目前選擇以平板計(jì)數(shù)來進(jìn)行測量益生菌的含量為主，本文也就此方法作一簡單探討。
計(jì)數(shù)培養(yǎng)的稀釋度選擇
根據(jù)產(chǎn)品說明選擇適宜的稀釋度。
采用玻片直接涂布法，即在潔凈的玻片上劃1cm2正方形，然后吸取經(jīng)5～10倍稀釋的檢樣0.01mL涂布在方框內(nèi)，干燥固定后，先用甲醇處理5min再進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，判斷大概菌數(shù)和菌種，則可預(yù)測分離培養(yǎng)應(yīng)選擇的培養(yǎng)基和稀釋倍數(shù)，如不能判斷，即認(rèn)為每克樣品含菌數(shù)小于105。
培養(yǎng)基的選擇
根據(jù)涂布的預(yù)測與產(chǎn)品說明，選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基。
檢測的操作
稀釋：
準(zhǔn)確稱取益生素樣品10g，放入裝有90mL無菌水的玻璃瓶中，用手或振蕩機(jī)振蕩20min，靜置約20min，即成10-1稀釋液；再用10mL無菌吸管，吸取10-1菌液10mL移入裝有90mL無菌水的玻璃瓶中，充分震蕩，即成10-2稀釋液；以此類推，每次更換吸管連續(xù)稀釋，直到制成適當(dāng)稀釋度的菌懸液。
平板接種：
用1mL無菌吸管吸取適當(dāng)稀釋度的菌懸液1mL到一個滅菌平皿中，接種好三個平皿，再在培養(yǎng)皿中分別倒入已融化并冷卻至45-50℃左右的培養(yǎng)基，蓋好蓋子，趁熱輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使菌液與培養(yǎng)基混合均勻，冷凝后倒置37℃下培養(yǎng)48～72h后長出菌落后即可計(jì)數(shù)。
結(jié)果計(jì)算及說明：
將三個平皿的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每g益生素中所含的活菌數(shù)（如在10-8有30個菌落，即可計(jì)為3.0×109cfu/g或者cfu/mL）。選取菌落數(shù)在30-300之間的平皿作為菌落總數(shù)測定的標(biāo)準(zhǔn)。
討論
益生素菌種的質(zhì)量是微生態(tài)調(diào)節(jié)劑生產(chǎn)的關(guān)鍵和質(zhì)量保證，因此在生產(chǎn)前必須作如下鑒定：
(1)菌株染色形態(tài)與菌落均應(yīng)具典型特征；
(2)生化反應(yīng)與糖發(fā)酵均應(yīng)符合伯杰氏細(xì)菌分類的特征；
(3)對于乳酸菌類須測定其代謝產(chǎn)物中的有機(jī)酸；
(4)血清學(xué)檢查、凝聚試驗(yàn)，效價不低于原效價的1/2；
(5)毒性試驗(yàn):濃菌液給小白鼠腹腔注射或灌胃試驗(yàn)，小白鼠應(yīng)無不良反應(yīng)出現(xiàn)；
(6)必要時作遺傳學(xué)特征的鑒定。